生命科学関連特許情報
| タイトル： | 公表特許公報(A)_線維芽細胞増殖因子２１タンパク質 |
| 出願番号： | 2015517297 |
| 年次： | 2015 |
| IPC分類： | C07K 19/00,C07K 14/50,C12N 15/09,C12N 5/10,C12P 21/02,C07K 16/00,A61K 38/00,A61P 3/04,A61P 3/06,A61P 3/10 |
特許情報キャッシュ
ダーリン，ライアン ジェームス ディキンソン，クレイグ デュアン ドライバー，デイビッド アルバート ゴンシャルツ，マルゴジャータ ドナタ JP 2015527974 公表特許公報(A) 20150924 2015517297 20130605 線維芽細胞増殖因子２１タンパク質 イーライ リリー アンド カンパニー 594197872 小林 浩 100092783 大森 規雄 100120134 大賀 沙央里 100162617 鈴木 康仁 100104282 ダーリン，ライアン ジェームス ディキンソン，クレイグ デュアン ドライバー，デイビッド アルバート ゴンシャルツ，マルゴジャータ ドナタ US 61/658,104 20120611 US 61/777,386 20130312 C07K 19/00 20060101AFI20150828BHJP C07K 14/50 20060101ALI20150828BHJP C12N 15/09 20060101ALI20150828BHJP C12N 5/10 20060101ALI20150828BHJP C12P 21/02 20060101ALI20150828BHJP C07K 16/00 20060101ALI20150828BHJP A61K 38/00 20060101ALI20150828BHJP A61P 3/04 20060101ALI20150828BHJP A61P 3/06 20060101ALI20150828BHJP A61P 3/10 20060101ALI20150828BHJP JPC07K19/00C07K14/50C12N15/00 AC12N5/00 102C12P21/02 HC07K16/00A61K37/02A61P3/04A61P3/06A61P3/10 AP(BW,GH,GM,KE,LR,LS,MW,MZ,NA,RW,SD,SL,SZ,TZ,UG,ZM,ZW),EA(AM,AZ,BY,KG,KZ,RU,TJ,TM),EP(AL,AT,BE,BG,CH,CY,CZ,DE,DK,EE,ES,FI,FR,GB,GR,HR,HU,IE,IS,IT,LT,LU,LV,MC,MK,MT,NL,NO,PL,PT,RO,RS,SE,SI,SK,SM,TR),OA(BF,BJ,CF,CG,CI,CM,GA,GN,GQ,GW,KM,ML,MR,NE,SN,TD,TG),AE,AG,AL,AM,AO,AT,AU,AZ,BA,BB,BG,BH,BN,BR,BW,BY,BZ,CA,CH,CL,CN,CO,CR,CU,CZ,DE,DK,DM,DO,DZ,EC,EE,EG,ES,FI,GB,GD,GE,GH,GM,GT,HN,HR,HU,ID,IL,IN,IS,JP,KE,KG,KN,KP,KR,KZ,LA,LC,LK,LR,LS,LT,LU,LY,MA,MD,ME,MG,MK,MN,MW,MX,MY,MZ,NA,NG,NI,NO,NZ,OM,PA,PE,PG,PH,PL,PT,QA,RO,RS,RU,RW,SC,SD,SE,SG,SK,SL,SM,ST,SV,SY,TH,TJ,TM,TN,TR,TT,TZ,UA,UG,US,UZ,VC US2013044190 20130605 WO2013188181 20131219 31 20141211 4B024 4B064 4B065 4C084 4H045 4B024AA01 4B024BA21 4B024BA53 4B024CA04 4B024DA02 4B024EA04 4B024GA14 4B024HA03 4B064AG02 4B064AG27 4B064CA10 4B064CA19 4B064CC06 4B064CC12 4B064CC15 4B064CC24 4B064CD30 4B064CE10 4B064CE11 4B064CE12 4B064DA01 4B065AA90X 4B065AB01 4B065AC14 4B065BA02 4B065BA03 4B065BB11 4B065BB12 4B065BB32 4B065BC03 4B065BC07 4B065BD14 4B065CA24 4B065CA44 4C084AA02 4C084AA07 4C084BA01 4C084BA41 4C084BA50 4C084CA53 4C084NA14 4C084ZA701 4C084ZC331 4C084ZC351 4H045AA10 4H045AA11 4H045AA20 4H045AA30 4H045BA10 4H045BA41 4H045DA01 4H045DA76 4H045EA20 4H045FA74 4H045GA21 4H045GA22 4H045GA23 4H045GA26 本発明は、線維芽細胞増殖因子２１（ＦＧＦ２１）タンパク質、ＦＧＦ２１タンパク質を含む医薬組成物および２型糖尿病、肥満症、脂質異常症および／またはメタボリックシンドロームを治療する方法に関する。 ＦＧＦ２１は、グルコースおよび脂質ホメオスタシスの重要な代謝調節剤として機能するホルモンである。ＦＧＦ２１は、インスリンの機序とは異なる機序であるＧＬＵＴ１発現をアップレギュレートすることにより脂肪細胞内へのグルコース取込みを促進する。糖尿病性齧歯類およびサルでは、ヒトＦＧＦ２１は空腹時血清グルコース濃度を低下させ、トリグリセリド、インスリンおよびグルカゴンの空腹時血清濃度を減少させた。さらに、食餌性肥満の齧歯類モデルでは、ＦＧＦ２１の投与は用量依存法で累積的体重減少を引き起こした。そこでＦＧＦ２１には、糖尿病、肥満症、脂質異常症およびメタボリックシンドロームの治療における潜在的有用性がある。 ＦＧＦ２１タンパク質は、国際公開第２０１０／０４２７４７号、国際公開第２０１０／２８５１３１号および国際公開第２００９／１４９１７１号に記載されている。 ヒト野生型ＦＧＦ２１および公知のＦＧＦ２１タンパク質に関連する問題は、分子のインビボ（ｉｎ ｖｉｖｏ）半減期が短いこと、効力が低いこと、および／または医薬的に不安定なことである。そこで、長時間にわたり有効で、効力が高い、および／または安定性である代替ＦＧＦ２１タンパク質に対する必要が依然としてある。 本発明は、代替ＦＧＦ２１タンパク質を提供する。本発明の所定のＦＧＦ２１タンパク質は、ヒト野生型ＦＧＦ２１および当分野において開示されている公知のＦＧＦ２１タンパク質に比した利点を有する。これらの利点には、延長された半減期、改良された効力および／または改良された医薬的安定性を有することが含まれる。 改良された効力に加えて、本発明の所定のＦＧＦ２１タンパク質は、インビボでのタンパク質分解の低下、酸化に対する感受性の減少、高濃度で凝集する傾向の低下、哺乳動物細胞系における産生中の翻訳後修飾およびタンパク質分解のレベルの低下、および／または改良された化学的安定性を含む、効率的製造および／または治療用タンパク質としての製剤にとって有用である１つ以上の有益な安定性特性を有する。さらに、本発明のＦＧＦ２１タンパク質は、２型糖尿病、肥満症、脂質異常症および／またはメタボリックシンドロームを治療するために潜在的に有用である。 本発明は、アミノ酸配列が、融合した第１ポリペプチドおよび第２ポリペプチドからなり、該第１ポリペプチドはＩｇＧ４ Ｆｃ部分を含み、該Ｆｃ部分は抗体のヒンジ領域、ＣＨ２およびＣＨ３定常領域ドメインからなり、該第２ポリペプチドは配列番号１のアミノ酸配列を有するＦＧＦ２１タンパク質を含み、該第１ポリペプチドのＣ末端は該第２ポリペプチドのＮ末端にリンカーを介して融合しているＦＧＦ２１タンパク質を提供する。 さらに、本発明は、アミノ酸配列が、融合した第１ポリペプチドおよび第２ポリペプチドからなり、該第１ポリペプチドは配列番号１４のアミノ酸配列を有するＩｇＧ４ Ｆｃ部分を含み、該第２ポリペプチドは配列番号１のアミノ酸配列を有するＦＧＦ２１タンパク質を含み、該第１ポリペプチドのＣ末端は該第２ポリペプチドのＮ末端にリンカーを介して融合しているＦＧＦ２１タンパク質を提供する。 本発明は、アミノ酸配列が、融合した第１ポリペプチドおよび第２ポリペプチドからなり、該第１ポリペプチドは配列番号１４のアミノ酸配列を有するＩｇＧ４ Ｆｃ部分を含み、該第２ポリペプチドは配列番号１のアミノ酸配列を有するＦＧＦ２１タンパク質を含み、該第１ポリペプチドのＣ末端は該第２ポリペプチドのＮ末端に配列番号１１のアミノ酸配列を有するリンカーを介して融合しているＦＧＦ２１タンパク質をさらに提供する。 本発明は、アミノ酸配列が ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＡＨＰＩＰＤＳＳＰＬＬＱＦＧＧＱＶＲＱＲＹＬＹＴＤＤＡＱＱＴＥＣＨＬＥＩＲＥＤＧＴＶＧＣＡＡＤＱＳＰＥＳＬＬＱＬＫＡＬＫＰＧＶＩＱＩＬＧＶＫＴＳＲＦＬＣＱＲＰＤＧＡＬＹＧＳＬＨＦＤＰＥＡＣＳＦＲＥＤＬＫＥＤＧＹＮＶＹＱＳＥＡＨＧＬＰＬＨＬＰＧＤＫＳＰＨＲＫＰＡＰＲＧＰＡＲＦＬＰＬＰＧＬＰＰＡＬＰＥＰＰＧＩＬＡＰＱＰＰＤＶＧＳＳＤＰＬＲＬＶＥＰＳＱＬＲＳＰＳＦＥ（配列番号５）であるＦＧＦ２１タンパク質を提供する。 上述の配列番号５のＦＧＦ２１タンパク質は、配列番号１４のＩｇＧ４ Ｆｃ部分配列、ボールド体で特定した配列番号１１のリンカー配列（ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＡ）および下線を付した配列番号１のＦＧＦ２１タンパク質を含んでいる。 さらに、本発明は、アミノ酸配列が ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＡＨＰＩＰＤＳＳＰＬＬＱＦＧＧＱＶＲＱＲＹＬＹＴＤＤＡＱＱＴＥＣＨＬＥＩＲＥＤＧＴＶＧＣＡＡＤＱＳＰＥＳＬＬＱＬＫＡＬＫＰＧＶＩＱＩＬＧＶＫＴＳＲＦＬＣＱＲＰＤＧＡＬＹＧＳＬＨＦＤＰＥＡＣＳＦＲＥＸ１ＬＸ２ＥＤＧＹＮＶＹＱＳＥＡＨＧＬＰＬＨＬＰＧＤＫＳＰＨＲＫＰＡＰＲＧＰＡＲＦＬＰＬＰＧＬＰＰＡＬＰＥＰＰＧＩＬＡＰＱＰＰＤＶＧＳＳＤＰＬＲＬＶＥＰＳＱＬＸ３ＳＰＳＦＸ４Ｘ５（配列番号１５）であり、 Ｘ１はＬもしくはＤである、Ｘ２はＬもしくはＫである、Ｘ３はＲもしくはＬである、Ｘ４はＬもしくはＥである、およびＸ５はＧもしくは非存在であるＦＧＦ２１タンパク質を提供する。本発明は、Ｘ１はＤである、Ｘ２はＬもしくはＫである、Ｘ３はＬである、Ｘ４はＬである、およびＸ５はＧである配列番号１５のＦＧＦ２１タンパク質をさらに提供する。さらに、本発明は、Ｘ１はＬもしくはＤである、Ｘ２はＬもしくはＫである、Ｘ３はＲである、Ｘ４はＥである、およびＸ５は非存在である配列番号１５のＦＧＦ２１タンパク質を提供する。 本発明は、ＦＧＦ２１タンパク質が配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８および配列番号９からなる群から選択される、配列番号１５のＦＧＦ２１タンパク質を提供する。本発明は、ＦＧＦ２１タンパク質が配列番号８および配列番号９からなる群から選択される、配列番号１５のＦＧＦ２１タンパク質をさらに提供する。さらに、本発明は、ＦＧＦ２１タンパク質が配列番号５、配列番号６および配列番号７からなる群から選択される、配列番号１５のＦＧＦ２１タンパク質を提供する。最も好ましいＦＧＦ２１タンパク質は、配列番号５である。 本発明は、本発明のＦＧＦ２１タンパク質と、少なくとも１つの医薬上許容される担体、希釈剤または賦形剤とを含む医薬組成物をさらに提供する。 本発明は、患者において２型糖尿病、肥満症、脂質異常症および／またはメタボリックシンドロームを治療する方法であって、該患者に本発明のＦＧＦ２１タンパク質を投与することを含む方法をさらに提供する。 本発明は、患者において２型糖尿病、肥満症、脂質異常症および／またはメタボリックシンドロームを治療する方法であって、該患者に本発明の医薬組成物を投与することを含む方法をさらに提供する。 さらに、本発明は、療法に使用するための本発明のＦＧＦ２１タンパク質を提供する。好ましくは、本発明は、２型糖尿病、肥満症、脂質異常症および／またはメタボリックシンドロームの治療に使用するための本発明のＦＧＦ２１タンパク質を提供する。 さらに、本発明は、２型糖尿病、肥満症、脂質異常症および／またはメタボリックシンドロームを治療するための医薬品の製造における本発明のＦＧＦ２１タンパク質の使用を提供する。 本発明は、本発明の上述したＦＧＦ２１タンパク質をコードするポリヌクレオチドにさらに関する。 さらに、本発明は、本発明のＦＧＦ２１タンパク質をコードするポリヌクレオチドを提供し、ＦＧＦ２１タンパク質のアミノ酸配列は、融合した第１ポリペプチドおよび第２ポリペプチドからなり、該第１ポリペプチドはＩｇＧ４ Ｆｃ部分を含み、該Ｆｃ部分は抗体のヒンジ領域、ＣＨ２およびＣＨ３定常領域ドメインからなり、該第２ポリペプチドは配列番号１のアミノ酸配列を有するＦＧＦ２１タンパク質を含み、該第１ポリペプチドのＣ末端は該第２ポリペプチドのＮ末端にリンカーを介して融合している。 本発明は、ＦＧＦ２１タンパク質のアミノ酸配列が第２ポリペプチドに融合した第１ポリペプチドからなり、該第１ポリペプチドは配列番号１４のアミノ酸配列を有するＩｇＧ４ Ｆｃ部分を含み、該第２ポリペプチドは配列番号１のアミノ酸配列を有するＦＧＦ２１タンパク質を含み、該第１ポリペプチドのＣ末端は該第２ポリペプチドのＮ末端にリンカーを介して融合している本発明のＦＧＦ２１タンパク質をコードするポリヌクレオチドをさらに提供する。 さらに、本発明は、ＦＧＦ２１タンパク質のアミノ酸配列が、融合した第１ポリペプチドおよび第２ポリペプチドからなり、該第１ポリペプチドは配列番号１４のアミノ酸配列を有するＩｇＧ４ Ｆｃ部分を含み、該第２ポリペプチドは配列番号１のアミノ酸配列を有するＦＧＦ２１タンパク質を含み、該第１ポリペプチドのＣ末端は該第２ポリペプチドのＮ末端に配列番号１１のアミノ酸配列を有するリンカーを介して融合している本発明のＦＧＦ２１タンパク質をコードするポリヌクレオチドを提供する。 さらに、本発明は、本発明のＦＧＦ２１タンパク質をコードするポリヌクレオチドであって、該ＦＧＦ２１タンパク質のアミノ酸配列が ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＡＨＰＩＰＤＳＳＰＬＬＱＦＧＧＱＶＲＱＲＹＬＹＴＤＤＡＱＱＴＥＣＨＬＥＩＲＥＤＧＴＶＧＣＡＡＤＱＳＰＥＳＬＬＱＬＫＡＬＫＰＧＶＩＱＩＬＧＶＫＴＳＲＦＬＣＱＲＰＤＧＡＬＹＧＳＬＨＦＤＰＥＡＣＳＦＲＥＤＬＫＥＤＧＹＮＶＹＱＳＥＡＨＧＬＰＬＨＬＰＧＤＫＳＰＨＲＫＰＡＰＲＧＰＡＲＦＬＰＬＰＧＬＰＰＡＬＰＥＰＰＧＩＬＡＰＱＰＰＤＶＧＳＳＤＰＬＲＬＶＥＰＳＱＬＲＳＰＳＦＥ（配列番号５）であるポリヌクレオチドを提供する。 本発明は、ヌクレオチド配列が配列番号１３である本発明のＦＧＦ２１タンパク質をコードするポリヌクレオチドを提供する。 上述のタンパク質をコードするポリヌクレオチドは、ＲＮＡの形態もしくはＤＮＡの形態にあってよく、該ＤＮＡはｃＤＮＡおよび合成ＤＮＡを含む。該ＤＮＡは、二本鎖または一本鎖であってよい。本発明のタンパク質をコードするコーディング配列は、遺伝コードの冗長性または縮重の結果として変動する可能性がある。 本発明のタンパク質をコードするポリヌクレオチドは、以下の：該タンパク質についてのコーディング配列のみ、該タンパク質についてのコーディング配列および追加のコーディング配列、例えばリーダーもしくは分泌配列または前駆タンパク質配列；該タンパク質についてのコーディング配列および非コーディング配列、例えば該タンパク質についてのコーディング配列のイントロンもしくは非コーディング配列５’および／または３’末端を含んでいてよい。そこで、用語「タンパク質をコードするポリヌクレオチド」は、該タンパク質についてのコーディング配列だけではなく追加のコーディングおよび／または非コーディング配列、例えば配列番号１３もまた含んでいてよいポリヌクレオチドを含んでいる。 本発明のポリヌクレオチドは、配列が発現制御配列に機能的に連結した後に宿主細胞中で発現するであろう。発現ベクターは、典型的には宿主染色体ＤＮＡのエピソームもしくは一体部分のどちらかとして宿主生物内で複製可能である。一般に、発現ベクターは、所望のＤＮＡ配列で形質転換された細胞の検出を可能にするために、選択マーカー、例えばテトラサイクリン、ネオマイシンおよびジヒドロ葉酸レダクターゼを含有する。 本発明のＦＧＦ２１タンパク質は、例えばＣＨＯ、ＮＳ０、ＨＥＫ２９３もしくはＣＯＳ細胞などの哺乳動物細胞；例えば大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）もしくは蛍光菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ）などの細菌細胞；または真菌もしくは酵母細胞中で容易に生成できる。宿主細胞は、当分野において周知の技術を使用して培養される。好ましい哺乳動物宿主細胞は、グルタミンシンテターゼ（ＧＳ）発現系を含有するＣＨＯＫ１ＳＶ細胞系である（米国特許第５１２２４６４号明細書を参照）。 当該のポリヌクレオチド配列（例、ＦＧＦ２１のタンパク質および発現制御配列）を含有するベクターは、細胞宿主のタイプに依存して異なる周知の方法によって、宿主細胞内に転位させることができる。例えば、原核細胞に対しては一般に塩化カルシウム形質転換法が利用されるが、他方他の細胞宿主に対してはリン酸カルシウム処理もしくはエレクトロポレーション法を使用できる。 タンパク質精製の様々な方法を使用することができ、そのような方法は当分野において公知であり、例えば、Ｄｅｕｔｓｃｈｅｒ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １８２：８３−８９（１９９０） ａｎｄ Ｓｃｏｐｅｓ，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，ＮＹ（１９９４）に記載されている。 本発明は、ホモダイマーを製造する方法であって、該ホモダイマーの各ポリペプチドのアミノ酸配列は配列番号５であり、 ｉ）配列番号５のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む哺乳動物宿主細胞を、該ポリヌクレオチド配列が発現するような条件下で培養する工程と、 ｉｉ）ホモダイマーの各ポリペプチドのアミノ酸配列が配列番号５であるホモダイマーを該宿主細胞から回収する工程とを含む方法をさらに提供する。 本発明のＦＧＦ２１タンパク質は、哺乳動物細胞中で発現した場合はホモダイマーである。本明細書で使用する「ホモダイマー」は、Ｆｃ部分内の非共有結合相互作用および分子間ジスルフィド結合を通して結び付いている同一アミノ酸配列（例えば、配列番号５）を有する本発明の２つのＦＧＦ２１タンパク質を意味する。 本発明は、アミノ酸配列が、融合した第１ポリペプチドおよび第２ポリペプチドからなり、該第１ポリペプチドはＩｇＧ４ Ｆｃ部分を含み、該Ｆｃ部分は抗体のヒンジ領域、ＣＨ２およびＣＨ３定常領域ドメインからなり、該第２ポリペプチドは配列番号１のアミノ酸配列を有するＦＧＦ２１タンパク質を含み、該第１ポリペプチドのＣ末端は該第２ポリペプチドのＮ末端にリンカーを介して融合しているＦＧＦ２１タンパク質のホモダイマーを提供する。 さらに、本発明は、アミノ酸配列が、融合した第１ポリペプチドおよび第２ポリペプチドからなり、該第１ポリペプチドは配列番号１４のアミノ酸配列を有するＩｇＧ４ Ｆｃ部分を含み、該第２ポリペプチドは配列番号１のアミノ酸配列を有するＦＧＦ２１タンパク質を含み、該第１ポリペプチドのＣ末端は該第２ポリペプチドのＮ末端にリンカーを介して融合しているＦＧＦ２１タンパク質のホモダイマーを提供する。 本発明は、アミノ酸配列が、融合した第１ポリペプチドおよび第２ポリペプチドからなり、該第１ポリペプチドは配列番号１４のアミノ酸配列を有するＩｇＧ４ Ｆｃ部分を含み、該第２ポリペプチドは配列番号１のアミノ酸配列を有するＦＧＦ２１タンパク質を含み、該第１ポリペプチドのＣ末端は該第２ポリペプチドのＮ末端に配列番号１１のアミノ酸配列を有するリンカーを介して融合しているＦＧＦ２１タンパク質のホモダイマーをさらに提供する。 本発明は、アミノ酸配列が ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＡＨＰＩＰＤＳＳＰＬＬＱＦＧＧＱＶＲＱＲＹＬＹＴＤＤＡＱＱＴＥＣＨＬＥＩＲＥＤＧＴＶＧＣＡＡＤＱＳＰＥＳＬＬＱＬＫＡＬＫＰＧＶＩＱＩＬＧＶＫＴＳＲＦＬＣＱＲＰＤＧＡＬＹＧＳＬＨＦＤＰＥＡＣＳＦＲＥＤＬＫＥＤＧＹＮＶＹＱＳＥＡＨＧＬＰＬＨＬＰＧＤＫＳＰＨＲＫＰＡＰＲＧＰＡＲＦＬＰＬＰＧＬＰＰＡＬＰＥＰＰＧＩＬＡＰＱＰＰＤＶＧＳＳＤＰＬＲＬＶＥＰＳＱＬＲＳＰＳＦＥ（配列番号５）であるＦＧＦ２１タンパク質のホモダイマーを提供する。 上述の配列番号５のＦＧＦ２１タンパク質は、配列番号１４のＩｇＧ４ Ｆｃ部分配列、ボールド体で特定した配列番号１１のリンカー配列（ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＡ）および下線を付した配列番号１のＦＧＦ２１タンパク質を含んでいる。 さらに、本発明は、アミノ酸配列が ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＡＨＰＩＰＤＳＳＰＬＬＱＦＧＧＱＶＲＱＲＹＬＹＴＤＤＡＱＱＴＥＣＨＬＥＩＲＥＤＧＴＶＧＣＡＡＤＱＳＰＥＳＬＬＱＬＫＡＬＫＰＧＶＩＱＩＬＧＶＫＴＳＲＦＬＣＱＲＰＤＧＡＬＹＧＳＬＨＦＤＰＥＡＣＳＦＲＥＸ１ＬＸ２ＥＤＧＹＮＶＹＱＳＥＡＨＧＬＰＬＨＬＰＧＤＫＳＰＨＲＫＰＡＰＲＧＰＡＲＦＬＰＬＰＧＬＰＰＡＬＰＥＰＰＧＩＬＡＰＱＰＰＤＶＧＳＳＤＰＬＲＬＶＥＰＳＱＬＸ３ＳＰＳＦＸ４Ｘ５（配列番号１５）であり、 Ｘ１はＬもしくはＤである、Ｘ２はＬもしくはＫである、Ｘ３はＲもしくはＬである、Ｘ４はＬもしくはＥである、およびＸ５はＧもしくは非存在であるＦＧＦ２１タンパク質のホモダイマーを提供する。本発明は、Ｘ１はＤである、Ｘ２はＬもしくはＫである、Ｘ３はＬである、Ｘ４はＬである、およびＸ５はＧである配列番号１５のＦＧＦ２１タンパク質のホモダイマーをさらに提供する。さらに、本発明は、Ｘ１はＬもしくはＤである、Ｘ２はＬもしくはＫである、Ｘ３はＲである、Ｘ４はＥである、およびＸ５は非存在である配列番号１５のＦＧＦ２１タンパク質のホモダイマーを提供する。 本発明は、ＦＧＦ２１タンパク質が配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８および配列番号９からなる群から選択される、配列番号１５のＦＧＦ２１タンパク質のホモダイマーを提供する。本発明は、ＦＧＦ２１タンパク質が配列番号８および配列番号９からなる群から選択される、配列番号１５のＦＧＦ２１タンパク質のホモダイマーをさらに提供する。さらに、本発明は、ＦＧＦ２１タンパク質が配列番号５、配列番号６および配列番号７からなる群から選択される、配列番号１５のＦＧＦ２１タンパク質のホモダイマーを提供する。最も好ましいＦＧＦ２１タンパク質は、配列番号５である。 本発明は、本発明の上述したＦＧＦ２１タンパク質のホモダイマーをコードするポリヌクレオチドにさらに関する。 本発明は、本発明のＦＧＦ２１タンパク質のホモダイマーと、少なくとも１つの医薬上許容される担体、希釈剤または賦形剤とを含む医薬組成物をさらに提供する。 本発明は、患者において２型糖尿病、肥満症、脂質異常症および／またはメタボリックシンドロームを治療する方法であって、該患者に本発明のＦＧＦ２１タンパク質のホモダイマーを投与することを含む方法をさらに提供する。 さらに、本発明は、療法に使用するための本発明のＦＧＦ２１タンパク質のホモダイマーを提供する。好ましくは、本発明は、２型糖尿病、肥満症、脂質異常症および／またはメタボリックシンドロームの治療に使用するための本発明のＦＧＦ２１タンパク質のホモダイマーを提供する。 さらに、本発明は、２型糖尿病、肥満症、脂質異常症および／またはメタボリックシンドロームを治療するための医薬品の製造における本発明のＦＧＦ２１タンパク質のホモダイマーの使用を提供する。 本発明のＦＧＦ２１タンパク質は、Ｆｃ部分内の高度に保存されたＮ−グリコシル化部位でグリコシル化されてよい。さらに、本発明のＦＧＦ２１タンパク質は、哺乳動物細胞中で発現した場合はホモダイマーである。本明細書で使用する「ホモダイマー」は、Ｆｃ部分内の非共有結合相互作用および分子間ジスルフィド結合を通して結び付いている同一アミノ酸配列、例えば配列番号５を有する本発明の２つのＦＧＦ２１タンパク質を意味する。 全長ヒト野生型ＦＧＦ２１は、２７アミノ酸シグナルペプチドを含有する２０８アミノ酸ポリペプチドである。成熟ヒト野生型ＦＧＦ２１は、１８１アミノ酸ポリペプチド（配列番号２）を生じさせる、２７アミノ酸シグナルペプチドを含まない全長ポリペプチドを含んでいる。 本発明のＦＧＦ２１タンパク質のアミノ酸位置における変化は、ＩｇＧ４ Ｆｃ部分およびリンカーを含まない、成熟ヒト野生型ＦＧＦ２１（配列番号２）のポリペプチド内のアミノ酸位置から決定される。例えば、配列番号５のＦＧＦ２１タンパク質のＩｇＧ４ Ｆｃ部分は、アミノ酸１〜２２８を含んでおり、配列番号５のＦＧＦ２１タンパク質のリンカーはアミノ酸２２９〜２４４を含んでおり、配列番号５のＦＧＦ２１タンパク質のＦＧＦ２１タンパク質はアミノ酸２４５〜４２４を含んでいる。そこで本明細書で「Ａ３１Ｃ」と記載する置換は、成熟ヒト野生型ＦＧＦ２１の３１位での野生型アミノ酸Ａｌａとのアミノ酸Ｃｙｓの置換を意味する。 特定タンパク質内の１つのアミノ酸残基の置換は該タンパク質全体の特性に影響を及ぼす可能性があること、および全体的作用は薬理学的効力および／または医薬的安定性にとって有益または有害な可能性があることに留意することが重要である。例えば、１つのアミノ酸置換Ｐ１１５ＷはＦＧＦ２１タンパク質の効力を増加させる；しかし、Ｐ１１５Ｗはさらに、凝集を誘発する自己会合の原因になると考えられている。このため、この全体的作用は該タンパク質にとって有害であるので、置換Ｐ１１５Ｗは本発明のＦＧＦ２１タンパク質内には含まれない。また別の実施例は、ＦＧＦ２１タンパク質の効力を増加させるアミノ酸置換Ｒ１７５Ｌに関する。しかし、Ｒ１７５Ｌ置換を有するＦＧＦ２１タンパク質はタンパク質分解に感受性であることが見いだされたので、このためこの全体的作用は有害であった。本発明のＦＧＦ２１タンパク質を用いて観察されるＣ末端タンパク質分解に対応するために、１８０位および１８１位のアミノ酸（１８０位のＬおよび１８１位のＧ）は、１８０位でアミノ酸Ｅと置換し、１８１位のアミノ酸は欠失させる。これらの修飾は、Ｃ末端タンパク質分解を実質的に減少させるが、それだけではなくヒト２９３細胞−βＫｌｏｔｈｏ−ＳＲＥ ｌｕｃアッセイにおいて測定するとＦＧＦ２１タンパク質の薬理学的効力を２５分の１に低下させる。驚くべきことに、１７５位のアミノ酸残基（Ｒ１７５Ｌ）を野生型Ｒに復帰させることにより効力が回復される。このため、この置換（Ｒ１７５Ｌ）の全体的作用は該タンパク質にとって有害であるので、置換Ｒ１７５Ｌは本発明の好ましいＦＧＦ２１タンパク質内には含まれない。 本発明の所定のＦＧＦ２１タンパク質は、実施例２および３において配列番号５について証明したように強力な生物活性タンパク質である。本発明の好ましいＦＧＦ２１タンパク質は、効力を一緒に改良するだけではなく、順に改良された安定性特性および増加したインビボ安定性を提供できる他のアミノ酸変化と適合性であるアミノ酸置換を含有している。効力を改良する本発明の好ましいＦＧＦ２１タンパク質におけるアミノ酸置換には、Ｄ１２７Ｋ、Ｓ１６７ＲおよびＧ１７４Ｌが含まれる（実施例２および３を参照）。 医薬保存剤、例えばｍ−クレゾールへのヒト野生型ＦＧＦ２１の濃縮タンパク質溶液の曝露は、本タンパク質が凝集体を形成する傾向を増加させる。追加のジスルフィド結合の導入を通しての構造的安定化は、ヒト野生型ＦＧＦ２１の保存適合性ならびに熱安定性を改良する。本発明のＦＧＦ２１タンパク質は、生物活性を危険に曝すことなく熱安定性および保存適合性を大きく改良するアミノ酸置換Ａ３１ＣおよびＧ４３Ｃを組み込んでいる。Ａ３１Ｃ／Ｇ４３Ｃ置換もまたさらに含む高効力ＦＧＦ２１タンパク質については以前に記載されている。それらの報告されたタンパク質は、野生型ＦＧＦ２１に比較して有意に改良された保存適合性を提示するが、それらは依然として保存剤の存在下で凝集する傾向がある。このタンパク質凝集は、免疫原性のリスクを増加させ、それにより該タンパク質の治療用タンパク質としての受容性を減少させる。 ＦＧＦ２１タンパク質のＦｃ部分への融合は、さらに自己会合をより顕著にさせる。この挙動は、自己相互作用および凝集を安定化させるアビディティをもたらす可能性があるＦｃ融合のホモダイマー構造に起因する可能性がある。 本発明の好ましいタンパク質には、驚くべきことに高濃度で生じる高分子量凝集体形成が有意に低いアミノ酸置換Ｌ９８ＤおよびＬ１００Ｋが含まれる。有益にも、アミノ酸置換Ｌ９８ＤおよびＬ１００Ｋは、該タンパク質の効力を減少させず、有害な凝集問題を最小限に抑える。 本発明のＦＧＦ２１タンパク質を製造するために好ましい市販の発現系は、哺乳動物ＣＨＯ−Ｋ１細胞系である。しかし哺乳動物細胞系ＣＨＯ−Ｋ１およびＨＥＫ２９３は、１７９位でのチロシン側鎖の硫酸化を通して成熟ヒト野生型ＦＧＦ２１への翻訳後修飾を誘発する可能性がある。１７９位および（存在する場合は）１８０位でのチロシン残基の硫酸化は、効力を減少させるので、産物不均質性の望ましくない原因である。そこで、１７９位および／または１８０位でＴｙｒを有するＦＧＦ２１タンパク質がＣＨＯ−Ｋ１もしくはＨＥＫ２９３細胞系から発現すると、一部の割合の発現したタンパク質は１７９位で硫酸化され、その他は１８０位で硫酸化される可能性があるが、他方その他は両方の位置で硫酸化され、一部はいずれの位置でも硫酸化されない場合がある。これは、効力が低下している、不均質で予測できないタンパク質集団をもたらす。 本発明の好ましいＦＧＦ２１タンパク質には、この有害な硫酸化を解決したアミノ酸置換が含まれる。そこで、該タンパク質内にはアミノ酸置換Ｙ１７９Ｆが組み込まれている。Ｙ１７９Ｆは、ＣＨＯ−Ｋ１およびＨＥＫ２９３細胞中での産生の結果として生じる硫酸化を排除する。さらに、アミノ酸置換Ｙ１７９Ｆは、本発明の他の好ましいアミノ酸置換と適合性であり、効力に関して中立の変化であると決定されている。 ヒト野生型ＦＧＦ２１は、インビボでのタンパク質分解に感受性である。マウスもしくはカニクイザルへの野生型ＦＧＦ２１の静脈内もしくは皮下注射後の血清から回収された大きなタンパク質分解フラグメントは、１７１位で終了するフラグメントである。残基１〜１７１に及ぶＦＧＦ２１フラグメントは、インビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）効力アッセイにおいて効力が約１００分の１であると決定されている。そこで、このタンパク質分解切断部位を排除すると、活性薬物への曝露を増加させることによって薬物有効性を改良できる。アミノ酸置換Ｇ１７０Ｅは、マウスにおいて切断を有意に緩徐化し、カニクイザルにおいて２４時間後に測定すると１７１位でのタンパク質分解を実質的に排除することが証明されている。Ｇ１７０Ｅ置換は効力に影響を及ぼさず、所望の物理化学的安定性プロファイルと適合性である。このため、アミノ酸置換Ｇ１７０Ｅは、本発明のＦＧＦ２１タンパク質内に組み込まれている。 ヒト野生型ＦＧＦ２１は、さらにＣＨＯ−Ｋ１の製造において産生するカルボキシペプチダーゼに感受性であり、アミノ酸置換Ａ１８０Ｅおよび１８１位でのアミノ酸欠失はこのプロセッシングを緩徐化し、これにより発現したタンパク質の長さの不均質性（つまり、該細胞系によって発現した成熟タンパク質内のアミノ酸残基数における不均質性）を減少させる。アミノ酸置換Ａ１８０Ｅおよび１８１位でのアミノ酸欠失は、哺乳動物細胞発現におけるＣ末端タンパク質分解を排除しないが、本発明のＦＧＦ２１タンパク質内で見いだされる他の所望のアミノ酸置換の状況における効力を維持しながらタンパク質分解を緩徐化することに極めて有効である。この有利な特性を考慮に入れて、アミノ酸置換Ａ１８０Ｅおよび１８１位でのアミノ酸欠失が本発明の好ましいＦＧＦ２１タンパク質内に組み込まれている。 本発明のＦＧＦ２１タンパク質は、免疫グロブリンのＦｃ部分にリンカーを介して融合している。本発明のＦＧＦ２１タンパク質のために使用されるＦｃ部分は、ＩｇＧ４ Ｆｃ部分に由来する。本発明のＦＧＦ２１タンパク質が、ヒトＩｇＧ４に由来するが野生型ヒト配列に比較して１つ以上の置換を含むＦｃ部分を含有していることがより一層好ましい。本明細書で使用する免疫グロブリンのＦｃ部分は、免疫学の分野においてこの用語に一般に与えられている意味を有する。詳細には、この用語は、抗体からの２つの抗原結合領域（Ｆａｂフラグメント）を含有していない抗体フラグメントを意味する。Ｆｃ部分は、抗体のヒンジ領域、ＣＨ２およびＣＨ３定常領域ドメインからなる。 当分野では、抗体の哺乳動物発現がグリコシル化を生じさせることは周知である。典型的には、グリコシル化は、抗体のＦｃ部分内の高度に保存されたＮ−グリコシル化部位で発生する。Ｎ−グリカンは、典型的にはアスパラギンに付着する。 そこで、本発明のＦＧＦ２１タンパク質は、本発明のＦＧＦ２１タンパク質に融合した免疫グロブリンのヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域に由来する。好ましくは、ＦＧＦ２１タンパク質のＦｃ部分は、配列番号１４の配列 ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧ（配列番号１４）を含んでいる。 本発明のＦＧＦ２１タンパク質のＮ末端アミノ酸は、該Ｆｃ部分の各重鎖のＣ末端へＬと指名されたグリシンリッチリンカー（Ｇ−リッチ）を介して融合しているが、Ｌのすぐ前にある数字は該Ｆｃ部分から該ＦＧＦ２１タンパク質を分離しているリンカー繰り返しユニットの数を意味している。リンカーユニットは、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ配列（配列番号１０）と規定されている。該リンカーは、場合により、複数のリンカー繰り返しが使用される場合は最終Ｓｅｒに連結したＡｌａを含有している。 本発明のＦＧＦ２１タンパク質のＦｃ部分は、好ましくは、１Ｌと指定されたＧ−リッチペプチドリンカー−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−（配列番号１０）の１つ、２もしくは３つの繰り返しを介して一緒に融合されている。本発明の追加のＧ−リッチリンカーは、２Ｌと指定された配列−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ａｌａ（配列番号１２）および３Ｌと指定された−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ａｌａ（配列番号１１）を含んでいる。本発明の最も好ましいグリシンリッチリンカーは、リンカー３Ｌ、−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ａｌａ（配列番号１１）である。 ＩｇＧ４ ＦｃがＩｇＧ４抗体の両方の重鎖由来の定常領域から構成されることは理解されている。そこで、本発明のＦＧＦ２１タンパク質は、各ＩｇＧ４ Ｆｃ部分ポリペプチドの各Ｃ末端に同一アミノ酸配列を有する２つのＦＧＦ２１タンパク質とＧ−リッチリンカーを介して融合したＩｇＧ４ Ｆｃ部分から構成される。 本発明のＦＧＦ２１タンパク質の医薬組成物は、２型糖尿病、肥満症、脂質異常症および／またはメタボリックシンドロームを治療するという一般に企図された目的を達成する当分野において公知の任意の手段によって投与することができる。好ましい投与経路は、非経口である。投与される用量は、レシピエントの年齢、健康状態および体重、存在する場合は併用療法の種類、治療頻度および所望の作用の性質に依存するであろう。典型的な用量レベルは、標準臨床技術を使用して最適化することができ、投与様式および患者の状態に依存するが、当業者であれば決定できる。 本発明のＦＧＦ２１タンパク質は、医薬上有用な組成物を製造するための公知の方法にしたがって調製される。所望の製剤は、適切な希釈剤または最適の医薬上許容される担体、保存剤、賦形剤もしくは安定化剤を含む高純度の水溶液を用いて再構成される安定性凍結乾燥産物である［Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ，Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，１９ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｇｅｎｎａｒｏ，ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ １９９５］。 本発明のＦＧＦ２１タンパク質は、医薬上許容されるバッファー、ならびに許容できる安定性および投与のために許容されるｐＨを提供するために調整されたｐＨを用いて調製できる。さらに、本発明のＦＧＦ２１組成物は、例えばバイアル、カートリッジ、ペン型送達器具、シリンジ、静脈内投与用チュービングもしくは静脈内投与用バッグなどの容器内に配置できる。 用語「脂質異常症」は、リポタンパク質過剰産生もしくは欠損症を含むリポタンパク質代謝の障害を意味する。脂質異常症は、血液中の総コレステロール、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）コレステロールおよびトリグリセリド濃度の上昇および／または高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）コレステロール濃度の減少によって発現する可能性がある。 用語「メタボリックシンドローム」は、１人の人間における一群のメタボリックリスク因子を特徴とする。これらのリスク因子には、腹部脂肪−大多数の男性において、１０２ｃｍ（４０インチ）以上のウエスト；絶食後高血糖−少なくとも１１０ｍｇ／ｄｌ（ミリグラム／デシリットル）；高トリグリセリド−血流中で少なくとも１５０ｍｇ／ｄＬ；低ＨＤＬ−４０ｍｇ／ｄｌ未満；および／または１３０／８５以上の血圧が含まれる。 用語「肥満症」は、脂肪の少ない体に比して皮下脂肪が過剰な状態であると定義されている（Ｓｔｅｄｍａｎ’ｓ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ２８ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，２００６，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ）。 「患者」は、哺乳動物、好ましくはヒトである。 用語「治療すること」（または「治療する」もしくは「治療」）は、存在する症状、障害、状態または疾患の進行もしくは重症度を緩徐化する、減少させる、または反転させることを意味する。 用語「治療有効量」は、患者への単回もしくは複数回投与後に所望の治療を提供する、本発明のタンパク質の量もしくは用量を意味する。 用語「２型糖尿病」は、インスリンを利用できるにもかかわらず過剰なグルコース産生を特徴とし、循環中グルコース濃度は不十分なグルコースクリアランスの結果として過度に高いままである。 本発明は、以下の実施例を参照することによって実施できる。しかし、これは本発明の範囲を限定すると解釈すべきではない。さらに、実施例に記載および例示した本発明のＦＧＦ２１タンパク質は、哺乳動物細胞中で発現するので、このためホモダイマーである。 実施例１ ＣＨＯＫ１ＳＶ細胞中でのＦＧＦ２１タンパク質の発現 本発明のＦＧＦ２１タンパク質は、ＣＨＯＫ１ＳＶ細胞を使用して哺乳動物細胞発現系中で産生させる。本発明のＦＧＦ２１タンパク質をコードする遺伝子をグルタミンシンテターゼ（ＧＳ）含有発現プラスミド骨格（ｐＥＥ１２．４をベースとするプラスミド）内にサブクローニングする。本発明のＦＧＦ２１タンパク質をコードするｃＤＮＡ配列は、組織培養培地中への所望の産物の分泌を強化するために好ましいシグナルペプチド配列のコーディング配列とインフレームで融合させる。好ましいシグナルペプチド配列は、アミノ酸配列の配列番号３および配列番号４に示したポリペプチドである。 発現は、ウイルス性サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーターによって駆動される。ＣＨＯＫ１ＳＶ細胞は、エレクトロポレーションおよび適切な量の組換え発現プラスミドを用いてトランスフェクトされ、トランスフェクト細胞は、適正な細胞密度で懸濁培養中で維持される。トランスフェクト細胞の選択は、メチオニンスルホキシイミン（ＭＳＸ）含有無血清培地中での増殖によって実施し、３５〜３７℃および５〜７％のＣＯ２中でインキュベートする。 クローンに由来する細胞系は、フローサイトメーターを使用して測定または決定する。哺乳動物細胞中でのＦＧＦ２１タンパク質の発現は、一般に天然Ｎ末端配列ＥＳＫＹ、つまりＮ末端にメチオニン残基を含まない、例えば配列番号５のアミノ酸配列によって示したＦＧＦ２１タンパク質を産生する。 ＣＨＯ細胞から培地中に分泌されたＦＧＦ２１タンパク質は、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィー、その後に分取的サイズ排除クロマトグラフィー、その後に標準クロマトグラフィー技術によって精製できる。手短には、採取した培地由来のＦＧＦ２１タンパク質は、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）ランニングバッファーを含むＭａｂ Ｓｅｌｅｃｔ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａ（ＧＥ社、ニュージャージー州ピスカタウェイ）上に捕捉した；手短には、ランニングバッファーを用いて洗浄して非特異的に結合した物質を除去し；１０ｍＭのクエン酸（ｐＨ３．０）を用いて溶出した。ＦＧＦ２１タンパク質を含有する分画をプールし、１０分の１量の１ＭのＴｒｉｓ（ｐＨ８．０）を加えることによって中和する。中和したプールを濃縮し、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）移動相を備えるＳｕｐｅｒｄｅｘ ２００サイズ排除クロマトグラフィーカラム（ＧＥ社、ニュージャージー州ピスカタウェイ）上に装填する。モノマーＦＧＦ２１タンパク質（共有結合ホモダイマー）を含有する分画をプールし、濃縮して保存する。 または、ＦＧＦ２１タンパク質を含有する無細胞培地を５０〜６０℃へ２時間まで加熱し、ウイルス不活性化のために洗浄剤（Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００）を用いて処理し、引き続いてＭａｂ Ｓｅｌｅｃｔ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）カラムに塗布し、非特異的に結合した物質を除去するために塩化ナトリウムを含む、または含まないｐＨ７のＴｒｉｓ緩衝液を用いて洗浄することができる。ＦＧＦ２１タンパク質はカラムから２０ｍＭのクエン酸（ｐＨ３）を使用して溶出し、ウイルス不活性化のために２時間までｐＨ３．４〜３．７で保持する。この溶液は、Ｔｒｉｓバッファーおよび塩化ナトリウムを添加することによってｐＨを４．８〜５．２へ調整し、少なくとも１５分間混合する。形成される沈降物は、デプスフィルトレーション（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）によって除去する。ＦＧＦ２１タンパク質は、樹脂、例えばＰｏｒｏｓ ＨＳ ５０（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）またはＳＰ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＨＰ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）などを使用するカチオン交換クロマトグラフィーによってさらに精製する。カチオン交換カラムは、ｐＨ５の酢酸ナトリウム緩衝液中で塩化ナトリウムを用いて溶出させる。ＦＧＦタンパク質は、Ｔｒｉｓバッファーを使用してｐＨを７から８へ調整する工程、硫酸ナトリウムの添加およびカラムへの適用、その後に硫酸ナトリウムの逆濃度勾配を用いた溶出によって、Ｐｈｅｎｙｌ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＨＰ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）上の疎水性相互作用クロマトグラフィーによりさらに精製することができる。精製ＦＧＦ２１タンパク質は、ウイルス保持フィルター、例えばＰｌａｎｏｖａ ２０Ｎ（旭化成メディカル社）を通過させ、その後に１０ｍＭのクエン酸、１５０ｍＭのＮａＣｌ（ｐＨ７）中への再生セルロース膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）上でのタンジェンシャル・フロー・フィルトレーションを使用する濃縮／透析ろ過を実施することができる。 実施例２ ３Ｔ３−Ｌ１−βＫｌｏｔｈｏ線維芽細胞グルコース取込みアッセイ ３Ｔ３−Ｌ１−βＫｌｏｔｈｏ線維芽細胞は、３Ｔ３−Ｌ１線維芽細胞から野生型βＫｌｏｔｈｏのコーディング配列およびブラスチシジン耐性マーカーを含有するＣＭＶ駆動哺乳動物発現ベクターのレトロウイルス形質導入によって生成する。ブラスチシジン耐性細胞は、１５μＭブラスチシジンの存在下で１４日間にわたる増殖後に選択し、βＫｌｏｔｈｏタンパク質発現は抗βＫｌｏｔｈｏ抗体を用いた免疫ブロットによって検証する。３Ｔ３−Ｌ１−βＫｌｏｔｈｏ線維芽細胞は、１０％仔ウシ血清および１５μＭのブラスチシジンを含むダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）中で実験使用のためにプレーティングするまで保持する。 グルコース取込みのために、３Ｔ３−Ｌ１−βＫｌｏｔｈｏ線維芽細胞を９６プレート中で２０，０００ｃｅｌｌｓ／ウエルでプレーティングし、１０％仔ウシ血清を含むＤＭＥＭ中で４８時間にわたりインキュベートする。細胞は、当該のＦＧＦ２１タンパク質を含む、または含まない０．１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含むＤＭＥＭ中で３時間にわたりインキュベートし、その後にＦＧＦ２１タンパク質を含む、または含まない１００μＭの２−デオキシ−Ｄ−（１４Ｃ）グルコースを含有するクレーブス・リンガー（Ｋｒｅｂｓ−Ｒｉｎｇｅｒ）リン酸（ＫＲＰ）バッファー（１５ｍＭのＨｅｐｅｓ（ｐＨ７．４）、１１８ｍＭのＮａＣｌ、４．８ｍＭのＫＣｌ、１．２ｍＭのＭｇＳＯ４、１．３ｍＭのＣａＣｌ２、１．２ｍＭのＫＨ２ＰＯ４、０．１％のＢＳＡ）中での１時間のインキュベーションを実施する。非特異的結合は、１ｍＭの２−デオキシ−Ｄ−（１４Ｃ）グルコースを含有するクレーブス・リンガー重炭酸／Ｈｅｐｅｓ（ＫＲＢＨ）バッファー中の選択セルのインキュベーションによって決定する。この反応は、細胞への２０μＭのサイトカラシンＢの添加によって終了させ、グルコース取込みを液体シンチレーションカウンターを用いて測定する。 本質的に上述した通りのプロトコールにしたがうと、３Ｔ３−Ｌ１−βＫｌｏｔｈｏ線維芽細胞グルコース取込みアッセイにおいて配列番号５のＦＧＦ２１タンパク質のホモダイマーのインビトロ効力（ＥＣ５０）は、０．０７０ｎＭであると決定された。 実施例３ ヒト２９３細胞−βＫｌｏｔｈｏ−ＳＲＥ ｌｕｃアッセイ２９３−βＫｌｏｔｈｏ−ＳＲＥ ｌｕｃレポーター細胞の構築： ＨＥＫ−２９３細胞（ヒト胚腎細胞）は、ダルベッコの改変イーグル培地中の１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を含有する増殖培地（ＧＭ）中において３７℃、５％のＣＯ２で培養する。細胞はＣＭＶプロモーター駆動ヒトβＫｌｏｔｈｏ発現カセットおよび血清応答エレメント（ＳＲＥ）駆動ルシフェラーゼ発現カセットを含有するプラスミドを用いてコトランスフェクトする。βＫｌｏｔｈｏ発現プラスミドは、さらにアミノグリコシド抗生物質Ｇ４１８に耐性を付与するためにＳＶ４０プロモーター駆動ネオマイシンホスホトランスフェラーゼ発現カセットもまた含有している。トランスフェクトＨＥＫ−２９３細胞は、トランスフェクトプラスミドがゲノム内に統合されている細胞を選択するために６００μｇ／ｍＬのＧ４１８を用いて選択する。選択した細胞は、希釈によってクローニングし、ＦＧＦ２１の添加２４時間後にルシフェラーゼ産生の増加について試験する。ルシフェラーゼにおける最大ＦＧＦ２１依存性増加を示しているクローンは、相対ＦＧＦ２１タンパク質活性を測定するために使用する細胞系として選択する。２９３−βＫｌｏｔｈｏ−ＳＲＥ ｌｕｃ ＦＧＦ２１活性アッセイ： ２９３−βＫｌｏｔｈｏ−ＳＲＥ ｌｕｃ細胞をすすぎ洗い、ＣＤ２９３懸濁培養培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）中に配置する。細胞は、懸濁液中において３７℃、６％のＣＯ２、１２５ｒｐｍで一晩増殖させる。細胞を計数し、遠心によってペレット化し、０．１％のＢＳＡを含有するＣＤ２９３培地中に再懸濁させる。細胞は、白色９６ウエルプレート内に２５，０００／ウエルで配置する。１００ｎＭ〜０．００６ｎＭの最終濃度を備える８種の希釈液を生成するためにＣＤ２９３／０．１％のＢＳＡ中での４倍の連続希釈液を各ＦＧＦ２１タンパク質に対して調製する。希釈液を１種当たり３回ずつ細胞に加え、１６〜２０時間にわたり、３７℃、５％のＣＯ２でインキュベートする。ルシフェラーゼ濃度は、同等量のＯｎｅＧｌｏ（商標）ルシフェラーゼ基質（Ｐｒｏｍｅｇａ社）の添加および相対発光の測定によって決定する。データは、曲線を当てはめてＥＣ５０を決定するために４パラメーターロジスティックモデル（ＸＬｆｉｔバージョン５．１）を使用して分析する。 本質的には上述したプロトコールにしたがうと、ヒト２９３細胞−βＫｌｏｔｈｏ−ＳＲＥ Ｌｕｃアッセイにおいて配列番号５のＦＧＦ２１タンパク質のホモダイマーの平均インビトロ効力（ＥＣ５０）は０．５１ｎＭであると決定される。 実施例４ 物理的安定性 Ｒ１７５およびＥ１８０の発現不均質性 均質タンパク質産物の産生は、一貫性のある明確に特徴付けられた産物をより良好に保証するので望ましい。産物の不均質性を評価するために、サンプルの１０μＬアリコートを９０μＬのＤＰＢＳと混合した。サンプルは、液体クロマトグラフィー質量分析法（ＬＣ−ＭＳ）によって、以下の：移動相Ａは０．０５％のＴＦＡ、移動相Ｂはアセトニトリル中の０．０４％のＴＦＡ、カラムはＰＬＲＰＳ ２．１×５０ｍｍカラム、注入量は１５μＬである条件を使用して分析した。 Ｗａｔｅｒｓ Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ ＬＣＴ Ｐｒｅｍｉｅｒ（商標）質量分析計は、４００〜１，９９０ａｍｕ（原子質量単位）の質量範囲、極性ＥＳ＋、キャピラリー３０００、サンプルコーン４０Ｖへ設定したが、アパーチャー１は２５Ｖ、ソース温度は１０５℃、コーンガス流量は５０Ｌ／時、脱溶媒時間は１５０℃、および脱溶媒ガス流量は６００Ｌ／時であった。 表２には、ＬＣ／ＭＳ法によって決定される各ＦＧＦ２１タンパク質内で生じる不均質性を報告した。産物１〜４２５は、配列番号８のＦＧＦ２１タンパク質および配列番号９のＦＧＦ２１タンパク質についてのＩｇＧ４ Ｆｃ部分、リンカーおよびＦＧＦ２１タンパク質を含有する全長ＦＧＦ２１タンパク質を表している。配列番号８のＦＧＦ２１タンパク質および配列番号９のＦＧＦ２１タンパク質は、野生型残基ロイシンを含有する配列番号８のＦＧＦ２１タンパク質およびアミノ酸残基リシン（Ｌ１００Ｋ）を含有する配列番号９のＦＧＦ２１タンパク質と１００位でのみ相違しており、どちらのタンパク質も同一の末端を有する。これらのタンパク質はどちらもＣ末端短縮、特に１８１位でのアミノ酸残基グリシンの除去に感受性であった。表２に示したように、企図された全長１〜４２５であるのは、配列番号８のＦＧＦ２１タンパク質のホモダイマーおよび配列番号９のＦＧＦ２１タンパク質のホモダイマーについての精製産物の５０％未満であった；１〜４２４フラグメントが精製産物の最大部分を構成した。さらに、量は少ないが産物１〜４２２、１〜４１１および１〜３７９もまた検出された。 配列番号５のＦＧＦ２１タンパク質は、遺伝子構築物において欠失している１８１位でアミノ酸残基を有しており、アミノ酸残基１８０は、グルタミン酸（Ｅ）に置換されている。これらの変化はＣＨＯ発現中の分解からＣ末端を保護し、１００％均質な精製１〜４２４産物を生じさせる。 実施例５ 物理的安定性 高濃度での自己集合 タンパク質凝集および自己集合は、潜在的に望ましくない作用、例えば免疫応答の誘発を増悪させる可能性があるので望ましくない。そこで、該タンパク質をモノマー状態（共有結合ホモダイマー）に維持することが好ましい。ＦＧＦ２１タンパク質が自己集合する傾向について試験するために、タンパク質を表３に列挙したバッファー中に透析し、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって分析して１．０ｍｇ／ｍＬ溶液の高分子量率（ＨＭＷ（％））を決定した。ＨＭＷ（％）は、タンパク質の凝集および自己集合の指標である。 ＳＥＣ分離法は、東ソー・バイオサイエンス事業部製３０００ＳＷＸＬの３０ｃｍ×０．７８ｃｍの寸法を備える５μカラム上で実施した。移動相は、０．０５Ｍリン酸ナトリウム、１７５ｍＭのＮａＣｌ（ｐＨ７）、流量０．５ｍＬ／分であった。１．０ｍｇ／ｍＬのサンプルは１０μＬの注入液として適用して吸光波長２１４ｎｍで監視し、７５ｍｇ／ｍＬのサンプルは１μＬ注入液として適用して２８０ｎｍで監視した。 表３は、全バッファー組成物について、配列番号８のＦＧＦ２１タンパク質のホモダイマーについては４〜５％のＨＭＷならびに配列番号９のＦＧＦ２１タンパク質のホモダイマーおよび１．０ｍｇ／ｍＬで配列番号５のＦＧＦ２１タンパク質のホモダイマーについては＜１％のＨＭＷを示している。サンプルは次に、高濃度製剤を模擬するために７５ｍｇ／ｍＬへ濃縮し、再びＳＥＣによって分析してＨＭＷ（％）を決定した。配列番号８変異体のＦＧＦ２１タンパク質のホモダイマーは７５ｍｇ／ｍＬで１３．７〜２１．９％のＨＭＷを含有していたが、配列番号９のＦＧＦ２１タンパク質のホモダイマーは２．２〜３．５％しか含有していなかった。配列番号８のＦＧＦ２１タンパク質と配列番号９のＦＧＦ２１タンパク質との唯一の差は１００位での置換（Ｌ１００Ｌ対Ｌ１００Ｋ）であるので、このデータは、Ｌ１００ＫがＨＭＷ形成を減少させることを証明している。 配列番号５のＦＧＦ２１タンパク質は他の変化に加えてＬ１００Ｋもまた含有しており、このホモダイマータンパク質中ではより低いＨＭＷ（％）も観察された。 実施例６ 物理的安定性 Ｌ１００Ｋ置換および高分子量率（％） ＦＧＦ２１タンパク質の物理的安定性は以下のように決定した。タンパク質を透析し、１０ｍＭのクエン酸（ｐＨ７）、１５０ｍＭのＮａＣｌ中の１〜２ｍｇ／ｍＬ中で調製し、ＳＥＣによって分析してＨＭＷ（％）を決定した（表３：「初期」）。 ＳＥＣ分離法は、東ソー・バイオサイエンス事業部製３０００ＳＷＸＬ、３０ｃｍ×０．７８ｃｍの寸法を備える５μカラム上で実施した。移動相は、０．０５Ｍリン酸ナトリウム、１７５ｍＭのＮａＣｌ（ｐＨ７）、流量が０．５ｍＬ／分であった。初期低濃度サンプルは１０μＬの注入液として適用して吸光波長２１４ｎｍで監視し、５０ｍｇ／ｍＬのサンプルは１μＬ注入液として適用して２８０ｎｍで監視した。 次に、タンパク質を５０ｍｇ／ｍＬに濃縮し、再び分析した（ｔ＝０）。配列番号８のＦＧＦ２１タンパク質のホモダイマーについてのＨＭＷ（％）は、濃縮すると４．５％から９．３％へ増加した。配列番号９のＦＧＦ２１タンパク質のホモダイマーについてのＨＭＷ（％）は、濃縮すると０．９％から１．４％へ増加した。配列番号５のＦＧＦ２１タンパク質のホモダイマーについてのＨＭＷ（％）は、濃縮すると０．４％から１．４％へ増加した。そこで、配列番号９のＦＧＦ２１タンパク質のホモダイマーおよび配列番号５のＦＧＦ２１タンパク質のホモダイマーはどちらも、配列番号８のＦＧＦ２１タンパク質のホモダイマーよりもより低い初期ＨＭＷ（％）およびタンパク質を５０ｍｇ／ｍＬで調製した場合により低いＨＭＷ（％）を有していた。これらのデータは、配列番号９のＦＧＦ２１タンパク質および配列番号５のＦＧＦ２１タンパク質中に存在するが配列番号８のＦＧＦ２１タンパク質中には存在していないＬ１００Ｋ突然変異が重要であることを証明していた。 ストレス条件下での長期安定性を評価するために、５０ｍｇ／ｍＬの製剤を４℃、２５℃および４０℃で４週間インキュベートした。表４に示したように、再びＨＭＷ（％）を４週間後に決定した（ｔ＝４週間）。配列番号８のＦＧＦ２１タンパク質のホモダイマーについてのＨＭＷ（％）は、４０℃では９．３％から１６．０％へ増加した。配列番号９のＦＧＦ２１タンパク質のホモダイマーについてのＨＭＷ（％）は、４０℃では１．４％から５．５％へ増加した。配列番号５のＦＧＦ２１タンパク質のホモダイマーについてのＨＭＷ（％）は、４０℃では０．４％から５．４％へ増加した。２５℃での４週間後に、ＨＭＷ（％）のレベルは配列番号９のＦＧＦ２１タンパク質のホモダイマーおよび配列番号５のＦＧＦ２１タンパク質のホモダイマーについては３．３％に過ぎなかったが、他方配列番号８のＦＧＦ２１タンパク質のホモダイマーについては１３．８％であった。これらのデータは、配列番号９のＦＧＦ２１タンパク質のホモダイマーおよび配列番号５のＦＧＦ２１タンパク質のホモダイマー中に存在するＬ１００Ｋ突然変異を含めることが有益な影響を及ぼすことを証明している。 実施例７ 物理的安定性 自己集合 配列番号７の精製ＦＧＦ２１タンパク質（Ｄ９８Ｌを有する配列番号５のＦＧＦ２１タンパク質）および配列番号６の精製ＦＧＦ２１タンパク質（Ｋ１００Ｌを有する配列番号５のＦＧＦ２１タンパク質）を１０ｍＭのクエン酸、５０ｍＭのＮａＣｌ（ｐＨ６）バッファー中に透析し、濃度が各々１２．９ｍｇ／ｍＬ、１．０ｍｇ／ｍＬおよび０．６ｍｇ／ｍＬであると決定した。透析から回収した各サンプルをＳＥＣによって分析してＨＭＷ（％）を決定した（表５）。ＨＭＷ（％）は、全回収透析液について＜１％であった。次に、１０，０００分子量カットオフ型４ｍＬ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ回転式濃縮装置を使用して６５〜８７ｍｇ／ｍＬへ濃縮した。各サンプルについての濃度は、表５に示した。濃縮後、濃縮タンパク質を使用するＳＥＣによって再びＨＭＷ（％）を決定した。 表５に示したように、配列番号５のＦＧＦ２１タンパク質のホモダイマーについてのＨＭＷ（％）は２．３％へ増加したが、これは高濃度で発生した自己集合が低レベルであることを示した。これとは対照的に、配列番号７のＦＧＦ２１タンパク質のホモダイマー（Ｄ９８Ｌを有する配列番号５のＦＧＦ２１タンパク質）および配列番号６のＦＧＦ２１タンパク質のホモダイマー（Ｋ１００Ｌを有する配列番号５のＦＧＦ２１タンパク質）についてのＨＭＷ（％）は、各々８．０％および１４．２％のレベルへ増加した。これらのデータは、配列に野生型Ｌ９８もしくはＬ１００を含めると望ましくない自己集合の傾向が高くなることを証明している。そこで、Ｌ９８ＤおよびＬ１００Ｋ置換はどちらも、配列番号５のＦＧＦ２１タンパク質の自己集合の減少に寄与する。さらに、Ｌ９８Ｄの非存在下でのＬ１００Ｋの存在（つまり配列番号７のＦＧＦ２１タンパク質）は、自己集合を十分に低く抑えるためには不十分であると結論された。これとは逆に、Ｌ１００Ｋの非存在下でのＬ９８Ｄの存在（つまり配列番号６のＦＧＦ２１タンパク質）は、自己集合を十分に低く抑えるためには不十分であると結論された。そこで、自己集合の減少に及ぼす最大作用は、Ｌ９８ＤおよびＬ１００Ｋを一緒に必要とする。 濃縮タンパク質を１ｍｇ／ｍＬに希釈するとＨＭＷ（％）が減少したので、これは自己集合が可逆性であることを証明している。配列番号６のＦＧＦ２１タンパク質のホモダイマー（Ｋ１００Ｌを有する配列番号５のＦＧＦ２１タンパク質）を１ｍｇ／ｍＬへ希釈すると、１４．２％から２．０％へのＨＭＷ（％）の減少が生じた。配列番号７のＦＧＦ２１タンパク質のホモダイマー（Ｄ９８Ｌを有する配列番号５のＦＧＦ２１タンパク質）を１ｍｇ／ｍＬへ希釈すると、８．０％から１．３％へのＨＭＷ（％）の減少が生じた。配列番号５のＦＧＦ２１タンパク質のホモダイマー中にＬ９８ＤおよびＬ１００Ｋが一緒に存在する場合、ＨＭＷ（％）は１ｍｇ／ｍＬに希釈すると０．８８％へ減少したが、これもまたＬ９８ＤおよびＬ１００Ｋが結合した場合により有益な挙動が得られることを証明している。 実施例８ ｏｂ／ｏｂマウスモデルにおけるグルコース低下 雄性ｏｂ／ｏｂマウスおよび年齢を適応させたｏｂ／ｍ（痩身）コントロールは、到着時には７週齢であり、治療開始時の年齢は８〜９週齢であった。到着後、全マウスは１匹ずつ収容し、治療開始時まで１〜２週間順化させた。マウスはＰｕｒｉｎａ社製齧歯類飼料５０１５で飼養し、自動給水装置から水道水を随意に与えた。マウスは、２４℃（７５°Ｆ）に設定した周囲温度を用いて１２時間明暗周期で収容した。治療開始１〜２日前に、血液サンプルを尾部からの出血によって採取した。血中グルコース濃度はＡｃｃｕ−Ｃｈｅｃｋ Ａｖｉｖｉａ血糖計（Ｒｏｃｈｅ社）を使用して測定し、Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ社製マウス／ラット用インスリンアッセイキットを使用するインスリンアッセイのために血清サンプルを収集した。治療開始日（第０日）に、治療前体重、血糖および血清インスリンに基づいてマウスを群にソーティングした（ＢＲＡＴソーティング・ソフトウエア）。第０日および第３日に、マウスに１０ｍＬ／ｋｇの用量で配列番号５のＦＧＦ２１タンパク質のホモダイマー０．１〜３０ｎｍｏｌ／ｋｇをＳＱ（皮下）投与した。投与ビヒクルは、０．０３％のマウス血清アルブミン（ＭＳＡ；Ｓｉｇｍａ Ａ３１３９）を含有する無菌ＰＢＳ（ＨｙＣｌｏｎｅ ＤＰＢＳ／改質−カルシウム−マグネシウム）であった。血糖を７日間にわたり毎日測定し、ＡＵＣを決定した。血糖降下についてのＥＤ５０計算は、ＡＵＣに基づいた。犠死時に肝ホモジネートを収集し、肝トリグリセリドは日立社製Ｍｏｄｕｌａｒ Ｐ臨床分析装置上で測定した。 第７日に、ビヒクル処理マウスは３８７±６３．０ｍｇ／ｄｌ（平均値±ＳＥＭ）と測定された平均血糖値を備えて高血糖性であったが、他方ｏｂ／ｍ痩身コントロールマウスは１６２±９．０ｍｇ／ｄｌの血糖値（平均値±ＳＥＭ）を有していた。配列番号５のＦＧＦ２１タンパク質のホモダイマーは、ｏｂ／ｍ痩身コントロールに匹敵する値へ血糖値を降下させた。配列番号５のＦＧＦ２１タンパク質のホモダイマーのＥＤ５０は、２．７９６ｎｍｏｌ／ｋｇ（９５％信頼区間＝１．１〜７．０）であった。配列配列番号１−ＦＧＦ２１タンパク質ＨＰＩＰＤＳＳＰＬＬＱＦＧＧＱＶＲＱＲＹＬＹＴＤＤＡＱＱＴＥＣＨＬＥＩＲＥＤＧＴＶＧＣＡＡＤＱＳＰＥＳＬＬＱＬＫＡＬＫＰＧＶＩＱＩＬＧＶＫＴＳＲＦＬＣＱＲＰＤＧＡＬＹＧＳＬＨＦＤＰＥＡＣＳＦＲＥＤＬＫＥＤＧＹＮＶＹＱＳＥＡＨＧＬＰＬＨＬＰＧＤＫＳＰＨＲＫＰＡＰＲＧＰＡＲＦＬＰＬＰＧＬＰＰＡＬＰＥＰＰＧＩＬＡＰＱＰＰＤＶＧＳＳＤＰＬＲＬＶＥＰＳＱＬＲＳＰＳＦＥ配列番号２−野生型ＦＧＦ２１（ホモサピエンス（Ｈｏｍｏ Ｓａｐｉｅｎｓ））ＨＰＩＰＤＳＳＰＬＬＱＦＧＧＱＶＲＱＲＹＬＹＴＤＤＡＱＱＴＥＡＨＬＥＩＲＥＤＧＴＶＧＧＡＡＤＱＳＰＥＳＬＬＱＬＫＡＬＫＰＧＶＩＱＩＬＧＶＫＴＳＲＦＬＣＱＲＰＤＧＡＬＹＧＳＬＨＦＤＰＥＡＣＳＦＲＥＬＬＬＥＤＧＹＮＶＹＱＳＥＡＨＧＬＰＬＨＬＰＧＮＫＳＰＨＲＤＰＡＰＲＧＰＡＲＦＬＰＬＰＧＬＰＰＡＬＰＥＰＰＧＩＬＡＰＱＰＰＤＶＧＳＳＤＰＬＳＭＶＧＰＳＱＧＲＳＰＳＹＡＳ配列番号３−ヒトトランスフェリン（ｈＴｒｆ）シグナルペプチドＭＲＬＡＶＧＡＬＬＶＣＡＶＬＧＬＣＬＡ配列番号４−ヒト線維芽細胞増殖因子結合タンパク質１（ｈＦＧＦＰ−１）シグナルペプチドＭＫＩＣＳＬＴＬＬＳＦＬＬＬＡＡＱＶＬＬＶＥＧ配列番号５−ＦＧＦ２１タンパク質ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＡＨＰＩＰＤＳＳＰＬＬＱＦＧＧＱＶＲＱＲＹＬＹＴＤＤＡＱＱＴＥＣＨＬＥＩＲＥＤＧＴＶＧＣＡＡＤＱＳＰＥＳＬＬＱＬＫＡＬＫＰＧＶＩＱＩＬＧＶＫＴＳＲＦＬＣＱＲＰＤＧＡＬＹＧＳＬＨＦＤＰＥＡＣＳＦＲＥＤＬＫＥＤＧＹＮＶＹＱＳＥＡＨＧＬＰＬＨＬＰＧＤＫＳＰＨＲＫＰＡＰＲＧＰＡＲＦＬＰＬＰＧＬＰＰＡＬＰＥＰＰＧＩＬＡＰＱＰＰＤＶＧＳＳＤＰＬＲＬＶＥＰＳＱＬＲＳＰＳＦＥ配列番号６−ＦＧＦ２１タンパク質ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＡＨＰＩＰＤＳＳＰＬＬＱＦＧＧＱＶＲＱＲＹＬＹＴＤＤＡＱＱＴＥＣＨＬＥＩＲＥＤＧＴＶＧＣＡＡＤＱＳＰＥＳＬＬＱＬＫＡＬＫＰＧＶＩＱＩＬＧＶＫＴＳＲＦＬＣＱＲＰＤＧＡＬＹＧＳＬＨＦＤＰＥＡＣＳＦＲＥＤＬＬＥＤＧＹＮＶＹＱＳＥＡＨＧＬＰＬＨＬＰＧＤＫＳＰＨＲＫＰＡＰＲＧＰＡＲＦＬＰＬＰＧＬＰＰＡＬＰＥＰＰＧＩＬＡＰＱＰＰＤＶＧＳＳＤＰＬＲＬＶＥＰＳＱＬＲＳＰＳＦＥ配列番号７−ＦＧＦ２１タンパク質ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＡＨＰＩＰＤＳＳＰＬＬＱＦＧＧＱＶＲＱＲＹＬＹＴＤＤＡＱＱＴＥＣＨＬＥＩＲＥＤＧＴＶＧＣＡＡＤＱＳＰＥＳＬＬＱＬＫＡＬＫＰＧＶＩＱＩＬＧＶＫＴＳＲＦＬＣＱＲＰＤＧＡＬＹＧＳＬＨＦＤＰＥＡＣＳＦＲＥＬＬＫＥＤＧＹＮＶＹＱＳＥＡＨＧＬＰＬＨＬＰＧＤＫＳＰＨＲＫＰＡＰＲＧＰＡＲＦＬＰＬＰＧＬＰＰＡＬＰＥＰＰＧＩＬＡＰＱＰＰＤＶＧＳＳＤＰＬＲＬＶＥＰＳＱＬＲＳＰＳＦＥ配列番号８−ＦＧＦ２１タンパク質ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＡＨＰＩＰＤＳＳＰＬＬＱＦＧＧＱＶＲＱＲＹＬＹＴＤＤＡＱＱＴＥＣＨＬＥＩＲＥＤＧＴＶＧＣＡＡＤＱＳＰＥＳＬＬＱＬＫＡＬＫＰＧＶＩＱＩＬＧＶＫＴＳＲＦＬＣＱＲＰＤＧＡＬＹＧＳＬＨＦＤＰＥＡＣＳＦＲＥＤＬＬＥＤＧＹＮＶＹＱＳＥＡＨＧＬＰＬＨＬＰＧＤＫＳＰＨＲＫＰＡＰＲＧＰＡＲＦＬＰＬＰＧＬＰＰＡＬＰＥＰＰＧＩＬＡＰＱＰＰＤＶＧＳＳＤＰＬＲＬＶＥＰＳＱＬＬＳＰＳＦＬＧ配列番号９−ＦＧＦ２１タンパク質ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＡＨＰＩＰＤＳＳＰＬＬＱＦＧＧＱＶＲＱＲＹＬＹＴＤＤＡＱＱＴＥＣＨＬＥＩＲＥＤＧＴＶＧＣＡＡＤＱＳＰＥＳＬＬＱＬＫＡＬＫＰＧＶＩＱＩＬＧＶＫＴＳＲＦＬＣＱＲＰＤＧＡＬＹＧＳＬＨＦＤＰＥＡＣＳＦＲＥＤＬＫＥＤＧＹＮＶＹＱＳＥＡＨＧＬＰＬＨＬＰＧＤＫＳＰＨＲＫＰＡＰＲＧＰＡＲＦＬＰＬＰＧＬＰＰＡＬＰＥＰＰＧＩＬＡＰＱＰＰＤＶＧＳＳＤＰＬＲＬＶＥＰＳＱＬＬＳＰＳＦＬＧ配列番号１０−リンカー（Ｌ）ＧＧＧＧＳ配列番号１１−リンカー（３Ｌ）ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＡ配列番号１２−リンカー（２Ｌ）ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＡ配列番号１３−ＦＧＦ２１タンパク質の（ＤＮＡ）ＧＡＧＴＣＣＡＡＡＴＡＴＧＧＴＣＣＣＣＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＧＧＣＣＧＣＣＧＧＧＧＧＡＣＣＡＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＧＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＴＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＧＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＧＧＡＡＧＡＣＣＣＣＧＡＧＧＴＣＣＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＴＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＴＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＧＣＣＴＣＣＣＧＴＣＣＴＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＧＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＡＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＣＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＡＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＡＧＧＣＴＡＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＧＡＧＧＧＧＡＡＴＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＡＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＴＧＧＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＣＴＣＣＧＧＡＧＧＣＧＧＣＧＧＣＴＣＴＧＧＴＧＧＣＧＧＴＧＧＣＡＧＣＧＣＴＣＡＣＣＣＣＡＴＣＣＣＴＧＡＣＴＣＣＡＧＴＣＣＴＣＴＣＣＴＧＣＡＡＴＴＣＧＧＧＧＧＣＣＡＡＧＴＣＣＧＧＣＡＧＣＧＧＴＡＣＣＴＧＴＡＣＡＣＣＧＡＣＧＡＣＧＣＣＣＡＧＣＡＧＡＣＣＧＡＧＴＧＣＣＡＣＣＴＧＧＡＡＡＴＣＣＧＧＧＡＧＧＡＣＧＧＣＡＣＣＧＴＧＧＧＣＴＧＴＧＣＣＧＣＣＧＡＣＣＡＧＴＣＣＣＣＴＧＡＧＴＣＣＣＴＧＣＴＧＣＡＧＣＴＧＡＡＧＧＣＣＣＴＧＡＡＧＣＣＴＧＧＣＧＴＧＡＴＣＣＡＧＡＴＣＣＴＧＧＧＣＧＴＧＡＡＡＡＣＣＴＣＣＣＧＧＴＴＣＣＴＧＴＧＣＣＡＧＡＧＧＣＣＴＧＡＴＧＧＣＧＣＣＣＴＧＴＡＣＧＧＣＴＣＣＣＴＧＣＡＣＴＴＣＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＣＣＴＧＣＴＣＣＴＴＣＣＧＧＧＡＧＧＡＣＣＴＧＡＡＧＧＡＡＧＡＴＧＧＣＴＡＣＡＡＣＧＴＧＴＡＣＣＡＧＴＣＣＧＡＧＧＣＴＣＡＣＧＧＣＣＴＧＣＣＴＣＴＧＣＡＴＣＴＧＣＣＴＧＧＣＧＡＣＡＡＧＴＣＣＣＣＣＣＡＣＣＧＧＡＡＧＣＣＴＧＣＴＣＣＴＡＧＧＧＧＣＣＣＴＧＣＣＡＧＡＴＴＣＣＴＧＣＣＡＣＴＧＣＣＴＧＧＣＣＴＧＣＣＴＣＣＡＧＣＴＣＴＧＣＣＴＧＡＧＣＣＴＣＣＴＧＧＣＡＴＣＣＴＧＧＣＣＣＣＴＣＡＧＣＣＴＣＣＡＧＡＣＧＴＧＧＧＣＴＣＣＴＣＣＧＡＣＣＣＴＣＴＧＣＧＧＣＴＧＧＴＣＧＡＧＣＣＴＴＣＣＣＡＧＣＴＧＣＧＧＡＧＣＣＣＴＡＧＣＴＴＣＧＡＧ配列番号１４−Ｆｃタンパク質ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧ配列番号１５−コンセンサスＦＧＦ２１タンパク質ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＡＨＰＩＰＤＳＳＰＬＬＱＦＧＧＱＶＲＱＲＹＬＹＴＤＤＡＱＱＴＥＣＨＬＥＩＲＥＤＧＴＶＧＣＡＡＤＱＳＰＥＳＬＬＱＬＫＡＬＫＰＧＶＩＱＩＬＧＶＫＴＳＲＦＬＣＱＲＰＤＧＡＬＹＧＳＬＨＦＤＰＥＡＣＳＦＲＥＸ１ＬＸ２ＥＤＧＹＮＶＹＱＳＥＡＨＧＬＰＬＨＬＰＧＤＫＳＰＨＲＫＰＡＰＲＧＰＡＲＦＬＰＬＰＧＬＰＰＡＬＰＥＰＰＧＩＬＡＰＱＰＰＤＶＧＳＳＤＰＬＲＬＶＥＰＳＱＬＸ３ＳＰＳＦＸ４Ｘ５Ｘ１は、ＬもしくはＤである、Ｘ２は、ＬもしくはＫである、Ｘ３は、ＲもしくはＬである、Ｘ４は、ＬもしくはＥである、Ｘ５は、Ｇもしくは非存在である。 アミノ酸配列が、融合した第１ポリペプチドおよび第２ポリペプチドからなり、前記第１ポリペプチドはＩｇＧ４ Ｆｃ部分を含み、前記第２ポリペプチドは配列番号１のアミノ酸配列を有するＦＧＦ２１タンパク質を含み、前記第１ポリペプチドのＣ末端は前記第２ポリペプチドのＮ末端にリンカーを介して融合している、線維芽細胞増殖因子２１（ＦＧＦ２１）タンパク質のホモダイマー。 前記ＩｇＧ４ Ｆｃ部分のアミノ酸配列は配列番号１４である、請求項１に記載のホモダイマー。 前記リンカーのアミノ酸配列は配列番号１１である、請求項１または２のいずれか一項に記載のホモダイマー。 前記アミノ酸配列が ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＡＨＰＩＰＤＳＳＰＬＬＱＦＧＧＱＶＲＱＲＹＬＹＴＤＤＡＱＱＴＥＣＨＬＥＩＲＥＤＧＴＶＧＣＡＡＤＱＳＰＥＳＬＬＱＬＫＡＬＫＰＧＶＩＱＩＬＧＶＫＴＳＲＦＬＣＱＲＰＤＧＡＬＹＧＳＬＨＦＤＰＥＡＣＳＦＲＥＤＬＫＥＤＧＹＮＶＹＱＳＥＡＨＧＬＰＬＨＬＰＧＤＫＳＰＨＲＫＰＡＰＲＧＰＡＲＦＬＰＬＰＧＬＰＰＡＬＰＥＰＰＧＩＬＡＰＱＰＰＤＶＧＳＳＤＰＬＲＬＶＥＰＳＱＬＲＳＰＳＦＥ（配列番号５）である、請求項１〜３のいずれか一項に記載のホモダイマー。 前記タンパク質のＩｇＧ４ Ｆｃ部分はグリコシル化されている、請求項１〜４のいずれか一項に記載のホモダイマー。 ポリペプチドをコードするＤＮＡ分子であって、前記ポリペプチドのアミノ酸配列が配列番号５であるＤＮＡ分子。 請求項６に記載のＤＮＡ分子で形質転換された哺乳動物宿主細胞であって、前記細胞がホモダイマーを発現することができ、前記ホモダイマーの各ポリペプチドのアミノ酸配列が配列番号５である哺乳動物宿主細胞。 ホモダイマーを製造する方法であって、前記ホモダイマーの各ポリペプチドのアミノ酸配列は配列番号５であり、 ｉ）配列番号５のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む哺乳動物宿主細胞を、該ポリペプチド配列が発現するような条件下で培養する工程と、 ｉｉ）各ポリペプチドのアミノ酸配列が配列番号５であるホモダイマーを前記宿主細胞から回収する工程とを含む方法。 請求項８に記載の方法によって生成されるホモダイマー。 請求項１〜５または９のいずれか一項に記載のホモダイマーと、少なくとも１つの医薬上許容される担体、希釈剤または賦形剤とを含む医薬組成物。 ２型糖尿病、肥満症、脂質異常症および／またはメタボリックシンドロームを治療する方法であって、それを必要とする患者に請求項１〜５または９のいずれか一項に記載のホモダイマーを投与することを含む方法。 療法に使用するための請求項１〜５または９のいずれか一項に記載のホモダイマー。 ２型糖尿病、肥満症、脂質異常症および／またはメタボリックシンドロームの治療に使用するための、請求項１〜５または９のいずれか一項に記載のホモダイマー。 本発明は、薬理学的に効力があり安定性のヒト線維芽細胞増殖因子２１（ＦＧＦ２１）タンパク質、ＦＧＦ２１タンパク質を含む医薬組成物、およびそのようなタンパク質を使用して２型糖尿病、肥満症、脂質異常症および／またはメタボリックシンドロームを治療する方法に関する。【選択図】なし配列表20150107A16333全文3 線維芽細胞増殖因子２１（ＦＧＦ２１）タンパク質のホモダイマーであって、前記ＦＧＦ２１タンパク質アミノ酸配列は、融合した第１ポリペプチドおよび第２ポリペプチドからなり、前記第１ポリペプチドはＩｇＧ４ Ｆｃ部分を含み、前記第２ポリペプチドは配列番号１のアミノ酸配列を有するタンパク質を含み、前記第１ポリペプチドのＣ末端は前記第２ポリペプチドのＮ末端にリンカーを介して融合している、ホモダイマー。 前記ＩｇＧ４ Ｆｃ部分のアミノ酸配列は配列番号１４である、請求項１に記載のホモダイマー。 前記リンカーのアミノ酸配列は配列番号１１である、請求項１または２のいずれか一項に記載のホモダイマー。 前記アミノ酸配列が ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＡＨＰＩＰＤＳＳＰＬＬＱＦＧＧＱＶＲＱＲＹＬＹＴＤＤＡＱＱＴＥＣＨＬＥＩＲＥＤＧＴＶＧＣＡＡＤＱＳＰＥＳＬＬＱＬＫＡＬＫＰＧＶＩＱＩＬＧＶＫＴＳＲＦＬＣＱＲＰＤＧＡＬＹＧＳＬＨＦＤＰＥＡＣＳＦＲＥＤＬＫＥＤＧＹＮＶＹＱＳＥＡＨＧＬＰＬＨＬＰＧＤＫＳＰＨＲＫＰＡＰＲＧＰＡＲＦＬＰＬＰＧＬＰＰＡＬＰＥＰＰＧＩＬＡＰＱＰＰＤＶＧＳＳＤＰＬＲＬＶＥＰＳＱＬＲＳＰＳＦＥ（配列番号５）である、請求項１〜３のいずれか一項に記載のホモダイマー。 前記タンパク質のＩｇＧ４ Ｆｃ部分はグリコシル化されている、請求項１〜４のいずれか一項に記載のホモダイマー。 ポリペプチドをコードするＤＮＡ分子であって、前記ポリペプチドのアミノ酸配列が配列番号５であるＤＮＡ分子。 請求項６に記載のＤＮＡ分子で形質転換された哺乳動物宿主細胞であって、前記細胞がホモダイマーを発現することができ、前記ホモダイマーの各ポリペプチドのアミノ酸配列が配列番号５である哺乳動物宿主細胞。 ホモダイマーを製造する方法であって、前記ホモダイマーの各ポリペプチドのアミノ酸配列は配列番号５であり、 ｉ）配列番号５のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む哺乳動物宿主細胞を、該ポリペプチド配列が発現するような条件下で培養する工程と、 ｉｉ）各ポリペプチドのアミノ酸配列が配列番号５であるホモダイマーを前記宿主細胞から回収する工程とを含む方法。 請求項８に記載の方法によって生成されるホモダイマー。 請求項１〜５または９のいずれか一項に記載のホモダイマーと、少なくとも１つの医薬上許容される担体、希釈剤または賦形剤とを含む医薬組成物。 療法に使用するための請求項１〜５または９のいずれか一項に記載のホモダイマー。 ２型糖尿病、肥満症、脂質異常症および／またはメタボリックシンドロームの治療に使用するための、請求項１〜５または９のいずれか一項に記載のホモダイマー。A16330０１０６3 第７日に、ビヒクル処理マウスは３８７±６３．０ｍｇ／ｄｌ（平均値±ＳＥＭ）と測定された平均血糖値を備えて高血糖性であったが、他方ｏｂ／ｍ痩身コントロールマウスは１６２±９．０ｍｇ／ｄｌの血糖値（平均値±ＳＥＭ）を有していた。配列番号５のＦＧＦ２１タンパク質のホモダイマーは、ｏｂ／ｍ痩身コントロールに匹敵する値へ血糖値を降下させた。配列番号５のＦＧＦ２１タンパク質のホモダイマーのＥＤ５０は、２．７９６ｎｍｏｌ／ｋｇ（９５％信頼区間＝１．１〜７．０）であった。 以下に、本願の当初の特許請求の範囲に記載された発明を付記する。［１］ アミノ酸配列が、融合した第１ポリペプチドおよび第２ポリペプチドからなり、前記第１ポリペプチドはＩｇＧ４ Ｆｃ部分を含み、前記第２ポリペプチドは配列番号１のアミノ酸配列を有するＦＧＦ２１タンパク質を含み、前記第１ポリペプチドのＣ末端は前記第２ポリペプチドのＮ末端にリンカーを介して融合している、線維芽細胞増殖因子２１（ＦＧＦ２１）タンパク質のホモダイマー。［２］ 前記ＩｇＧ４ Ｆｃ部分のアミノ酸配列は配列番号１４である、［１］に記載のホモダイマー。［３］ 前記リンカーのアミノ酸配列は配列番号１１である、［１］または［２］のいずれかに記載のホモダイマー。［４］ 前記アミノ酸配列が ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＡＨＰＩＰＤＳＳＰＬＬＱＦＧＧＱＶＲＱＲＹＬＹＴＤＤＡＱＱＴＥＣＨＬＥＩＲＥＤＧＴＶＧＣＡＡＤＱＳＰＥＳＬＬＱＬＫＡＬＫＰＧＶＩＱＩＬＧＶＫＴＳＲＦＬＣＱＲＰＤＧＡＬＹＧＳＬＨＦＤＰＥＡＣＳＦＲＥＤＬＫＥＤＧＹＮＶＹＱＳＥＡＨＧＬＰＬＨＬＰＧＤＫＳＰＨＲＫＰＡＰＲＧＰＡＲＦＬＰＬＰＧＬＰＰＡＬＰＥＰＰＧＩＬＡＰＱＰＰＤＶＧＳＳＤＰＬＲＬＶＥＰＳＱＬＲＳＰＳＦＥ（配列番号５）である、［１］〜［３］のいずれかに記載のホモダイマー。［５］ 前記タンパク質のＩｇＧ４ Ｆｃ部分はグリコシル化されている、［１］〜［４］のいずれかに記載のホモダイマー。［６］ ポリペプチドをコードするＤＮＡ分子であって、前記ポリペプチドのアミノ酸配列が配列番号５であるＤＮＡ分子。［７］ ［６］に記載のＤＮＡ分子で形質転換された哺乳動物宿主細胞であって、前記細胞がホモダイマーを発現することができ、前記ホモダイマーの各ポリペプチドのアミノ酸配列が配列番号５である哺乳動物宿主細胞。［８］ ホモダイマーを製造する方法であって、前記ホモダイマーの各ポリペプチドのアミノ酸配列は配列番号５であり、 ｉ）配列番号５のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む哺乳動物宿主細胞を、該ポリペプチド配列が発現するような条件下で培養する工程と、 ｉｉ）各ポリペプチドのアミノ酸配列が配列番号５であるホモダイマーを前記宿主細胞から回収する工程とを含む方法。［９］ ［８］に記載の方法によって生成されるホモダイマー。［１０］ ［１］〜［５］または［９］のいずれかに記載のホモダイマーと、少なくとも１つの医薬上許容される担体、希釈剤または賦形剤とを含む医薬組成物。［１１］ ２型糖尿病、肥満症、脂質異常症および／またはメタボリックシンドロームを治療する方法であって、それを必要とする患者に［１］〜［５］または［９］のいずれかに記載のホモダイマーを投与することを含む方法。［１２］ 療法に使用するための［１］〜［５］または［９］のいずれかに記載のホモダイマー。［１３］ ２型糖尿病、肥満症、脂質異常症および／またはメタボリックシンドロームの治療に使用するための、［１］〜［５］または［９］のいずれかに記載のホモダイマー。