生命科学関連特許情報
| タイトル： | 公表特許公報(A)_色素原溶液のポリマー安定化 |
| 出願番号： | 2014552626 |
| 年次： | 2015 |
| IPC分類： | G01N 33/531,G01N 33/48,G01N 33/53,G01N 33/536 |
特許情報キャッシュ
ビーニアーツ， クリストファー ケリー， ディー．ブライアン コスメダー， ダブリュ． ジェロウム メイ， エリック モリソン， ラリー JP 2015507189 公表特許公報(A) 20150305 2014552626 20130118 色素原溶液のポリマー安定化 ヴェンタナ メディカル システムズ， インク． 511286517 園田 吉隆 100109726 小林 義教 100101199 ビーニアーツ， クリストファー ケリー， ディー．ブライアン コスメダー， ダブリュ． ジェロウム メイ， エリック モリソン， ラリー US 61/589,754 20120123 G01N 33/531 20060101AFI20150206BHJP G01N 33/48 20060101ALI20150206BHJP G01N 33/53 20060101ALI20150206BHJP G01N 33/536 20060101ALI20150206BHJP JPG01N33/531 BG01N33/48 PG01N33/53 YG01N33/536 C AP(BW,GH,GM,KE,LR,LS,MW,MZ,NA,RW,SD,SL,SZ,TZ,UG,ZM,ZW),EA(AM,AZ,BY,KG,KZ,RU,TJ,TM),EP(AL,AT,BE,BG,CH,CY,CZ,DE,DK,EE,ES,FI,FR,GB,GR,HR,HU,IE,IS,IT,LT,LU,LV,MC,MK,MT,NL,NO,PL,PT,RO,RS,SE,SI,SK,SM,TR),OA(BF,BJ,CF,CG,CI,CM,GA,GN,GQ,GW,ML,MR,NE,SN,TD,TG),AE,AG,AL,AM,AO,AT,AU,AZ,BA,BB,BG,BH,BN,BR,BW,BY,BZ,CA,CH,CL,CN,CO,CR,CU,CZ,DE,DK,DM,DO,DZ,EC,EE,EG,ES,FI,GB,GD,GE,GH,GM,GT,HN,HR,HU,ID,IL,IN,IS,JP,KE,KG,KM,KN,KP,KR,KZ,LA,LC,LK,LR,LS,LT,LU,LY,MA,MD,ME,MG,MK,MN,MW,MX,MY,MZ,NA,NG,NI,NO,NZ,OM,PA,PE,PG,PH,PL,PT,QA,RO,RS,RU,RW,SC,SD,SE,SG,SK,SL,SM,ST,SV,SY,TH,TJ,TM,TN,TR,TT,TZ,UA,UG,US,UZ,VC EP2013050894 20130118 WO2013110549 20130801 55 20140918 2G045 2G045BB25 2G045BB54 2G045CB01 2G045DA13 2G045DA14 2G045DA36 2G045FA16 2G045FB02 2G045FB03 2G045FB11 本開示は、組織染色の過程で有用な、組成物、キットの実施態様、及び、そのような組成物を使用する方法の実施態様に関し、ここで、該組成物はジアミノベンジジン（ＤＡＢ）色素原（及び／又はその誘導体）と色素原の析出を減少させ、又は実質的に排除することが可能なポリマーとを含む。 ある市販のＤＡＢ色素原溶液（例えば、ＯＰＴＩＶＩＥＷ（登録商標）ＤＡＢ溶液、ベンタナ・メディカル・システムズ社、アリゾナ州ツーソン）は、酸化に対して安定である。例えば、メタ重亜硫酸ナトリウムは、ＤＡＢ組織染色を大きく阻害しない濃度で、安定化溶液として使用されている。特定の作用理論に限定されるものではないが、この酸化防止剤は、不溶性ＤＡＢ硫酸水素塩を形成する（元素分析に基づく）と考えられる。このＤＡＢ硫酸水素塩は低水溶解度を有し、容易に溶液から析出する。提案されるプロセスを以下に示す。 テトラメチルベンジジン色素原（ＴＭＢ）は、デキストラン硫酸と会合することが知られている。デキストラン硫酸は、溶液中のＴＭＢ色素原生成物を析出させるために使用される通常のプロセスにおいて、ＴＭＢ酸化生成物を可溶性に維持し、また、ウェスタンブロッティングにおいては、ＴＭＢの析出を促進しうる。[Proc. Natl. Acad. Sci. USA Vol. 83, pp. 9085-9089: "Use of nonisotopic M13 probes for genetic analysis - Application to HLV class II loci", US4789630 - "Ionic compounds containing the cationic meriquinone of a benzidine" 及びUS5013646又はWO199100667 - "TMB formulation for soluble and precipitable HRP-ELISA"]。しかしながら、組織染色法でＤＡＢが酸化する前にＤＡＢ−硫酸塩が析出する問題に対処する必要性が、依然として当該技術分野において存在する。 本開示は、組成物、その組成物を用いて組織試料内の標的を検出する方法、及び免疫組織化学染色用のキットに関する。組成物は、免疫組織化学的検査において標的を検出する色素原として使用するに十分な濃度、及び十分な安定性を持つＤＡＢ色素原を含む。十分な安定性とは、長時間（例えば、６ヶ月、１２ヶ月、１８ヶ月、及び２４ヶ月）経過した色素原溶液が、新たに調製した同じ色素原溶液と比較して、依然として重要なシグナルを低下させることなく、組織試料中の標的を検出するために使用しうるような保存安定性を含む。十分な安定性は、検出において使用される場合、組織試料中の標的を検出する十分な色素原が析出できるように、十分な不安定性をも含む。 例示的な実施態様において、発色性免疫組織化学的検査のための組成物は、溶媒、ＤＡＢ色素原、安定剤、及び溶媒に可溶なポリマーを含む。一実施態様において、ポリマーは、ポリマーを含まない類似の溶液と比較して加速劣化条件下で溶液からのＤＡＢ析出を減少させる。その他の実施態様において、ポリマーは、サルフェート官能基、スルホネート官能基、アミン官能基、又はそれらの組合せを含む。その他の実施態様において、アミン官能基は、第一級アミン、第二級アミン、第三級アミン、又は第四級アミンを含む。更に別の実施態様では、ポリマーは、ポリアルキレンアミンポリマーである。一実施態様において、ポリマーは、デキストラン硫酸、ポリスチレンスルホネート、ポリエチレンイミン、アミノデキストラン、ＤＥＡＥ−デキストラン、ポリスチレンスルホネートマレイン酸コポリマー、ポリビニルスルホネート、ポリ（２−ビニル−１−メチルピリジニウムブロミド、ポリ（２−メチルアクリルオキシエチルトリメチルアンモニウムブロミド、ポリ（アクリルアミド／２−メチルアクリルオキシエチルトリメチルアンモニウムブロミド又はそれらの組合せから選択される。その他の実施態様において、ポリマーは、直鎖状又は分岐状ポリエチレンイミンである。例示的な実施態様において、免疫組織化学染色用の組成物は、ＤＡＢ色素原、及びから選択される式を有するポリマーを含有し、ここで、各Ｙは独立して、酸素、硫黄及びＮＲａから選択され、Ｒａは水素、脂肪族、アリール、ヘテロアリール、及びヘテロ脂肪族から選択され；Ｒ１は脂肪族、アリール、ヘテロアリール、又はエステル、酸及びアミドから選択されたヘテロ原子含有部分から選択され；Ｒ２は水素、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、又はヘテロアリールから選択され；Ｒ３はスルホネート、アミン、カルボキシル基、カルボキシレート、又はそれらの組合せから選択されるポリマー官能基であり；ｎは１〜約１００の範囲である。一実施態様において、ポリマーは、の式を有し、Ｒ２は水素、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、又はヘテロアリールから選択され；Ｒ３はスルホネート、アミン、カルボキシル基、カルボキシレート、又はそれらの組合せから選択されるポリマー官能基であり；Ｒ４は水素、脂肪族、及び（ＣＨ２）ｑＮＲａＲｂＲｃから選択され、Ｒａ、Ｒｂ及びＲｃは、独立して水素、脂肪族、アリール、及びそれらの組合せから選択され；ｑは１〜約１０の範囲であり；ｎは１〜約１００の範囲である。その他の実施態様において、ポリマーは、２つ以上のモノマーを含む共重合体である。 例示的な実施態様において、免疫組織化学染色用の組成物は、イミダゾール、２−ヒドロキシピリジン、及びそれらの組合せからなる群から選択されるエンハンサーを含む。その他の実施態様において、組成物は、安定剤のメタ重亜硫酸ナトリウムを含む。一実施態様において、４５℃での加速劣化試験におけるＨＰＬＣ、又はＫＨＳＯ４を用いたポリマースクリーニングのいずれかにより検討した結果、ポリマーは、ポリマーを含まない組成物に比べて、加速劣化条件下において約１０％〜約１００％、ＤＡＢの析出を減少させる。その他の実施態様において、ポリマーは、ポリマーを含まない組成物と比べて加速劣化条件下でＤＡＢの析出を減少させると同時に、検出条件下でポリマーを含まない組成物と同等に析出させる。例示的には、同等に析出させたポリマーを含んでいない組成物と比較して、適切な読み取り機によって測定したときに、測定された染色強度の平均値において統計的に有意な差が発生しないことを含む。更に例示的には、ポリマーは、溶媒中においてＤＡＢ色素原の溶解性を維持するように、ＤＡＢ色素原との複合体を形成するよう構成されている。一実施態様において、安定剤及びポリマーは実質的に貯蔵条件下でＤＡＢ色素原の分解及び／又は酸化を防ぐ。 例示的な実施態様において、免疫組織化学染色による検出のための組成物は、ＤＡＢ色素原、エンハンサー、安定剤、及びポリマーを含み；エンハンサーはイミダゾール又は２−ヒドロキシピリジンであることを特徴とし、安定剤はメタ重亜硫酸ナトリウム又は亜硫酸水素ナトリウムであり、ポリマーはデキストラン硫酸、ポリスチレンスルホネート、ポリエチレンイミン、アミノデキストラン、ＤＥＡＥ−デキストラン、ポリスチレンスルホネートマレイン酸コポリマー、ポリビニルスルホン酸、ポリ（２−ビニル−１−メチルピリジニウムブロミド、ポリ（２−メチルアクリルオキシエチルトリメチルアンモニウムブロミド、又はポリ（アクリルアミド／２−メチルアクリルオキシエチルトリメチルアンモニウムブロミドであり；検出溶液は、ポリマーが溶液中でＤＡＢ色素原の量を維持するよう、ＤＡＢ色素原又は生成物を複合化する保存条件下で安定なままであるように構成されていることを特徴とし；検出溶液は、免疫組織化学染色に適したシグナルを生成するために、ＤＡＢが検出条件下で析出するよう構成されていることを特徴とする。一実施態様において、ＤＡＢ色素原は３，３’−ジアミノベンジジンであり、安定剤はメタ重亜硫酸ナトリウムであり、ポリマーはポリエチレンイミンである。その他の実施態様において、組成物は、約１ｍＭ〜約１５ｍＭの３，３’−ジアミノベンジジン、約１ｍＭ〜約２０ｍＭのイミダゾール、約１ｍＭ〜約２０ｍＭの２−ヒドロキシピリジン、約０．１ｍＭ〜約３ｍＭのメタ重亜硫酸ナトリウム及び約０．０５％（ｗ／ｗ）〜約０．５％（ｗ／ｗ）のポリエチレンイミンを含む。 ＤＡＢ色素原を用いて組織試料中の標的を検出するための方法は、標的に特異的である特異的結合部分と組織試料を接触させること、特異的結合部分を酵素コンジュゲートで標識すること、ＤＡＢ又はその誘導体、安定剤、及び保存条件下でＤＡＢの析出を減少させるが、検出条件下ではＤＡＢの析出を維持するように構成されたポリマーを含有する色素原溶液と組織試料を接触させること、組織試料を酸化剤と接触させ、酸化剤、色素原溶液、及び酵素コンジュゲートの間の反応によりＤＡＢを標的に近位で沈着させること、組織試料を対比染色剤と接触させること、及びＤＡＢ色素原を見出すことにより組織試料中の標的を検出することを含む。一実施態様において、組織試料は、ホルマリン固定、パラフィン包埋組織試料である。他の実施態様では、保存条件は他の試薬と流体連通していない密封保存容器を含み、検出条件は酸化剤と組織試料上に沈着され酵素に接触した色素原免疫組織化学的検査のための組成物を含む。他の実施態様では、特異的結合部分は抗体又は核酸プローブである。さらに他の実施態様では、特異的な結合部分を標識することは、ハプテンに特異的な抗ハプテン抗体を含む酵素コンジュゲートを用いてオキサゾール、ピラゾール、チアゾール、ジニトロフェニル以外のニトロ化合物、ベンゾフラザン、トリテルペン、尿素、チオ尿素、ロテノイド、クマリン、シクロリグナン、ヘテロビア、アゾアリール、又はベンゾジアゼピンから選択されるハプテンを検出することを含む。様々な実施態様において、ハプテンは、ＨＱ、ＤＩＧ、ＤＮＰ、ＴＳ、ＮＰ、ＤＣＣ、及びビオチンから選択される。一実施態様において、酵素はペルオキシダーゼである。例えば、酵素は西洋ワサビペルオキシダーゼである。さらに他の実施態様において、組織試料を色素原溶液と接触させることは、ＤＡＢ又はその誘導体を含む第一成分溶液、安定剤を含む第二成分溶液、及びポリマーを含む第三成分溶液を組織試料に加えて、組織試料と接触させながら、色素原溶液を形成することを含む。更なる実施態様において、本方法は、本明細書に記載されるようにＤＡＢ組成物と組織試料を接触させることを含む。 例示的な実施態様において、ホルマリン固定パラフィン包埋組織試料中の標的を検出する方法は、組織試料をハプテン化抗体と接触させること、抗ハプテン抗体及び西洋ワサビペルオキシダーゼを含む酵素コンジュゲートに組織試料を接触させること、組織試料を色素原組成物、即ちＤＡＢ色素原又はその誘導体、イミダゾール、２−ヒドロキシピリジン、及びそれらの組合せから選択されるエンハンサー、メタ重亜硫酸ナトリウム；及びデキストラン硫酸、ポリスチレンスルホネート、ポリエチレンイミン、アミノデキストラン、ＤＥＡＥ−デキストラン、ポリスチレンスルホネートマレイン酸コポリマー、ポリビニルスルホネート、ポリ（２−ビニル−１−メチルピリジニウムブロミド、ポリ（２−メチルアクリルオキシエチルトリメチルアンモニウムブロミド、ポリ（アクリルアミド／２−メチルアクリルオキシエチルトリメチルアンモニウムブロミド、及びそれらの組合せから選択されるポリマーを含有する色素原組成物と接触させること；水素ペルオキシダーゼと組織試料を接触させること；組織試料をヘマトキシリン対比染色料に接触させること、及び組織試料中の標的を検出することを含む。更なる例示的な実施態様において、組織試料の発色検出用キットは、ＤＡＢ色素原、エンハンサー、安定剤、及びポリマーを含んでいない組成物と比較してＤＡＢ析出を低減又は防止することが可能なポリマーを含み、ＤＡＢ色素原及びポリマーは第一のディスペンサー又はボトル内に収容される。一実施態様において、エンハンサーは、イミダゾール、２−ヒドロキシピリジン、及びそれらの組合せから選択され、安定剤は、メタ重亜硫酸ナトリウムである。その他の実施態様において、キットは更に、第二のディスペンサー又はボトル内に包装された酵素及び抗体コンジュゲートを含む。その他の実施態様において、ポリマーは、４５℃での加速劣化試験におけるＨＰＬＣ、又はＫＨＳＯ４を用いたポリマースクリーニングのいずれかによって測定した結果、析出を１０％を越え約５０％まで減少させる。 その他の実施態様において、抗体は抗ハプテン抗体であり、酵素は西洋ワサビペルオキシダーゼである。その他の実施態様において、キットは更に、第三のディスペンサー又はボトル内に収容された過酸化水素を含む。一実施態様において、ポリマーは、第一のディスペンサー又はボトル内にＤＡＢ色素原の析出を低減させるために有効で、同時に酵素及び抗体コンジュゲート及び過酸化水素にＤＡＢ色素原を接触させる際に析出を可能にするのにも効果的である濃度で存在する。実例として、析出を可能にすることは、適切な読み取り機によって測定したときに、ポリマーを含まない比較用の発色検出の組成物と比較して、測定された染色強度の平均値において統計的に有意な差を生じさせないことを含む。 本発明における、前述及びその他の目的、特徴、及び利点は、以下の添付図面を参照しながら進める詳細な説明で明らかにする。ＤＡＢ色素原溶液で扁桃組織試料のＫｉ６７染色がされているコントロールスライドの画像である。ＤＡＢ色素原溶液及びデキストラン硫酸（分子量＝９ｋＤａ〜２０ｋＤａ、２ｗｔ％）でＫｉ６７染色を行った扁桃組織切片の画像である。ＤＡＢ色素原溶液でＫｉ６７染色を行った扁桃組織切片の画像である。ＤＡＢ色素原溶液及びＭｗ＝１．５ｋＤａ（５ｗｔ％）のポリスチレンスルホネート（ＰＳＳ）ポリマーでＫｉ６７染色を行った扁桃組織切片の画像である。ＤＡＢ色素原溶液及びＭｗ＝５．１ｋＤａ（５ｗｔ％）のＰＳＳポリマーでＫｉ６７染色を行った扁桃組織切片の画像である。ＤＡＢ色素原溶液及びＭｗ＝７．５ｋＤａ（５ｗｔ％）のＰＳＳポリマーでＫｉ６７染色を行った扁桃組織切片の画像である。ＤＡＢ色素原溶液及びＭｗ＝１６ｋＤａ（５ｗｔ％）のＰＳＳポリマーでＫｉ６７染色を行った扁桃組織切片の画像である。ＤＡＢ色素原溶液及びＭｗ＝３５ｋＤａ（５ｗｔ％）のＰＳＳポリマーでＫｉ６７染色を行った扁桃組織切片の画像である。ＤＡＢ色素原溶液で扁桃組織試料のＫｉ６７染色がされているコントロールスライドの画像である。ＤＡＢ色素原溶液及びＭｗ＝１０ｋＤａのアミノデキストランポリマーでＫｉ６７染色を行った扁桃組織切片の画像である。ＤＡＢ色素原溶液及びＭｗ＝４０ｋＤａのアミノデキストランポリマーでＫｉ６７染色を行った扁桃組織切片の画像である。ＤＡＢ色素原溶液及びＭｗ＝７０ｋＤａのアミノデキストランポリマーでＫｉ６７染色を行った扁桃組織切片の画像である。代表的なＨＰＬＣトレース及びスペクトルのインデックスプロットの画像である。ＤＡＢ色素原溶液で扁桃組織試料のＫｉ６７染色がされているコントロールスライドの画像である。ＤＡＢ色素原溶液及び４ｗｔ％のＰＳＳ（Ｍｗ＝１．５ｋＤａ）でＫｉ６７染色を行った扁桃組織切片の画像である。ＤＡＢ色素原溶液及び４ｗｔ％のデキストラン硫酸（Ｍｗ＝６．５ｋＤａ〜１０ｋＤａ）でＫｉ６７染色を行った扁桃組織切片の画像である。ＤＡＢ色素原溶液で扁桃組織試料のＫｉ６７染色がされているコントロールスライドの画像である。ＤＡＢ色素原溶液及び５ｗｔ％のポリアリルアミン（Ｍｗ＝１５ｋＤａ）でＫｉ６７染色を行った扁桃組織切片の画像である。ＤＡＢ色素原溶液及び０．１ｗｔ％の直鎖状ポリエチレンイミン（Ｍｗ＝２．５ｋＤａ）でＫｉ６７染色を行った扁桃組織切片の画像である。ＤＡＢ色素原溶液及び０．５ｗｔ％の直鎖状ポリエチレンイミン（Ｍｗ＝２．５ｋＤａ）でＫｉ６７染色を行った扁桃組織切片の画像である。ＤＡＢ色素原溶液及び１．０ｗｔ％の直鎖状ポリエチレンイミン（Ｍｗ＝２．５ｋＤａ）でＫｉ６７染色を行った扁桃組織切片の画像である。ＤＡＢ色素原溶液及び３．０ｗｔ％の直鎖状ポリエチレンイミン（Ｍｗ＝２．５ｋＤａ）でＫｉ６７染色を行った扁桃組織切片の画像である。ＤＡＢ色素原溶液で扁桃組織試料のＫｉ６７染色がされているコントロールスライドの画像である。ＤＡＢ色素原溶液及び７ｗｔ％のＤＥＡＥ−デキストラン（Ｍｗ＝５００ｋＤａ）でＫｉ６７染色を行った扁桃組織切片の画像である。ＤＡＢ色素原溶液及び２ｗｔ％の直鎖状ポリエチレンイミン（Ｍｗ＝２．５ｋＤａ）でＫｉ６７染色を行った扁桃組織切片の画像である。Ｉ．序 本開示は、ＤＡＢ色素原及び／又はその誘導体と、色素原、対イオンの塩、又は形成中の亜硫酸水素塩の酸化によるサルフェート産物と複合体を形成することができる１つ以上の官能基を含むポリマーを含有する組成物に関する。ある量のポリマーは、色素原の析出を十分に減ずるか、又は実質的に防止するために使用される。開示された組成物は、組織染色などの染色手順の間、色素原の沈着を増加又は改善するために使用されうる。また、開示されるのは開示された組成物を使用する方法と開示された組成物を含むキットである。ＩＩ．定義および略語 特に断りがなければ、専門用語は一般的な用法に準じて使用される。分子生物学の一般的な用語の定義は、Ｂｅｎｊａｍｉｎ Ｌｅｗｉｎ，Ｇｅｎｅｓ ＶＩＩ，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ刊，２０００；Ｋｅｎｄｒｅｗら（編），Ｔｈｅ Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ刊，１９９４）；Ｒｏｂｅｒｔ Ａ．Ｍｅｙｅｒｓ（編），Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：ａ Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ，Ｗｉｌｅｙ，Ｊｏｈｎ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．刊，１９９５；及びＧｅｏｒｇｅ Ｐ．Ｒｅｄｅｉ，Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉｃ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ，２版，２００３に見られる。 単数形の「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、文脈内で特に明記しない限り、１又は複数を意味する。例えば、「細胞を含む（comprising a cell）」という語は１個又は複数個の細胞を含み、「少なくとも１個の細胞を含む」という句と同等とみなされる。「又は」という用語は、文脈内で特に明記しないかぎりは記載の代替要素又は２つ以上の要素の組合せのうちの１要素を意味する。波線（「」）は結合の切断を示すのに使用され、破線（「−−−」）は結合が特定の位置で形成されうることを示すのに使用される。 本明細書に記載のものと類似又は同等の材料は、本発明の技術を実施又は試験するのに使用されうるが、適切な方法および材料を以下に記載する。材料、方法及び例は単なる例示であって、限定を意図するものではない。 以下の用語や方法の説明は、本開示をより良く記述するため、並びに当業者が本開示を実施する手引きとして提供される。 類縁体（アナログ）、誘導体又は模倣物質：類縁体は親化合物と化学構造が異なる分子、例えば同族体（ホモログ）（アルキル鎖長の差などの化学構造の増分によって異なる）、分子断片一つ以上の官能基が異なる構造、イオン化の変化である。構造類縁体は、Remington（The Science and Practice of Pharmacology、第l9版（1995）、第28章）に開示されているものなどの技術による定量的構造活性相関（ＱＳＡＲ）を用いて見いだされることが多い。誘導体は、基本構造に由来する生物学的に活性な分子である。模倣物質は、生物学的に活性な分子などの別の分子の活性を模倣する分子である。生物学的に活性な分子は、化合物の生物学的活性を模倣する化学構造を含みうる。 アリール：実質的に炭化水素ベースの芳香族化合物又はその基（例えばＣ６Ｈ５）が置換基として別の基に結合したもので、ベンゼン、ナフタレン、フェナントレン、アントラセンなどに例示される環構造を有する。この用語は置換アリール化合物も包含する。 アビジン：生物学的試料中に存在するかもしれない他の小分子を実質的に除外してビオチンに特異的に結合する任意のタイプのタンパク質。アビジンの例としては、卵白、油糧種子タンパク質（例えば、大豆ミール）、及び穀物（例えば、小麦／トウモロコシ）の中に自然に存在しているアビジン類及び細菌由来のタンパク質であるストレプトアビジンが含まれる。 分岐状：この用語は、少なくとも３つの他の炭素原子に結合している炭素原子を含む１以上の単位を含む化合物及び／又は官能基を指す。 色素原：顔料や色素などの着色産物に転換し及び／又は該着色産物として析出しうる物質。所定の色素原は、電子供与体であり、酸化されると着色産物になる。色素原が着色産物を生産し、及び／又は酸化のような化学的転換の際に不溶性になる特性は、ＩＨＣにとって有用である。発色性化合物の特定の例として、限定ではなく、３，３’−ジアミノベンジジン（ＤＡＢ）、テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）、２，２’−アジノ−ジ−［３−エチルベンゾチアゾリンスルホネート］（ＡＢＴＳ）、ヨードニトロテトラゾリウム（ＩＮＴ）、テトラゾリウムブルー及びテトラゾリウムバイオレットを含む。ＤＡＢは、水溶液中で高度に不溶性である褐色の最終産物（例えば、ＨＲＰなどの酵素反応を介して）を生産する色素原である。 検出の十分条件：所望の活性を許容する任意の環境、例えば、プローブが標的と結合でき、相互作用の検出を可能にする環境。例えば、このような条件としては、適切な温度、緩衝液、並びに顕微鏡やデジタル画像処理機器などの検出手段を含む。 接触させること：２つ以上の部分の結合を可能にする配置、特に、例えば固体及び／又は液体の両形態での直接的物理的結合（例えば、スライドに付着させた生体試料などの生体試料を、本明細書に開示の組成物を含む溶液などの組成物と接触するように位置させること）。 コントロール：試料又は試験の妥当性を評価するためになされる手順又は試料。一例では、コントロールはポジティブコントロールなどの質コントロールである。例えば、ポジティブコントロールは、実際の試験試料と類似しているが、以前の経験から正の結果を得られることが分かっている手順又は組織や細胞などの試料である。ポジティブコントロールは、実際のどの試験試料も正の結果が得られなくても、試験の基本的条件で正の結果が得られることを確認する。特定の例では、ポジティブコントロールは、疑わしい抗原を含んでいることが以前の試験から分かっている試料である。他の例では、コントロールはネガティブコントロールである。ネガティブコントロールは、負の結果が得られることが以前の経験からわかっている手順又は試験試料である。ネガティブコントロールは、試験が測定可能な正の結果を示さない場合に得られるベースライン結果を示し、しばしばネガティブコントロールの値は、試験試料の結果から引かれる「バックグラウンド」値として扱われる。特定の例では、ネガティブコントロールは特異的な一次抗体を含まない試薬である。他の例にはキャリブレーターコントロール、即ちコントロール抗原を既知の量で含む試料を含む。このようなキャリブレーターコントロールは期待シグナル強度を有するので、実験間又は実験中の染色のばらつきを補正するのに使用されうる。 洗剤又は界面活性剤：水の表面張力を減ずる物質。特に、洗剤又は界面活性剤は表面活性剤又は界面活性剤であり、油−水界面に集中して乳化作用を及ぼす。洗剤は、化学作用の態様によりアニオン性、カチオン性又は非イオン性に分類される。非イオン性洗剤は、水素結合のメカニズムを介して機能する。さらに、界面活性剤又は洗剤は、２つの液体の間の表面張力を減ずる。界面活性剤分子は典型的には極性又はイオン性の「頭部」と非極性の炭化水素「尾部」を有する。水に溶けると、界面活性剤分子は凝集してミセルを形成し、ここで非極性の尾部は内側を向き、極性又はイオン性の頭部は外側の水性環境に向いている。非極性の尾部はミセルの中で非極性の「ポケット」を作る。溶液中の非極性化合物は、界面活性剤分子により形成されたポケット内に隔離されるので、非極性化合物は水溶液中に混合されたままである。 検出：例えば、試料中における（シグナル又は特定の抗原、タンパク質又は核酸などの）因子の有無を決定すること。幾つかの例において、これはさらに、定量化及び／又は局在化、例えば細胞や特定の細胞コンパートメント内での局在化を含みうる。「検出する」とは、標的分子が生体試料中に存在するかどうかを決定するなどの、何かが存在するか存在しないかを決定する任意の方法を意味する。例えば、「検出する」とは、視覚的又は機械的装置を用いて試料が具体的な特徴を示すか決定することを含みうる。特定の例では、検出は、標的に結合したプローブを視覚的に観察すること、又はプローブが標的に結合していないことを視覚的に観察することを意味する。例えば、光学顕微鏡や他の顕微鏡手段は、ここに記載の方法で色素原の沈殿を検出するのに一般的に使用される。 増強（増強する、エンハンサー、増強、増強する〜）：エンハンサー又は増強剤は、任意の化合物又は化合物の任意の組合せであり、このような化合物を有さない酵素活性と比較して、酵素の触媒活性が十分に増加する。エンハンサー又は増強剤はまた、活性コンジュゲートが受容体部位に結合する速度を増加又は加速する化合物又は化合物の組合せ、とも定義されうる。増強（増強する、増強、増強する〜）は酵素の触媒活性が、このようなエンハンサーを含まないプロセスと比べて増加されるプロセスである。増強（増強する、増強、増強する〜）はまた、活性コンジュゲートが受容体部位に結合する速度の増加又は加速とも定義されうる。増強（増強する、増強、増強する〜）はまた、病理学者が点数化するなどにより、視覚的に測定されうる。特定の実施態様では、点数は０より大きい数値から４より大きい数値の範囲であり、数字が大きいことは、視覚的検出が良好であることを意味する。より典型的には、点数は０より大きい数値から約４＋＋まで、例えば１、１．５、２、２．５、３、３．５、３．７５、４、４＋及び４＋＋の範囲である。加えて、増強（増強する、増強、増強する〜）は、酵素の見かけＶｍａｘを決定することで測定されうる。特定の実施態様では、この用語は、０ｍＯＤ／ｍｉｎより大きい値から約４００ｍＯＤ／ｍｉｎ、例えば約１５ｍＯＤ／ｍｉｎ、１８ｍＯＤ／ｍｉｎ、約２０ｍＯＤ／ｍｉｎ、約４０ｍＯＤ／ｍｉｎ、約６０ｍＯＤ／ｍｉｎ、約８０ｍＯＤ／ｍｉｎ、約１００ｍＯＤ／ｍｉｎ、約１２０ｍＯＤ／ｍｉｎ、約１４０ｍＯＤ／ｍｉｎ、約１６０ｍＯＤ／ｍｉｎ、約２００ｍＯＤ／ｍｉｎ、約２５０ｍＯＤ／ｍｉｎ、約３００ｍＯＤ／ｍｉｎ、約３５０ｍＯＤ／ｍｉｎ及び約４００ｍＯＤ／ｍｉｎの範囲の見かけＶｍａｘ値（光学密度／分として測定）を包含する。より典型的には、Ｖｍａｘの範囲は０ｍＯＤ／ｍｉｎより大きい値から約１６０ｍＯＤ／ｍｉｎ、例えば約２０ｍＯＤ／ｍｉｎ、約４０ｍＯＤ／ｍｉｎ、約６０ｍＯＤ／ｍｉｎ、約８０ｍＯＤ／ｍｉｎ、約１００ｍＯＤ／ｍｉｎ、約１２０ｍＯＤ／ｍｉｎ、約１４０ｍＯＤ／ｍｉｎ及び約１６０ｍＯＤ／ｍｉｎである。加えて、増強は、０ｍＭより大きいエンハンサーの任意の濃縮を用いて行ってよい。典型的には、増強は、０ｍＭより大きいエンハンサー濃度から約１００ｍＭまで；さらに典型的には、約０．０１ｍＭから約１００ｍＭ、例えば約０．０１ｍＭ、約０．０２ｍＭ、約０．０５ｍＭ、約０．１０ｍＭ、約０．２０ｍＭ、約０．５０ｍＭ、約１．０ｍＭ、約２．０ｍＭ、約３．０ｍＭ、約５．０ｍＭ、約１０．０ｍＭ、約２０．０ｍＭ、約３０．０ｍＭ、約４０．０ｍＭ、約５０．０ｍＭ、約７５．０ｍＭ又は約１００．０ｍＭ、例えば約０．０１ｍＭから約０．１０ｍＭ、約０．０５ｍＭから約０．５０ｍＭ、約０．４ｍＭから約１．０ｍＭ、約０．５ｍＭから約２．０ｍＭ、約１．０ｍＭから約１０．０ｍＭ、約５．０ｍＭから約５０．０ｍＭ及び約２０．０ｍＭから約１００．０ｍＭの範囲で行われる。一般的、及びその種の増強（増強する、エンハンサー、増強、増強する￣）は、本願譲受人の同時係属出願、米国特許出願公開第２０１２／０１７１６６８号に開示されているものであり、これを援用して本文の一部とする。 固定：細胞や組織の成分をなるべく生体の状態に近い状態で保存し、変性なしで調製手順に供するプロセス。固定は、細胞死の後に始まる自己融解と細菌分解のプロセスを阻止し、細胞及び組織の成分を安定化させて、ＩＨＣなどの次の段階の組織プロセシングに耐えられるようにする。組織は、アルデヒド（ホルムアルデヒド、パラホルムアルデヒド、グルタルアルデヒドなど）などの固定液を用いて、灌流固定又は浸漬固定のいずれかで固定される。他の固定液としては、酸化剤（例えば四酸化オスミウム及びクロム酸などの金属イオン及び複合体）、タンパク質変性剤（例えば酢酸、メタノール及びエタノール）、機構が未解明の固定液（例えば昇汞、アセトン及びピクリン酸）、併用剤（例えばカルノア固定液、メタカーン、ブアン固定液、Ｂ５固定液、ロスマン固定液及びＧｅｎｄｒｅ固定液）、電子レンジ及びその他（例えば除体積固定や蒸気固定）を含む。洗剤、タンニン酸、フェノール、金属塩（例えば塩化亜鉛、硫酸亜鉛やリチウム塩など）及びランタンなどの添加剤も固定液に含まれうる。ＩＨＣの試料を調製するのに最も一般的に使用される固定液は、ホルムアルデヒドであり、通常はホルマリン液の形態である（緩衝液中４％ホルムアルデヒド、１０％緩衝ホルマリンと呼ばれる）。 ハプテン：典型的には抗体と特異的に結合しうる小分子であるが、典型的には担体分子との組合せ以外で免疫原性であることが実質的に不可能である分子。典型的なハプテンはオキサゾール、ピラゾール、チアゾール、ジニトロフェニル以外のニトロアリール化合物、ベンゾフラザン、トリテルペン、尿素、チオ尿素、ロテノイド、クマリン、シクロリグナン、ヘテロビアリール、アゾアリール、又はベンゾジアゼピンを含む。より具体的には、ハプテンは、２，４−ジニトロフェニル（ＤＮＰ）、ビオチン、ジゴキシゲニン、５−ニトロ−３−ピラゾールカルバミド（ＮＰ）、３−ヒドロキシ−２−キノキサリンカルバミド（ＨＱ）、２−アセトアミド−４−メチル−５−チアゾールスルホンアミド（ＴＳ）、及び４−（ジエチルアミノ）アゾベンゼン−４’−スルホンアミド（ＤＡＢＳＹＬ）、又は７−（ジエチルアミノ）−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−カルボン酸（ＤＣＣ）であってもよい。 免疫組織化学（ＩＨＣ）：抗原と、抗体などの特異的結合剤又は部分との相互作用を検出することで、試料中の抗原の存在や分布を決定する方法。抗原（標的抗原など）を含む試料を、抗体抗原結合を可能にする条件下で抗体とインキュベートする。抗体抗原結合は、抗体に結合した検出可能な標識によって（直接的検出）、又は、一次抗体に対して産生した二次抗体に結合した検出可能な標識によって（例えば間接的検出）検出されうる。検出可能な標識としては、限定されないが、放射性同位体、蛍光色素（フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート及びローダミン）、酵素及び色素原分子を含む。 インサイツハイブリダイゼーション（ＩＳＨ）：ハイブリダイゼーションの一種であり、標識した相補的ＤＮＡ又はＲＮＡ鎖（即ちプローブ）を使用して、組織の一部又は切片における（インサイツ）又は組織が十分に小さい場合（例えば植物の種やショウジョウバエの胚）は組織全体における（ホールマウントＩＳＨ）特定のＤＮＡ又はＲＮＡの局在を明らかにする。これは、組織切片中のタンパク質の局在を明らかにする免疫組織化学とは区別される。ＤＮＡ ＩＳＨは、医学的に染色体の完全性を診断するなど、染色体構造の決定に使用されうる。ＤＮＡ ＩＳＨ（ハイブリダイゼーション組織化学）は、組織切片やホールマウント中のｍＲＮＡや他の転写産物を測定し局在を明らかにするのに使用される。ハイブリダイゼーション組織化学では、通常、試料細胞及び組織を処理し、標的の転写産物を所定位置に固定し、標的分子に対するプローブのアクセスを増強させる。上述したように、プローブは、標識された相補的ＤＮＡ又は相補的ＲＮＡ（リボプローブ）のいずれかである。プローブは温度を上昇させると標的の配列にハイブリダイズし、その後余剰のプローブは洗い流される（ハイブリダイズしない余剰のＲＮＡプローブの場合は、事前にリボヌクレアーゼを用いての加水分解後）。温度、塩及び／又は洗剤の濃度などの溶液パラメーターを操作して、あらゆる不一致の相互作用を排除してよい（即ち、完全一致のみ結合が維持される）。次いで、放射性、蛍光又は抗原標識塩基（例えばジオキシゲニン）などで効果的に標識された標識プローブの局在が明らかにされ、場合によってはオートラジオグラフィー、蛍光顕微鏡検査又は免疫組織化学などを用いてそれぞれ組織内で定量化される。 目的とする分子又は標的：存在、位置及び／又は濃度を決定される分子。目的とする分子の例には、ハプテンでタグ付けされた核酸配列及びタンパク質を含む。 マルチプレックス、マルチプレックスの、マルチプレクシング：本開示の実施態様は、複数の異なるコンジュゲートを用いて、試料中の複数の標的を所望により実質的に同時に又は連続して検出することを可能にする。マルチプレックスは、核酸、一般的には、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ペプチド、タンパク質を、両方個別に、かつ任意の及び全ての組合せで、同定及び／又は定量することを含みうる。マルチプレックスはまた、その解剖学的文脈において、細胞内の遺伝子、メッセンジャー及びタンパク質の２つ以上を検出することを含みうる。 試料：「試料」という用語は、その中又は上に標的が存在しうる、任意の液体、半固体又は固体の物質（又は材料）を意味する。具体的には、試料は、生体試料又は生物学的物質由来の試料でありうる。生体試料の例としては、組織試料及び細胞学的試料を含む。幾つかの実施例において、生体試料はヒト対象などの動物対象由来である。生体試料とは、単細胞生物、なかでも例えば細菌、酵母、原生動物及びアメーバ、多細胞生物（例えば植物、又は、健康な若しくは健康と思われるヒト対象又は診断若しくは検査される癌などの症状や疾患を発症しているヒト対象を含む動物）を限定ではなく包含する任意の生物から得られた、又は排泄若しくは分泌された任意の固体又は液体の試料である。例えば、生物学的試料は、例えば血液、血漿、血清、尿、胆汁、腹水、唾液、脳脊髄液、水性又は硝子体の体液、又は任意の体分泌、浸出液、滲出液（例えば膿瘍や任意の他の感染又は炎症部位から得られる液体）又は関節（例えば正常な関節又は疾患を発症している関節）由来の液体から得られた生物学的液体でありうる。生物学的試料はまた、任意の器官又は組織（腫瘍生検などの生検又は解剖学的試料を含む）から得られる試料であってよく、又は（一次細胞であれ培養細胞であれ）細胞若しくは任意の細胞、組織又は器官の条件培地を含みうる。幾つかの実施例において、生物学的試料は核抽出物である。幾つかの実施例において、生物学的試料は細菌細胞質である。他の実施例において、試料は、試験試料である。例えば、試験試料は、対象から得られた生物学的試料から調製された細胞、組織又は細胞ペレットの切片である。一例では、対象は、特定の症状又は疾患のリスクがあるか又は罹患している対象である。 特異的結合部分：特異的結合対のメンバー。特異的結合対は、それらが、別の分子への結合を実質的に排除してお互いに結合することを特徴とする一対の分子である（例えば、特異的結合対は、生物学的試料中の他の分子との結合対の２つのメンバーのどちらかについての結合定数よりも、少なくとも１０３Ｍ−１より大きい、１０４Ｍ−１より大きい、又は１０５Ｍ−１より大きい結合定数を有しうる）。特異的結合部分の特定の例は、特異的結合タンパク質（例えば、抗体、レクチン、ストレプトアビジンなどのアビジン、プロテインＡ）、核酸配列、及びタンパク質−核酸を含む。特異的結合部分は、そうした特異的結合タンパク質が特異的に結合している分子（又はその一部）も含みうる。 安定剤：色素原を分解、析出、及び／又は酸化から実質的に防ぐことができる化合物。一実施態様において、安定剤は、例えばメタ重亜硫酸ナトリウムなどの抗酸化剤である。 組織：器官内で同様の機能を果たす相互接続した細胞の集合。ＩＩＩ．色素原−ポリマー組成物 所定の開示された実施態様は、色素原、特に、ＤＡＢ色素原、及び／又はその誘導体、及び色素原、対イオン塩、又は亜硫酸水素塩酸化による硫酸塩生成物と複合体を形成することができるポリマーを含有する組成物に関する。開示された組成物は、組織染色などの比色手順において使用されうる。当業者であれば、特定のプロトコルのために有用な組成物は、異なるプロトコルのものと変わる場合があり、本明細書に開示された組成物の範囲内であることを理解されよう。更に、異なる試薬濃度又は試薬量の比率を有するような様々な任意の物質を、限定されないが、安定剤、エンハンサー、対比染色、及び／又は緩衝剤を含め、本発明によって案出された有用な組成物に含めてもよい。 開示された組成物は、組織染色などの染色手順において、色素原の沈着、特にＤＡＢ沈着を増加させるために使用されうる。表１は、本開示に係るポリマーを含むベースのＤＡＢ色素原溶液（ＤＡＢ、イミダゾール、２−ヒドロキシピリジン、及びメタ重亜硫酸ナトリウム）を様々な濃度の硫酸水素カリウム（ＫＨＳＯ４）に曝露した、特定の実施例から得られた結果を詳細に示している。 メタ重亜硫酸ナトリウムは、ＤＡＢ組織染色を著しく阻害しない濃度で、酸化防止剤安定剤として使用されている。特定の作用理論に限定されるものではないが、この安定剤は、不溶性のＤＡＢ硫酸水素塩の析出物を形成すると考えられる酸化硫酸水素塩の副生成物を形成している（元素分析に基づく）。このＤＡＢ硫酸水素塩は低水溶性を有し、容易に溶液から析出する。 ポリマー安定化ＤＡＢ色素原について、熱ストレス安定性（４５℃）及び硫酸水素カリウムの添加前及び添加後におけるＤＡＢ硫酸塩の析出を阻害する各ポリマーの能力を判断するため、ＨＰＬＣ分析を行った。試料は、残留ＤＡＢ濃度（分析超遠心、「ＡＵＣ」）について、内部標準としての２−ヒドロキシピリジン（ＡＵＣ）と比較して分析した。２−ヒドロキシピリジン濃度は、熱ストレス又は硫酸水素カリウムの添加のいずれかによっても影響を受けないことが示された。ＤＡＢ四塩酸塩が不溶性ＤＡＢ硫酸水素塩の析出物を形成した場合、ＤＡＢ濃度（ＡＵＣ）は減少した。この析出物はプレカラムＨＰＬＣフィルターを用いて試料から除去することが可能なため、ＨＰＬＣでは検出できない。熱応力は、ＤＡＢの酸化を促進することが示された。これらの副生成物は、実質的な濃度になるまで溶液中で蓄積せず、そして溶液から析出した。最もＤＡＢ熱安定性があり、ＤＡＢ硫酸塩の析出物の形成を最も阻害するポリマーが、有力候補となった。 表１が示すように、色素原溶液及び開示されたポリマーの特定の実施態様を含有する組成物において、ＤＡＢ硫酸塩の析出は防止された。図１及び図２は、特定の実施例から得られた結果を示す画像である。図１は、ＤＡＢ色素原溶液のみを含む組成物で染色した組織切片の画像であり、図２は、ＤＡＢ色素原溶液と開示されたポリマー（例えば、２ｗｔ％のデキストラン硫酸、Ｍｗ＝９ｋＤａ〜２０ｋＤａ、ＰＥＧなし）を含む組成物で染色した組織切片の画像である。Ａ．色素原 開示された組成物は、一つ以上の色素原を含んでよい。本開示の実施態様は、特に、ジアミノベンジジン（ＤＡＢ）、及び／又はその誘導体を含有する組成物の形成を対象とする。３，３’−ジアミノベンジジンなどのＤＡＢ色素原は、以前から免疫ブロット及び免疫組織化学的染色などの種々の染色手順に使用されてきた。開示された実施態様に使用されるＤＡＢ色素原の量は変えうるが、機能的には、許容される染色された組織試料を提供するのに十分な量、例えば、０．０５ｍＭから約１００ｍＭまで、より典型的には０．１ｍＭから約１５ｍＭまで、更により典型的には約１ｍＭから約１１ｍＭまでの量で使用され、実施例は、典型的には約５ｍＭから約５．５ｍＭまでのＤＡＢ色素原、及び／又はその誘導体を含む。Ｂ．ポリマー 種々のポリマーが開示されている組成物において使用されうる。本開示によって企図される適切なポリマーは、典型的には、ポリマー骨格と、ＤＡＢ色素原及び／又はその誘導体の析出を減少させ又は実質的に防止するのに有効である少なくとも１つの、典型的には複数の官能基を含む水溶性ポリマーである。ポリマー合成に関して使用される反応性の化学開始剤は、多くの場合、ポリマー鎖の末端位置に官能基を残す。これらの基は、特に低分子量のポリマーについて、ポリマーの溶解性及び官能性に影響を与えうるが、本明細書に記載の官能性は、ポリマー骨格にまたがる官能基に関する。例示的な実施態様では、現在の開示の範囲内で、付加的な作用性を提供する官能基を有する反応性の開始剤を用いて開始されたポリマーは、開示された組成物中に含まれる。１．ポリマー骨格 開示されたポリマーの特定の実施態様は、ポリマー骨格を含む。ポリマー骨格は、水溶性又は実質的に水不溶性であってもよい。ポリマー骨格それ自体が実質的に水不溶性である実施態様では、ポリマー全体（例えば、適切な官能基と組み合わされたポリマー骨格）は、実質的に水溶性であるべきである。特定の開示された実施態様は、以下に示す、式１、式２、及び式３のいずれか一つを有するポリマー骨格に関する。 式１において、Ｒ１は脂肪族、アリール、ヘテロアリール、及びヘテロ原子含有部分から選択されうる。一実施態様において、Ｒ１は、本明細書に開示される適切なポリマーの官能基のいずれかを更に含んでもよい。ヘテロ原子含有部分は、エステル、酸及びアミドから選択されうる。Ｒ２は、水素、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、又はヘテロアリールから選択されうる。式２、式３において、各Ｙは、独立して酸素、硫黄、及びＮＲａから選択されてよく、ここで、Ｒａは水素、脂肪族、アリール、ヘテロアリール、及びヘテロ脂肪族から選択されうる。Ｒ３は、本明細書に開示される適切なポリマーの官能基のいずれかから選択されてよく、ｎは１〜約１００の範囲である。 一実施態様において、ポリマーは以下の式４又は式５を有していてもよい。 式４及び式５を参照すると、Ｒ２は、水素、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、又はヘテロアリールから選択されてよく、Ｒ３は、スルホネート、アミン、カルボキシル基、カルボン酸塩、又はこれらの組合せから選択されるポリマーの官能基であってもよい。Ｒ４は、水素、脂肪族、及び（ＣＨ２）ｑＮＲａＲｂＲｃから選択してもよく、式中、Ｒａ、Ｒｂ及びＲｃは、独立して、水素、脂肪族、アリール、及びそれらの組合せから選択されてよく、ｑは１〜約１０の範囲であり；ｎは１〜約１００の範囲である。 更に、開示されたポリマー骨格のいずれかは、ハイブリッドポリマー骨格を生成するために、他のポリマー骨格と組み合わされてもよい。 特定の開示された実施態様は、デキストラン、ポリスチレン、ポリビニル誘導体、ポリメタクリレート誘導体、ポリアクリルアミド誘導体、多糖類誘導体、ポリペプチド誘導体、核酸及び核酸骨格誘導体、ポリスチレン／マレイン酸コポリマー、ポリ（アクリルアミド／メタクリレート）コポリマー等から選択されるポリマー骨格などを含む。 適切な水溶性部分の例としては、デキストランポリマーが含まれる。デキストランは、水、塩、及び組成物を含む電解液中で容易に溶解し、ｐＨは溶解度にほとんど影響を及ぼさない。５０％（ｗ／ｖ）を超えて含有する溶液のような濃縮デキストラン溶液を調製しうる。当業者であれば、デキストランは、種々の分子量を有することを理解されよう。 他のポリマー骨格は、開示された組成物を形成するために使用されるポリマー材料それ自体が実質的に水溶性である限り、溶解性が低いか、又は実質的に非水溶性の骨格に基づきうる。ポリマー骨格のこのクラスの例としては、スチレン系ポリマー材料によって例示されるようなアリール骨格を含む。２．適切なポリマー官能基 適切な官能基は、生成物の形成中及び形成後の溶液中にＤＡＢ色素原及び／又はその誘導体を維持するのを容易にする任意の官能基を含む。一例として、適切な官能基としては、カルボキシレート、スルホネート（Ｒ−ＳＯ２Ｏ−）、サルフェート（ＳＯ４２−）、第一級、第二級、第三級及び第四級アミンを含むアミン、置換アミン、及びそのような官能基の組合せが挙げられる。アミン官能基は、脂肪族アミン、特に、１つ以上の水素原子、又は１つ以上の低級アルキル基、例えばメチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基で官能化されたアミン；アリールアミン、例えば１つ以上のアリール基、特にフェニルで官能化されたアミン；ヘテロアリールアミン；及びその組合せから選択されうる。一実施態様において、ポリマーはポリアルキレンアミンであってもよい。３．例示的なポリマー 以下のポリマーは、開示された組成物を形成するのに適したクラス及び種類のポリマーを単に例示することを意味するものであり、限定することを意図するものではない。スルホネート及びサルフェートポリマーは、ＤＡＢ及び／又はその誘導体と水溶性ポリマー複合体を形成することにより、ＤＡＢ硫酸塩の析出を実質的に減少させ又は防止する。また、ＤＡＢ色素原の組織染色に対するサルフェート及びスルホネートポリマーの効果は、重量平均分子量（Ｍｗ）及び／又は数平均分子量（Ｍｎ）及び／又はポリマーｗｔ％濃度などのポリマーの大きさを変えることによってコントロールしうる。ポリマーのＭｗが大きくなるほど、ＤＡＢ色素原の組織染色は減少し、ヘマトキシリンのバックグラウンド染色は増加した。例えば、図３〜図８は、ポリスチレンスルホネート（ＰＳＳ）ポリマーのＭｗの増加に伴うＤＡＢ沈着について、例示的な実施例での効果を総括的に示したものである。図３は、ＤＡＢ色素原溶液のみを含む組成物を用いて作製した染色組織切片のコントロール画像である（例えば、ＯＰＴＩＶＩＥＷ（登録商標）ＤＡＢ溶液、ベンタナ・メディカル・システムズ社、アリゾナ州ツーソン、以下「ベンタナ」という。）。図４〜図８は、ＤＡＢ色素原溶液と約１．５ｋＤａ（図４）、５．１ｋＤａ（図５）、７．５ｋＤａ（図６）、１６ｋＤａ（図７）、及び３５ｋＤａ（図８）の分子量を有するＰＳＳポリマーを含む組成物を用いて作製した染色組織切片の画像である。これらの例示的な実施態様で使用された全てのポリマーは、５ｗｔ％のポリマー濃度で使用した。図４〜図８に示すように、ＰＳＳポリマーのより高い分子量の誘導体は、ＤＡＢ染色の減少、及びマトキシリンのバックグラウンド染色の増加を導く。例示的な実施態様において、低分子量のデキストラン硫酸、及びポリスチレンサルフェートは、ＤＡＢの組織染色への影響を最小限に抑えながら、ＤＡＢ硫酸塩の析出に対処する。 アミンポリマーはまた、ＤＡＢ硫酸塩の析出を低減又は実質的に予防するのに有用である。一実施態様において、アミンポリマーは、ＤＡＢ、及び／又はその誘導体の析出を完全に阻害するために使用されうる。第一級、第二級、第三級及び第四級アミンポリマーが、本開示によって企図される。アミンポリマーは、ＤＡＢ組織染色に、サルフェート及びスルホネートポリマーと同じ影響を与えることはない。作用について特定の理論に束縛されるものではないが、ポリマー濃度が粘度を増加させ得、よってＤＡＢ組織染色に影響を与えうると今は考えられる。アミンポリマーは、カチオン性ポリマーとサルフェートアニオンとの間で水溶性ポリマー複合体を形成し、これによりＤＡＢと複合体を形成し、不溶性ＤＡＢサルフェート複合体を形成するのに利用できる遊離のサルフェートの濃度を低下させることによって、ＤＡＢ硫酸塩の析出を実質的に低減又は防止しうる。組織染色はまた、アミンポリマーの溶解性によってもまた影響を受ける可能性があり、これは、Ｍｗ＝１５ｋＤａのポリアリルアミンなどのアミンポリマーの特定の実施態様において反応緩衝液中のｐＨが中性のときに問題となりうる。適した例示的なアミンポリマーには、ポリエチレンイミン（直鎖状又は分岐状）、ＤＥＡＥ−デキストラン及びポリ（２−メチルアクリルオキシエチルトリメチルアンモニウムブロミド）ポリマーを含む。 一実施態様において、組成物は１種類の色素原、又は２種類以上の色素原、及びアミノデキストランポリマーを含む。開示された組成物を用いた特定の実施例の結果は、図９〜図１２にまとめて示す。図９は、ＤＡＢ色素原溶液のみを組織試料に適用したコントロールで得られた結果を示す画像である。図１０〜図１２は、ＤＡＢ色素原溶液と様々な分子量の４ｗｔ％のアミノデキストランを含有する組成物が組織切片に添加された、染色された組織切片の画像である。図１０はＭｗ＝１０ｋＤａのアミノデキストランポリマーを用いて得られた結果を示し、図１１はＭｗ＝４０ｋＤａのデキストランポリマーに関するものであり、図１２はＭｗ＝７０ｋＤａのアミノデキストランポリマーを用いて得られた結果を示している。アミノデキストランベースのポリマーのポリマー濃度（ｗｔ％）は、典型的には組織染色にあまり影響を与えないが、ポリマーの溶解性及びＤＡＢ硫酸塩沈殿防止を促進するためにポリマー濃度の最適化を行ってもよい。 他の開示された実施態様において、０．０５ｗｔ％〜３ｗｔ％などの様々なポリマー濃度の直鎖状ポリエチレンイミン（ＰＥＩ、２．５ｋＤａの遊離塩基又は相当する４ｋＤａのＨＣｌ塩）を含むＤＡＢ色素原溶液は、ＤＡＢ硫酸塩の析出に対処するために使用されうる。開示された本実施態様は、約４ｍＭまでのメタ重亜硫酸ナトリウムなど、典型的にはＤＡＢ組織染色に悪影響を与えないであろう抗酸化安定剤を含むＤＡＢ色素原溶液と共に使用されうる。ＤＥＡＥ−デキストラン及びアミノデキストランなどのアミンポリマーの他のクラスは、約１ｍＭまでのメタ重亜硫酸ナトリウムなどの抗酸化安定剤を添加した場合、ＤＡＢ組織染色に悪影響を与えることなく、ＤＡＢ硫酸塩の析出を有意に減少させることが見出された；しかしながら、典型的には、これら特定の開示された実施態様が提供する、約４ｍＭのメタ重亜硫酸ナトリウムでのＤＡＢ硫酸塩の析出に対する保護は最小である。アミンポリマーの他の開示された実施態様は、約１ｍＭ〜約４ｍＭの安定剤のレベルで析出を防止するために使用してもよい分岐状ＰＥＩ及びポリアリルアミンを含む。しかし、一実施態様において、これらのアミンポリマーは、所望の組織試料のＤＡＢ染色を生じない場合がある。 上記に基づき、本発明に適した特定の種類のポリマー材料の例示的なリストには、デキストラン硫酸、ポリスチレンスルホネート、ポリスチレンスルホネートマレイン酸コポリマー、直鎖状ポリエチレンイミン、ＤＥＡＥ−デキストラン、アミノデキストラン、ポリ（２−ビニル−１−メチルピリジニウムブロミド、ポリ（２−メチルアクリルオキシエチルトリメチルアンモニウムブロミド、又はポリ（アクリルアミド／２−メチルアクリルオキシエチルトリメチルアンモニウムブロミド及びそれらの組合せを含む。Ｃ． ＤＡＢ／ポリマー比、分子量、及び濃度 一実施態様では、低分子量ポリマーはＤＡＢ染色への影響が少ない傾向にある。対比染色（例えば、ヘマトキシリン対比染色）に影響を与える機能はまた、ポリマーｗｔ％及び分子量を操作することによってコントロールされうる。特定の開示された実施態様は、０．１ｍＭよりも大きく約１００ｍＭまで、より典型的には０．５ｍＭより大きく約１５ｍＭまで、更により典型的には約１ｍＭから約１１ｍＭまでの範囲の濃度において、ＤＡＢ色素原及び／又はその誘導体を含むＤＡＢ色素原溶液を含んだ組成物に関するものであり、実施例は、約５ｍＭから約１１ｍＭまでのＤＡＢ及び／又はその誘導体を典型的に含んでいる。また、組成物が開示された実施態様は、ポリマーの分子量が１ｋＤａより大きく約５００ｋＤａまでの、より典型的には約１ｋＤａから約２５０ｋＤａまでの、更により典型的には約１ｋＤａから約１００ｋＤａまでの範囲を有することを特徴とする、開示されたポリマー又は均等物の１つ以上を含む。ポリマーは、ポリマー濃度が０．０１重量％より大きく約１０重量％までの範囲であり、より典型的には、約０．１重量％〜約７重量％である。 ポリマーがデキストラン硫酸ポリマーである開示された実施態様において、約２重量％から約５重量％のポリマー濃度において、ポリマーの分子量は、典型的には約５ｋＤａから約３０ｋＤａの範囲である。さらに典型的には、約２重量％〜約５重量％のポリマー濃度において、デキストラン硫酸ポリマーは約６．５ｋＤａ〜約２０ｋＤａの範囲の分子量を有する。ポリマーがポリスチレンスルホネートポリマーである場合、典型的な実施態様は、約２重量％から約５重量％のポリマー濃度において、約１ｋＤａ〜約４０ｋＤａの範囲の分子量を有するであろう。さらに典型的には、ポリスチレンスルホネートポリマーは、約２重量％から約５重量％のポリマー濃度において、約１ｋＤａ〜約３５ｋＤａの範囲の分子量を有する。例示的な実施例は、約１．５ｋＤａの分子量及び２重量％のポリマー濃度を有するポリスチレンスルホネートポリマーを使用した。組成物は、ポリスチレンスルホネートマレイン酸コポリマーを含む場合、ポリマーは典型的には、０ｋＤａより大きく約２０ｋＤａまでの分子量、及び２重量％より大きく約５重量％までのポリマー濃度を有するであろう。組成物は、ポリビニルスルホネートポリマーを含む場合、ポリマーは、典型的には、約４ｋＤａから約６ｋＤａまでの分子量、及び約２重量％より大きく約５重量％までのポリマー濃度を有するであろう。 組成物がアミノデキストランポリマーを含む場合、０．１重量％より大きく約１０重量％まで、より典型的には約０．２５重量％から約５重量％までのポリマー濃度において、ポリマーは約１０ｋＤａ〜約７０ｋＤａの範囲の分子量を典型的に有するであろう。組成物はＤＥＡＥ−デキストランポリマーを含む場合、ポリマーは、１ｋＤａより大きく約５００ｋＤａまでの範囲の分子量、及び０．１重量％より大きく、約７重量％までの範囲のポリマー濃度を典型的に有するであろう。他の開示された実施態様において、組成物は、１ｋＤａより大きく約１５ｋＤａまでの分子量、及び０．０１重量％より大きく約５重量％までの範囲のポリマー濃度を有するポリアリルアミンポリマーを含んでいてもよい。例示的な実施態様において、組成物は、約２．５ｋＤａの分子量及び約０．１５重量パーセントのポリマー濃度を有するポリエチレンイミンポリマーを含む。ポリエチレンイミンポリマーは、塩が典型的には、２．５ｋＤａのポリエチレンイミン遊離塩基ポリマーに相当する４ｋＤａのＨＣｌ塩である、遊離塩基ポリマー又は塩から選択されてもよい。Ｄ． ＤＡＢベース製剤 ＤＡＢベース液の一実施態様は、ＤＡＢ色素原、一つ以上のエンハンサー、及び安定剤を含有する。一実施態様において、ＤＡＢベース液は、０．１ｍＭより大きく約１５ｍＭまでの、より典型的には０．１ｍＭより大きく約１１ｍＭまでの範囲の濃度を有するＤＡＢ色素原及び／又はその誘導体、０．０１ｍＭより大きく約１５ｍＭまでの範囲の濃度を有するイミダゾールエンハンサー、０．０１ｍＭより大きく約１５ｍＭまでの範囲の濃度を有する２−ヒドロキシピリジンエンハンサー、及び０．０１ｍＭより大きく約２ｍＭまでの範囲の濃度を有するメタ重亜硫酸ナトリウム安定剤を含有する。例示的なベース液は、２．５±０．１のｐＨで、５．５ｍＭのＤＡＢ、１０ｍＭのイミダゾール、１０ｍＭの２−ヒドロキシピリジン、及び１ｍＭのメタ重亜硫酸ナトリウムを含有する。一実施態様において、これらの組成物は、０ｍＭから約１０ｍＭの範囲、より典型的には、０ｍＭ、１．３７ｍＭ、２．７５ｍＭ、及び８．０ｍＭの濃度のＫＨＳＯ４を用いて試験し、ＤＡＢ硫酸塩の析出が４℃一晩で誘導された。別の実施態様では、エンハンサーは、ＤＡＢのベース製剤には含めず、本明細書において開示したように、本明細書で指定されたものと同等の濃度で、酸化剤製剤中に含まれる。 特定のＤＡＢ色素原組成物は既知で市販されており、本出願で開示される実施態様において使用されているとおり、高分子安定剤を含んでいない。例えば、ベンタナ・メディカル・システムズ社は、２．３±０．１のｐＨで、５．５ｍＭのＤＡＢ・４ＨＣｌ、１０ｍＭのイミダゾール、１０ｍＭの２−ヒドロキシピリジン、１ｍＭのメタ重亜硫酸ナトリウム、５ｗｔ％のＰＥＧ８０００、０．０５％ｗ／ｖのブリジ３５、及び７５０μＭのスズ酸ナトリウム三水和物を含有するＤＡＢ色素原製剤を提供している。 当業者であれば、メタ重亜硫酸ナトリウムが、メタ重亜硫酸ナトリウム１モル当たり亜硫酸水素ナトリウム２モルを生じる不均化を水中で起こすことが理解されよう。亜硫酸水素ナトリウム１モルにつき、ＤＡＢと不溶性の塩複合体を形成しうる、１モルの硫酸水素ナトリウムを形成する可能性がある。一実施態様において、分析によりＤＡＢ硫酸はおそらくＤＡＢ一硫酸塩であると判断した。 ベンタナ・メディカル・システムズ社が開発した新しいＤＡＢ色素原組成物の特定の開示された実施態様は、５．５ｍＭのＤＡＢ・４ＨＣｌ、１０ｍＭのイミダゾール、１０ｍＭの２−ヒドロキシピリジン、１ｍＭのメタ重亜硫酸ナトリウム、０．１５ｗｔ％で２．５ｋＤａの直鎖状ＰＥＩ（遊離塩基又は４ｋＤａのＨＣｌ塩ポリマー）、及び０．０５ｗ／ｖ％のブリッジ３５を２．３±０．１のｐＨで含む。ＤＡＢ色素原組成物の他の実施態様は、０．１５ｗｔ％の２．５ｋＤａの直鎖状ＰＥＩ（遊離塩基又は４ｋＤａのＨＣｌ塩）、５ｗｔ％〜７ｗｔ％の５００ｋＤａのＤＥＡＥ−デキストラン、２ｗｔ％、６．５ｋＤａ〜１０ｋＤａのデキストラン硫酸及び２ｗｔ％で〜１．５ｋＤａのＰＳＳポリマーを含有する。ＩＶ． 組成物の使用方法 本開示はまた、本明細書に開示されたＤＡＢ色素原組成物を使用する方法の実施態様に関する。一実施態様において、この方法は、エピトープを含む組織試料を提供すること；標識された特異的結合部分及び標識酵素に組織試料を曝露すること；組織染色手順のために有効な量のＤＡＢ色素原又はその誘導体、有効量の安定剤、及びポリマーを含んでいない組成物と比較して、ＤＡＢの析出を減らすか実質的に防止するために有効な量のポリマーを含有する組成物に組織試料を曝露すること；酸化剤及び対比染色剤に組織試料を曝露すること；及びエピトープを検出することを含みうる。 一実施態様において、組織試料は、比色検出を用いて分析することができる任意の組織試料であってもよい。特定の開示された実施態様は、ホルマリン固定、パラフィン包埋組織試料を使用することに関する。標識された特異的結合部分は、ハプテン（例えばオキサゾール、ピラゾール、チアゾール、ジニトロフェニル以外のニトロアリール化合物、ベンゾフラザン、トリテルペン、尿素、チオ尿素、ロテノイド、クマリン、シクロリグナン、ヘテロビアリール、アゾアリール、又はベンゾジアゼピン）のような特異的結合対の第一のメンバーで標識されてもよい。一実施態様において、ハプテンは、ＨＱ、ＤＩＧ、ＤＮＰ、ＴＳ、ＮＰ、ＤＣＣ、及びビオチンから選択される。例示的なハプテン及びハプテンを含んでいるコンジュゲートは、米国特許第７６９５９２９号に開示されており、これを援用して本文の一部とする。特異的結合部分は、抗体又は核酸（例えばＤＮＡ又はＲＮＡ）から選択されてもよい。一実施態様において、標識酵素は、抗体又はアビジン（例えばストレプトアビジン）のような特異的結合対の第二のメンバーとコンジュゲートしている酵素である。酵素は、西洋ワサビペルオキシダーゼなどのペルオキシダーゼであってもよい。 組織試料は、異なる様々な技術を用いた開示された組成物に曝露されてもよい。一実施態様において、組織試料にＤＡＢ色素原及びポリマーの別々の溶液を同時に添加することによって、組織試料にＤＡＢ色素原及びポリマーの別々の溶液を順次添加することによって、又は組織試料にＤＡＢ色素原及びポリマーを含む溶液を添加することによって、組織試料は組成物に曝露される。組成物は、本明細書に記載の開示された構成要素のいずれかを含んでもよい。開示された組成物の添加後、過酸化水素などの酸化剤を組織試料に添加してもよい。また、ヘマトキシリンのような対比染色液を組織試料に添加してもよい。組織試料内のエピトープは、その後に比色検出を用いて検出してもよい。開示された方法は、手作業で行ってもよいし、部分的又は完全に自動化してもよい。Ｖ． キット 本開示はまた、開示された組成物を含むキットの実施態様も企図する。一実施態様において、開示されたキットは、ＤＡＢ色素原、又はその誘導体；イミダゾール、２−ヒドロキシピリジン、及びそれらの組合せから選択されたエンハンサー；メタ重亜硫酸ナトリウムなどの抗酸化安定剤；及び、ポリマーを含んでいない組成物と比較して、ＤＡＢ硫酸塩の析出を低減又は防止することが可能なポリマーを含んでよい。試薬は別々に包装されてもよいし、２種以上の試薬が同じ溶液中にあってもよい。ＶＩ． 試料及び標的 開示された組成物は、試料中の１つ以上の標的を検出するために使用されうる。試料は、生物学的成分を含み、一般に１以上の目的とする標的分子を含むと考えられる。標的分子は、細胞表面にあってよく、細胞は懸濁液又は組織切片の中にあってよい。標的分子は細胞内でもよく、細胞溶解又はプローブでの細胞貫通の際に検出されうる。当業者であれば、試料中の標的分子を検出する方法は、用いられる試料とプローブのタイプにより異なることを理解されよう。試料を収集し調製する方法は当分野で知られている。 本明細書に開示される方法の実施態様において、組成物と共に使用される組織又は他の生体試料などの試料は、当業者に知られる任意の方法で調製されうる。試料は、常套的なスクリーニングの被験者、又は遺伝的異常、感染又は腫瘍などの疾患を有すると疑われる被験者から得られうる。開示の方法の記載された実施態様はまた、遺伝的異常、疾患、障害などをもたない「正常な」試料と呼ばれる試料にも適用される。このような正常な試料は、他の試料との比較用コントロールとして、とりわけ有用である。試料は様々な目的のために解析されうる。例えば、試料は、科学的研究若しくは疾病が疑われる場合の診断、又は治療の成功、生存などの予後診断的インジケーターとして使用されうる。 試料は、プローブやリポーター分子によって特異的に結合されうる複数の標的を含みうる。標的は、核酸配列又はタンパク質でありうる。本開示を通じて、標的タンパク質を参照する場合、そのタンパク質関連の核酸配列も標的として使用され得ることが理解される。幾つかの例では、標的は、ウイルス、細菌又はウイルスのゲノムからの細胞内寄生体などの病原体のタンパク質又は核酸分子である。例えば、標的タンパク質は、疾患と関連のある（例えば相関のある、偶然示唆されるなど）標的核酸配列から産生されうる。 標的核酸配列の大きさは大きく変わりうる。限定するものではないが、核酸配列は、可変数の核酸残基を有しうる。例えば、標的核酸配列は、約１０の核酸残基、又は約２０、３０、５０、１００、１５０、５００、１０００の残基を有しうる。同様に、標的ポリペプチドの大きさは大きく変わりうる。限定するものではないが、標的ポリペプチドは、そのペプチド特異的抗体に結合するエピトープ又はその断片を含むであろう。いくつかの実施態様において、ポリペプチドは、２つのペプチド特異的抗体に結合するエピトープ、又はその断片を含みうる。 具体的な非限定的な例では、標的タンパク質は、腫瘍（例えば癌）関連の標的核酸配列（例えばゲノムの標的核酸配列）により産生される。多数の染色体異常（転座やその他の再配列、増幅又は欠失を含む）が新生物細胞、特に癌細胞（例えば、Ｂ細胞及びＴ細胞白血病、リンパ腫、乳癌、結腸癌、神経癌等）で同定されている。従って、幾つかの例では、標的分子の一部分が、試料の細胞サブセットで増幅又は欠失された核酸配列（例えばゲノムの標的核酸配列）により産生される。 癌遺伝子は、幾つかのヒト悪性腫瘍の原因であることが知られている。例えば、染色体１８ｑ１１．２のブレークポイント領域に位置するＳＹＴ遺伝子が関与する染色体再配列は、滑膜肉腫、軟部組織腫瘍に共通している。Ｔ（１８ｑ１１．２）転座は、例えば、異なる標識を持つプローブを使用して、同定しうる：第一のプローブは、ＳＹＴ遺伝子から遠位方向に伸びる標的核酸配列から生成される核酸分子を含み、第二のプローブは３’又はＳＹＴ遺伝子の近位に伸びる標的核酸配列から生成される核酸が含まれる。これらの標的核酸配列（例えば、ゲノムの標的核酸配列）が、インサイツハイブリダイゼーションの方法で使用される場合、ＳＹＴ遺伝子領域でｔ（１８ｑ１１．２）を欠く正常細胞は、ＳＹＴの２つのインタクトなコピーを反映する、２つの融合（近接する２つの標識により作成された）シグナルを示す。ｔ（１８ｑ１１．２）を持つ異常な細胞は単一の融合シグナルを示す。 他の例において、悪性腫瘍細胞で欠失した（失われた）腫瘍抑制遺伝子である核酸配列から産生された標的タンパク質（例えば、ゲノムの標的核酸配列）が選択される。例えば、染色体９ｐ２１に位置するｐ１６領域（Ｄ９Ｓ１７４９、Ｄ９Ｓ１７４７、ｐ１６（ＩＮＫ４Ａ）、ｐ１４（ＡＲＦ）、Ｄ９Ｓ１７４８、ｐ１５（ＩＮＫ４Ｂ）、及びＤ９Ｓ１７５２を含む）が、特定の膀胱癌で欠失いている。第１染色体短腕の遠位領域を含む染色体欠失（例えば、ＳＨＧＣ５７２４３、ＴＰ７３、ＥＧＦＬ３、ＡＢＬ２、ＡＮＧＰＴＬ１、及びＳＨＧＣ−１３２２を包含する）、及び１９番染色体の動原体周辺領域（例えば、１９ｐ１３−１９ｑ１３）（例えば、ＭＡＮ２Ｂ１、ＺＮＦ４４３、ＺＮＦ４４、ＣＲＸ、ＧＬＴＳＣＲ２、及びＧＬＴＳＣＲ１を包含する）は、中枢神経系の所定の型の固形腫瘍の特徴的な分子構造である。 前述の例は例示の目的のためにのみ提供されており、限定を意図するものではない。腫瘍性形質転換及び／又は増殖と相関する他の多くの細胞遺伝学的異常は、当業者に知られている。標的核酸配列（例えばゲノム標的核酸配列）は、腫瘍性変性と相関し、開示の方法において実用的であり、そのために開示されたプローブを調製することができ、またＥＧＦＲ遺伝子を含有し（７ｐ１２；例えば、ＧＥＮＢＡＮＫＴＭ受入番号＿ＮＣ＿０００００７，ヌクレオチド５５０５４２１９−５５２４２５２５）、Ｃ−ＭＹＣ遺伝子（８ｑ２４．２１；例えば、ＧＥＮＢＡＮＫＴＭ受入番号ＮＣ＿０００００８，ヌクレオチド１２８８１７４９８−１２８８２２８５６）、Ｄ５Ｓ２７１（５ｐ１５．２）、リポ蛋白リパーゼ（ＬＰＬ）遺伝子（８ｐ２２；例えば、ＧＥＮＢＡＮＫＴＭ受入番号ＮＣ＿０００００８，ヌクレオチド１９８４１０５８−１９８６９０４９）、ＲＢ１（１３ｑ１４；例えば、ＧＥＮＢＡＮＫＴＭ受入番号ＮＣ＿００００１３，ヌクレオチド４７７７５９１２−４７９５４０２３）、ｐ５３（１７ｐ１３．１；例えば、ＧＥＮＢＡＮＫＴＭ受入番号ＮＣ＿００００１７，相補体，ヌクレオチド７５１２４６４−７５３１６４２））、Ｎ−ＭＹＣ（２ｐ２４；例えば、ＧＥＮＢＡＮＫＴＭ受入番号ＮＣ＿０００００２，相補体，ヌクレオチド１５１８３５２３１−１５１８５４６２０）、ＣＨＯＰ（１２ｑ１３；例えば、ＧＥＮＢＡＮＫＴＭ受入番号ＮＣ＿００００１２，相補体，ヌクレオチド５６１９６６３８−５６２００５６７）、ＦＵＳ（１６ｐ１１．２；例えば、ＧＥＮＢＡＮＫＴＭ受入番号ＮＣ＿００００１６，ヌクレオチド３１０９８９５４−３１１１０６０１）、ＦＫＨＲ（１３ｐ１４；例えば、ＧＥＮＢＡＮＫＴＭ受入番号ＮＣ＿００００１３，相補体，ヌクレオチド４００２７８１７−４０１３８７３４）ならびに例えば：ＡＬＫ（２ｐ２３；例えば、ＧＥＮＢＡＮＫＴＭ受入番号ＮＣ＿０００００２，相補体，ヌクレオチド２９２６９１４４−２９９９７９３６）、Ｉｇ重鎖、ＣＣＮＤ１（１１ｑ１３；例えば、ＧＥＮＢＡＮＫＴＭ受入番号ＮＣ＿００００１１，ヌクレオチド６９１６５０５４．．６９１７８４２３）、ＢＣＬ２（１８ｑ２１．３；例えば、ＧＥＮＢＡＮＫＴＭ受入番号ＮＣ＿００００１８，相補体，ヌクレオチド５８９４１５５９−５９１３７５９３）、ＢＣＬ６（３ｑ２７；例えば、ＧＥＮＢＡＮＫＴＭ受入番号ＮＣ＿０００００３，相補体，ヌクレオチド１８８９２１８５９−１８８９４６１６９）、ＭＡＬＦ１、ＡＰ１（１ｐ３２−ｐ３１；例えば、ＧＥＮＢＡＮＫＴＭ受入番号ＮＣ＿０００００１，相補体，ヌクレオチド５９０１９０５１−５９０２２３７３）、ＴＯＰ２Ａ（１７ｑ２１−ｑ２２；例えば、ＧＥＮＢＡＮＫＴＭ受入番号ＮＣ＿００００１７，相補体，ヌクレオチド３５７９８３２１−３５８２７６９５）、ＴＭＰＲＳＳ（２１ｑ２２．３；例えば、ＧＥＮＢＡＮＫＴＭ受入番号ＮＣ＿００００２１，相補体，ヌクレオチド４１７５８３５１−４１８０１９４８）、ＥＲＧ（２１ｑ２２．３；例えば、ＧＥＮＢＡＮＫＴＭ受入番号ＮＣ＿００００２１，相補体，ヌクレオチド３８６７５６７１−３８９５５４８８）；ＥＴＶ１（７ｐ２１．３；例えば、ＧＥＮＢＡＮＫＴＭ受入番号ＮＣ＿０００００７，相補体，ヌクレオチド１３８９７３７９−１３９９５２８９）、ＥＷＳ（２２ｑ１２．２；例えば、ＧＥＮＢＡＮＫＴＭ受入番号ＮＣ＿００００２２，ヌクレオチド２７９９４２７１−２８０２６５０５）；ＦＬＩ１（１１ｑ２４．１−ｑ２４．３；例えば、ＧＥＮＢＡＮＫＴＭ受入番号ＮＣ＿００００１１，ヌクレオチド１２８０６９１９９−１２８１８７５２１）、ＰＡＸ３（２ｑ３５−ｑ３７；例えば、ＧＥＮＢＡＮＫＴＭ受入番号ＮＣ＿０００００２，相補体，ヌクレオチド２２２７７２８５１−２２２８７１９４４）、ＰＡＸ７（１ｐ３６．２−ｐ３６．１２；例えば、ＧＥＮＢＡＮＫＴＭ受入番号ＮＣ＿０００００１，ヌクレオチド１８８３００８７−１８９３５２１９）、ＰＴＥＮ（１０ｑ２３．３；例えば、ＧＥＮＢＡＮＫＴＭ受入番号ＮＣ＿００００１０，ヌクレオチド８９６１３１７５−８９７１６３８２）、ＡＫＴ２（１９ｑ１３．１−ｑ１３．２；例えば、ＧＥＮＢＡＮＫＴＭ受入番号ＮＣ＿００００１９，相補体，ヌクレオチド４５４３１５５６−４５４８３０３６）、ＭＹＣＬ１（１ｐ３４．２；例えば、ＧＥＮＢＡＮＫＴＭ受入番号ＮＣ＿０００００１，相補体，ヌクレオチド４０１３３６８５−４０１４０２７４）、ＲＥＬ（２ｐ１３−ｐ１２；例えば、ＧＥＮＢＡＮＫＴＭ受入番号ＮＣ＿０００００２，ヌクレオチド６０９６２２５６−６１００３６８２）およびＣＳＦ１Ｒ（５ｑ３３−ｑ３５；例えば、ＧＥＮＢＡＮＫＴＭ受入番号ＮＣ＿０００００５，相補体，ヌクレオチド１４９４１３０５１−１４９４７３１２８）を含有する。 他の実施例において、標的タンパク質は、疾患又は病気に関連付けられているウイルス又は他の微生物から選択される。細胞又は組織試料中のウイルス又は微生物由来の標的核酸配列（例えば、ゲノム標的核酸配列）の検出は、生物の存在を示す。例えば、標的ペプチド、ポリペプチド又はタンパク質は、発癌性又は病原性ウイルス、バクテリア又は細胞内寄生虫（例えば、熱帯熱マラリア原虫及び他のマラリア原虫種、リーシュマニア（ｓｐ．）、クリプトスポリジウム、赤痢アメーバ及びランブル鞭毛虫、並びに、トキソプラズマ属、アイメリア属、タイレリア属及びバベシア属の種）から選択されうる。 幾つかの実施例において、標的タンパク質は、ウイルスゲノムの核酸配列（例えば、ゲノム標的核酸配列）から産生される。例示的なウイルス及び相当するゲノム配列（ＧＥＮＢＡＮＫＴＭ括弧内に参照配列受入番号記載）は、ヒトアデノウイルスＡ（ＮＣ＿００１４６０）、ヒトアデノウイルスＢ（ＮＣ＿００４００１）、ヒトアデノウイルスＣ（ＮＣ＿００１４０５）、ヒトアデノウイルスＤ（ＮＣ＿００２０６７），ヒトアデノウイルスＥ（ＮＣ＿００３２６６）、ヒトアデノウイルスＦ（ＮＣ＿００１４５４）、ヒトアストロウイルス（ＮＣ＿００１９４３）、ヒトＢＫポリオーマウイルス（Ｖ０１１０９；ＧＩ：６０８５１）ヒトボカウイルス（ＮＣ＿００７４５５）、ヒトコロナウイルス２２９Ｅ（ＮＣ＿００２６４５）、ヒトコロナウイルスＨＫＵ１（ＮＣ＿００６５７７）、ヒトコロナウイルスＮＬ６３（ＮＣ＿００５８３１）、ヒトコロナウイルスＯＣ４３（ＮＣ＿００５１４７）、ヒトエンテロウイルスＡ（ＮＣ＿００１６１２）、ヒトエンテロウイルスＢ（ＮＣ＿００１４７２）、ヒトエンテロウイルスＣ（ＮＣ＿００１４２８）、ヒトエンテロウイルスＤ（ＮＣ＿００１４３０）、ヒトエリスロウイルスＶ９（ＮＣ＿００４２９５）、ヒト泡沫状ウイルス（ＮＣ＿００１７３６）、ヒトヘルペスウイルス１（単純ヘルペスウイルス１型）（ＮＣ＿００１８０６）、ヒトヘルペスウイルス２（単純ヘルペスウイルス２型）（ＮＣ＿００１７９８）、ヒトヘルペスウイルス３（水痘帯状疱疹ウイルス）（ＮＣ＿００１３４８）、ヒトヘルペスウイルス４の１型（エプスタインバーウイルス１型）（ＮＣ＿００７６０５），ヒトヘルペスウイルス４の２型（エプスタインバーウイルス２型）（ＮＣ＿００９３３４）、ヒトヘルペスウイルス５病原菌ＡＤ１６９（ＮＣ＿００１３４７）、ヒトヘルペスウイルス５病原菌Ｍｅｒｌｉｎ Ｓｔｒａｉｎ（ＮＣ＿００６２７３）、ヒトヘルペスウイルス６Ａ（ＮＣ＿００１６６４）、ヒトヘルペスウイルス６Ｂ（ＮＣ＿０００８９８）、ヒトヘルペスウイルス７（ＮＣ＿００１７１６）、ヒトヘルペスウイルス８のＭ型（ＮＣ＿００３４０９）、ヒトヘルペスウイルス８のＰ型（ＮＣ＿００９３３３）、ヒト免疫不全ウイルス１（ＮＣ＿００１８０２）、ヒト免疫不全ウイルス１（ＮＣ＿００１７２２）、ヒトメタ肺炎ウイルス（ＮＣ＿００４１４８）、ヒトパピロマウイルス−１（ＮＣ＿００１３５６）、ヒトパピロマウイルス−１８（ＮＣ＿００１３５７）、ヒトパピロマウイルス−２（ＮＣ＿００１３５２）、ヒトパピロマウイルス５４（ＮＣ＿００１６７６）、ヒトパピロマウイルス６１（ＮＣ＿００１６９４）、ヒトパピロマウイルス−ｃａｎｄ９０（ＮＣ＿００４１０４）、ヒトパピロマウイルスＲＴＲＸ７（ＮＣ＿００４７６１）、ヒトパピロマウイルス１０型（ＮＣ＿００１５７６）、ヒトパピロマウイルス１０１型（ＮＣ＿００８１８９）、ヒトパピロマウイルス１０３型（ＮＣ＿００８１８８）、ヒトパピロマウイルス１０７型（ＮＣ＿００９２３９）、ヒトパピロマウイルス１６型（ＮＣ＿００１５２６）、ヒトパピロマウイルス２４型（ＮＣ＿００１６８３）、ヒトパピロマウイルス２６型（ＮＣ＿００１５８３）、ヒトパピロマウイルス３２型（ＮＣ＿００１５８６）、ヒトパピロマウイルス３４型（ＮＣ＿００１５８７）、ヒトパピロマウイルス４型（ＮＣ＿００１４５７）、ヒトパピロマウイルス４１型（ＮＣ＿００１３５４）、ヒトパピロマウイルス４８型（ＮＣ＿００１６９０）、ヒトパピロマウイルス４９型（ＮＣ＿００１５９１），ヒトパピロマウイルス５型（ＮＣ＿００１５３１）、ヒトパピロマウイルス５０型（ＮＣ＿００１６９１）、ヒトパピロマウイルス５３型（ＮＣ＿００１５９３），ヒトパピロマウイルス６０型（ＮＣ＿００１６９３）、ヒトパピロマウイルス６３型（ＮＣ＿００１４５８）、ヒトパピロマウイルス６ｂ型（ＮＣ＿００１３５５）、ヒトパピロマウイルス７型（ＮＣ＿００１５９５）、ヒトパピロマウイルス７１型（ＮＣ＿００２６４４）、ヒトパピロマウイルス９型（ＮＣ＿００１５９６）、ヒトパピロマウイルス９２型（ＮＣ＿００４５００）、ヒトパピロマウイルス９６型（ＮＣ＿００５１３４）、ヒトパラインフルエンザウイルス１（ＮＣ＿００３４６１）、ヒトパラインフルエンザウイルス２（ＮＣ＿００３４４３）、ヒトパラインフルエンザウイルス３（ＮＣ＿００１７９６）、ヒトパレコウイルス（ＮＣ＿００１８９７）、ヒトパレコウイルス４（ＮＣ＿００７０１８）、ヒトパレコウイルスＢ１９（ＮＣ＿０００８８３），呼吸系発疹ウイルス（ＮＣ＿００１７８１）、ヒトライノウイルスＡ（ＮＣ＿００１６１７）、ヒトライノウイルスＢ（ＮＣ＿００１４９０）、ヒトスプマウイルス（ＮＣ＿００１７９５），ヒトＴ−リンパ向性ウイルス１（ＮＣ＿００１４３６）、ヒトＴ−リンパ向性ウイルス２（ＮＣ＿００１４８８）を含有する。 特定の例において、標的タンパク質（例えば、ゲノム標的核酸配列）は、エプスタイン−バーウイルス（ＥＢＶ）又はヒトパピロマウイルス（ＨＰＶ、例えばＨＰＶ１６、ＨＰＶ１８）のような腫瘍ウイルス由来の核酸配列から産生される。他の実施例において、核酸配列から産生された標的タンパク質（例えば、ゲノム標的核酸配列）は、病原性ウイルス、例えば呼吸器合胞体ウイルス、肝炎ウイルス（例えば、Ｃ型肝炎ウイルス）、コロナウイルス（例えば、ＳＡＲＳウイルス）、アデノウイルス、ポリオーマウイルス、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、又は単純疱疹ウイルス（ＨＳＶ）に由来する。ＶＩＩ． 実験例 以下の実施例は、実験例の特定の詳細を例示するために提供される。当業者であれば、本発明がこれらの実施例で例示される特定の特徴に限定されないことを理解されよう。一般的な手順１．ポリマースクリーニング ポリマーは、選択されたモル比で硫酸水素カリウム（ＫＨＳＯ４）を有する一定量のポリマーを含む増強ＤＡＢベース液と組み合わせることによって、ＤＡＢ硫酸塩の析出の形成への影響をスクリーニングした。使用された増強ＤＡＢベース液は、５．５ｍＭのＤＡＢ・４ＨＣｌ、１０ｍＭのイミダゾール、１０ｍＭの２−ヒドロキシピリジン、１ｍＭのメタ重亜硫酸ナトリウム及び０．０５％ｗ／ｖのＰＨ＝２．３±０．１でのブリッジ３５を含んでいた。スクリーニングを行なった硫酸水素カリウムの濃度は、２．７５ｍＭ及び８．０ｍＭであった。溶液は、室温で１５秒間激しく混合させた後、ＤＡＢ硫酸塩の析出を誘導するために２℃〜８℃で保管した。溶液は、物理的変化（例えば、色又は析出）をモニターした。内部標準として、２−ヒドロキシピリジンと比較したＤＡＢ濃度の変化を確認するため、候補溶液をスルホネートの添加前後に、ＨＰＬＣにより分析した。２．免疫組織化学染色の手順 すべての免疫組織化学染色は、提案された製品添付のプロトコルに従ってＶＥＮＴＡＮＡ ＯＰＴＩＶＩＥＷ（登録商標）ＤＡＢ（ベンタナ・メディカル・システムズ社のカタログ番号７６０から７００）、又はｉＶｉｅｗのＤＡＢ検出キット（ベンタナ・メディカル・システムズ社のカタログ番号７６０から０９１）のいずれかのコンポーネントを使用してベンタナベンチマークＸＴ自動染色プラットフォーム上で実施した。ＣＯＮＦＩＲＭ（登録商標）抗Ｋｉ６７の（３０−９）抗体（ベンタナカタログ番号７９０から４２８６）又は抗ＣＤ１０（ＳＰ６７）抗体（ベンタナ番号カタログ７９０から４０５６）のいずれかを使用して、抗体のいずれかの一滴を添加し、１６分間３７℃でインキュベートすることによって抗原検出を行った。候補ＤＡＢ色素原溶液を一滴を添加し、その後、適切な過酸化水素水溶液の一滴添加、及び８分間のコインキュベーションをすることにより、ＤＡＢ ＩＨＣ検出は達成された。スライドをヘマトキシリンＩＩ（ベンタナカタログ番号７６０〜２０３７）で４分間対比染色し、続いて、Ｂｌｕｉｎｇ（ベンタナカタログ番号７６０〜２０３７）で４分間対比染色した。スライドを洗剤と水の混合物で洗浄し、勾配アルコール及びキシレン浴を通して脱水し、カバースリップで覆った。３．ＨＰＬＣ分析法 ＨＰＬＣ分析は、以下の方法を用いて行った。そして、図１３は、この例示的な方法を用いて得られた代表的なＨＰＬＣスペクトルを示している。カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ ＲＰ−Ｃ１８ Ｃｏｌｕｍｎ ４．６ｘ１５０ｍｍ（５μ）［Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｃ１８ Ｓｅｃｕｒｉｔｙ ｇｕａｒｄ ｃｏｌｕｍｎ］溶離液：Ａ：脱イオン水、Ｃ：アセトニトリル、Ｄ：１００ｍＭの酢酸アンモニウム水溶液（ｐＨ＝５．０）流量：１ｍＬ／分グラジエントプロファイル：注入量：希釈していないＤＡＢ色素原溶液を３μＬ検出波長：２６０ｎｍ保持時間：ＤＡＢ（４．９４分）、２−ヒドロキシピリジン（３．６５分）実施例１ 候補ポリマーは、選択されたモル比で硫酸水素カリウム（ＫＨＳＯ４）を有する一定量のポリマーを含む増強ＤＡＢベース液と組み合わせることによって、ＤＡＢ硫酸塩の析出の形成への影響をスクリーニングした。使用された増強ＤＡＢベース液は、５．５ｍＭのＤＡＢ・４ＨＣｌ、１０ｍＭのイミダゾール、１０ｍＭの２−ヒドロキシピリジン、１ｍＭのメタ重亜硫酸ナトリウム及び０．０５％ｗ／ｖのＰＨ＝２．３±０．１でのブリッジ３５を含んでいた。想定した硫酸水素カリウムのスクリーニング濃度は０ｍＭ、１．３７ｍＭ、２．７５ｍＭ、及び８．０ｍＭであった。溶液は、室温で１５秒間激しく混合させた後、ＤＡＢ硫酸塩の析出を誘導するために２℃〜８℃で保管した。溶液は、物理的変化（例えば、色又は析出）をモニターした。内部標準として、２−ヒドロキシピリジンと比較したＤＡＢ濃度の変化を確認するため、候補溶液を硫酸塩の添加前後に、ＨＰＬＣにより分析した。結果の要約を以下の表２に示す。 例示的なポリマー（デキストラン硫酸及びポリスチレンスルホネート）は、実質的にＤＡＢの沈殿を阻害し、他の例示的なポリマー（ＤＥＡＥ−デキストラン及び１０ｋＤａのデキストラン）も大幅にＤＡＢの析出を減少させた。例えば、図１４〜図１６は、ポリマーが使用されていないことを特徴とする試料と比較して、典型的なスルホネート及びサルフェートポリマーを用いて得られた結果を総括的に示したものである（図１４）。図１５は、ＤＡＢ溶液及び４ｗｔ％のポリスチレンスルホネート（１．５ｋＤａ）を含む、開示された組成物を用いて染色した組織切片の画像であり、図１６は、ＤＡＢ溶液及び４ｗｔ％のデキストラン硫酸（６．５ｋＤａ〜１０ｋＤａ）を含む、開示された組成物を用いて染色した組織切片の画像である。図１７及び図１８の画像は、コントロール（図１７）及び５ｗｔ％、１５ｋＤａのポリアリルアミン（図１８）を用いて得られた結果を示している。開示された組成物の例示的な実施態様の更なるＨＰＬＣの結果は、表２に要約する。 ＨＰＬＣ分析は、２．７５ｍＭのＫＨＳＯ４を添加した後、ＰＥＧ８０００ありのＤＡＢ溶液、及びＰＥＧ８０００なしのＤＡＢ溶液の両方で、溶液から同様の量のＤＡＢを失ったことを示した。ポリオール及びアルコールは、ＤＡＢ硫酸塩の析出を減少させることが報告されている。例えば、１，２−プロパンジオールのような非揮発性アルコール添加物は、ＤＡＢ硫酸塩の析出を阻害することができなかった。デキストランポリマーは減少したが、ＤＡＢ硫酸塩の析出を完全には阻害しなかった。ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリアクリルアミド（ＰＡＡ）、ポリビニルピロリジノン（ＰＶＰ）、ポリ（プロピレングリコール）（ＰＰＧ）のような他のポリマー種を試験し、ＤＡＢ硫酸塩の析出の阻害に失敗した。実施例２ この特定の実施例は、開示された組成物中のアミンポリマーの使用に関する。アミンポリマーは、ＤＡＢ硫酸塩の析出物の形成に対して広い範囲の影響を及ぼしていた。アミンポリマーは、サルフェートの対アニオンと塩を形成し、ＤＡＢ硫酸塩の形成頻度を低減させ及び／又はＤＡＢ硫酸塩の粒子の大きさを減少させるのに役立つと考えられる。２．７５ｍＭ又は８．０ｍＭのいずれかのＫＨＳＯ４を添加した際、ＤＡＢ硫酸塩の析出は、直鎖状ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）、分岐状ＰＥＩ又はポリアリルアミン（ＰＡＡ）ポリマーを含むＤＡＢ色素原溶液では認められなかった。このプロセスにおける直鎖状ＰＥＩポリマーの濃度（ｗｔ％）の影響を分析した。２．５ｋＤａの直鎖状ＰＥＩを４ｋＤａのＨＣｌ塩として使用し、色素原溶液中では０．１ｗｔ％から５．０ｗｔ％までとした（表３を参照のこと）。直鎖状ＰＥＩは、２．７５ｍＭのＫＨＳＯ４における全てのポリマー濃度範囲にわたり、ＤＡＢ硫酸塩の析出を阻害した。０．１ｗｔ％のＰＥＩで８．０ｍＭのＫＨＳＯ４を用いたときのみ、ＤＡＢ硫酸塩の析出が認められた。大きさが０．８ｋＤａから２５ｋＤａの直鎖状及び分岐状ＰＥＩポリマーを分析した。ポリマーの分子量は、ＤＡＢ硫酸塩の析出を阻害する上で、ポリマーの効果を変化させなかった。 アミノデキストラン、ＤＥＡＥ−デキストラン及び第四級アミンポリマーは、ＤＡＢ硫酸塩の析出を減らすのに役立ったが、完全には阻害しなかった。アミンポリマーの濃度（ｗｔ％）は、これらのポリマーに重要であった。より高い濃度のＤＥＡＥ−デキストランは、ＤＡＢ硫酸塩の析出の量をコントロールするために必要であった（表４参照）。製剤条件下でのＤＥＡＥ−デキストランの水溶解度の限界のため、７ｗｔ％を越えるポリマー濃度に対しての検査はできなかった。 ＤＡＢ ＩＨＣ染色に対するポリマー濃度の影響は、ｉＶｉｅｗ検出法（扁桃組織、Ｋｉ６７）を用いて検討した。２．５ｋＤａの直鎖状ＰＥＩを４ｋＤａのＨＣｌ塩として使用し、ＤＡＢ色素原溶液中では、０．１ｗｔ％から５．０ｗｔ％までとした。代表的な画像は２０倍で示されている（図１９〜図２２参照）。より粘性の高いＤＡＢ色素原溶液は、ＤＡＢ ＩＨＣの染色強度及び組織の適応範囲を減少させた。より高い粘度の色素原溶液はプレートベースアッセイにおける酵素反応速度を低下させることが良く知られている。ＤＡＢ ＩＨＣ及びヘマトキシリン染色の両方の染色強度及び適応範囲に大きく影響を与えたベンタナ反応バッファー（即ち、１５ｋＤａのポリアリルアミン）中では、中性ｐＨにおいて、アミンポリマーの溶解性が問題となりうる。 ＤＡＢ ＩＨＣ染色に対するアミノデキストランポリマー分子量の影響について、ｉＶｉｅｗ検出法（扁桃組織、Ｋｉ６７）を用いて検討した。アミノデキストランポリマー安定化ＤＡＢ色素原溶液は、４ｗｔ％の分子量が異なるポリマーを使用して調製した。代表的な画像は、１０倍で示されている（図９〜図１２参照）。ＤＡＢ ＩＨＣ染色強度は、ポリマー分子量の増加によって大きな影響は受けなかった。アミノデキストランポリマーは水溶性であり、４ｗｔ％で溶液粘度に影響を及ぼさなかった。 アミンポリマー安定化ＤＡＢ色素原溶液は、ＤＡＢ ＩＨＣ組織染色に影響を与えることなく使用しうる。ＤＡＢ硫酸塩の析出を阻害し、組織染色への有害な影響を減少させるために溶液粘度をコントロールすることに役立つように、ポリマーの濃度（ｗｔ％）はコントロールされうる。このクラスの例示的な実施態様は、２．５ｋＤａの直鎖状ＰＥＩ（２．５ｋＤａの遊離塩基又は４ｋＤａのＨＣｌ塩）と、より少ない程度で５００ｋＤａのＤＥＡＥ−デキストランを含む。代表的な画像は、図２３〜図２５に示されている。これらの図は、全くポリマーを含まない（図２３）；７ｗｔ％で５００ｋＤａのＤＥＡＥ−デキストランを含む（図２４）；及び２ｗｔ％で２．５ｋＤａの直鎖状ＰＥＩを含む（図２５）、安定化されたＤＡＢ色素原溶液で染色した組織切片の結果を示す。ＤＥＡＥ−デキストランは、ヘマトキシリン染色強度に軽微な影響を与える可能性があるが、デキストラン硫酸で認められるよりもはるかにわずかなものである。 ポリマー安定化ＤＡＢ（ＯＰＴＩＶＩＥＷ（登録商標）ＤＡＢ溶液）色素原溶液を、Ｋｉ６７及びＣＤ１０抗原マーカー用の扁桃組織上に染色した。２つの異なる組織ブロックについて、それぞれの抗原マーカーを検査した。５つの連続切片試料をそれぞれの条件で染色した。各試料は、ＤＡＢ ＩＨＣ染色強度、ＩＨＣでのバックグラウンド、及びヘマトキシリン対比染色の質について、適切な病理学者が評価した。各試料は、ポリマーを含まない市販のＤＡＢ試薬（ＯＰＴＩＶＩＥＷ（登録商標）ＤＡＢ溶液）と比較した。ＩＨＣ染色の結果のまとめは、表５で見ることができる。ＩＨＣでのバックグラウンドについては、色素原試料の間で差は認められなかった。ヘマトキシリン対比染色で、色素原試料の間で微妙な差が認められたが、対比色相及び染色強度は許容範囲内であると判断した。２．５ｋＤａの直鎖状ポリエチレンイミン遊離塩基と対応する４ｋＤａの直鎖状ＰＥＩ・ＨＣｌ塩は、Ｋｉ６７の試料セットを除く全ての試料について、市販の色素原試薬に比べ、同等又はそれ以上に染色した。４ｋＤａの直鎖状ＰＥＩ・ＨＣｌ塩は、ＣＤ１０に対して、２．５ｋＤａの直鎖状ＰＥＩ遊離塩基よりわずかによく染色した。 新たなポリマーの存在下での色素原の安定性を検討するため、アミンポリマー安定化ＤＡＢ色素原溶液に、４５℃の熱ストレスを与えた。４ｋＤａの直鎖状ＰＥＩ・ＨＣｌ塩ポリマー（２．５ｋＤａの遊離塩基当量）で安定化されたＤＡＢ色素原溶液は、検査したこれらのポリマーについて、色素原の安定性（表６及び表７参照）が最も大きいことが実証された。≦１ｗｔ％の４ｋＤａの直鎖状ＰＥＩ・ＨＣｌ塩ポリマーを添加したＤＡＢ色素原溶液は、基礎色素原溶液よりも高い安定性を示した。２．５ｋＤａの直鎖状ＰＥＩ遊離塩基ポリマーを添加したＤＡＢ色素原溶液は、ベース色素原溶液と同様の安定性を示した。分枝状ＰＥＩ、ＤＥＡＥ−デキストラン、及び４℃のアミンポリマーは、ＤＡＢ色素原の安定性の低下に伴い、副生成物を形成した。これらの副生成物について、単離、又は構造解析による確認は行なっていない。 ＤＡＢ硫酸塩の析出は、２．７５ｍＭ又は８．０ｍＭのいずれかのＫＨＳＯ４を添加した際、直鎖状ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）、分枝状ＰＥＩ又はポリアリルアミン（ＰＡＡ）ポリマーを含むＤＡＢ色素原溶液で認められなかった。分岐状ＰＥＩポリマーは、ＨＰＬＣ分析で認められた副生成物を形成するＤＡＢと反応するように見える。アミノデキストラン、ＤＥＡＥ−デキストラン及び第四級アミンポリマーは減少したが、ＤＡＢ硫酸塩の析出を完全には阻害しなかった。ＨＰＬＣ分析の間に、アミノデキストラン及び４°のアミンポリマーで新たなＤＡＢポリマー副生成物が認められた。提示されたＤＡＢ−ポリマー副生成物について、単離又は構造解析による確認は行なわれていない。小さな単量体のようなアミン物質、即ちアミノ酸類又はエタノールアミン類（モノ−、ジ−及びトリ）は、ＤＡＢ硫酸塩の析出を阻害しなかった。 実施例３ 本実施例は、開示された組成物及びサルフェート及び／又はスルホネートポリマーの特定の実施態様に関する。サルフェート及びスルホネートポリマーは、親水性のポリマー骨格が水溶性を維持するのに役立つＤＡＢ−ポリマー塩複合体を形成すると考えられている。ＯｐｔｉＶｉｅｗ ＤＡＢ色素原溶液は、デキストラン硫酸（９ｋＤａ〜２９ｋＤａ）ポリマーの可変濃度（０．２５ｗｔ％〜５ｗｔ％）で調製した。１ｗｔ％未満のデキストラン硫酸ポリマー（９ｋＤａ〜２９ｋＤａ）を添加したＯｐｔｉＶｉｅｗ ＤＡＢ色素原溶液で、析出物が認められた。より高いＤＡＢのポリマーに対する比率は、デキストラン硫酸ポリマー溶液の濃度（ｗｔ％）の低下を起こしたが、このことは、ＤＡＢ−ポリマー複合体の疎水性を増加し、ＤＡＢ−ポリマー複合体が水溶性を失う原因となった。２ｗｔ％を超えるデキストラン硫酸（９ｋＤａ〜２９ｋＤａ）を用いたＯｐｔｉＶｉｅｗ ＤＡＢ色素原溶液では、２．７５ｍＭ又は８．０ｍＭのいずれかのＫＨＳＯ４を添加した際に、ＤＡＢ硫酸塩の析出は認められなかった。同様の効果は、分子量の大きさが異なるポリスチレンスルホネート（ＰＳＳ）ポリマーで認められた。１．５ｋＤａ又は３．１ｋＤａのＰＳＳのような比較的小さなＰＳＳポリマーは、それらより大きな分子量のＰＳＳポリマーよりも、より低いポリマー濃度（ｗｔ％）において、ＤＡＢ−ポリマー複合体の溶解性が低下する傾向があった。６ｋＤａの分子量下での硫酸デキストランポリマーはまた、ＤＡＢ−ポリマー複合体の溶解性を低下させる傾向があった。 ＤＡＢ ＩＨＣ染色におけるＰＳＳポリマー分子量の影響について、ｉＶｉｅｗ検出法（扁桃組織、Ｋｉ６７）を用いて検討した。ＰＳＳポリマー安定化ＤＡＢ色素原溶液は、２ｗｔ％で異なる分子量のＰＳＳを用いて調製した。代表的な画像は、図３〜図８において１０倍で示されている。図３は、ＯｐｔｉＶｉｅｗ ＤＡＢ色素原溶液で染色した組織切片からの結果を示している。図４〜図８は、４ｗｔ％の安定化ポリスチレンスルホネートＤＡＢ色素原溶液（それぞれ１．５ｋＤａ、５．１ｋＤａ、７．５ｋＤａ、１６ｋＤａ、３５ｋＤａ）で染色した組織切片からの結果を示している。ＤＡＢのＩＨＣの染色強度及び適応範囲は、ＰＳＳの分子量の増加に伴って減少した。正味の見かけのＤＡＢ−ＰＳＳポリマー複合体のモル濃度は、ポリマーの分子量の増加に伴って減少する。低いＤＡＢ濃度が、認められた影響を引き起こすことが示されている。ポリマーの分子量の増加に伴い、ヘマトキシリン対比染色強度及びバックグラウンドが増大した。ヘマトキシリン対比染色の染色強度とバックグラウンドは、対比染色の適用中に組織ｐＨによってコントロールされる。組織に沈着したＤＡＢ−ＰＳＳポリマー複合体は、ベンタナ反応緩衝液中で脱プロトン化され、対比染色の間に、更なるｐＨ調整が必要になるであろう。適切なＤＡＢ ＩＨＣ染色を提供するポリスチレンスルホネートマレイン酸コポリマーは、１５ｋＤａの分子量の下では認められなかった。 サルフェート及びスルホネートポリマーは、ＤＡＢ組織染色において微妙な影響を与えることがあるが、この影響は、主にポリマーの大きさ及び濃度をコントロールしうる。ポリマーが大きくなるほど、ＤＡＢ組織染色は減少し、ヘマトキシリンのバックグラウンド染色が増加した。ポリマーの濃度（ｗｔ％）の組織染色への影響は、小さいポリマーほど少なかったが、ポリマー複合体の溶解性及びＤＡＢ硫酸塩の析出防止のために、最適化は必要であった。このクラスにおいて筆頭候補となるポリマーは、低分子量のデキストラン硫酸（６ｋＤａ〜９．５ｋＤａ）及びポリスチレンスルホネート（分子量＝１．５３ｋＤａ、Ｍｎ＝１．３７ｋＤａ）であった。代表的な画像は、図１４〜図１６に示した。これらの図は、ポリマーを含まない（図１４）；４ｗｔ％の１．５３ｋＤａのポリスチレンスルホネートを添加した（図１５）；及び４ｗｔ％の６．５〜１０ｋＤａのデキストラン硫酸を添加した（図１６）、安定化されたＤＡＢ色素原溶液を用いて染色された組織切片の結果を示している。 新たなポリマーの存在下での色素原の安定性を検討するため、サルフェートおよびスルホネートポリマー安定化ＤＡＢ色素原溶液に、４５℃の熱ストレスを与えた。前述のように、より高い分子量のＰＳＳポリマーは、多価金属を封鎖するための水浄化に使用される。多価金属汚染物質は、ＤＡＢの酸化を触媒することが知られている。サルフェート及びスルホネートポリマーは、潜在的に多価金属汚染物質を含み、結果的にＤＡＢの酸化を早める場合がある。デキストランサルフェート、ＰＳＳ及びＰＳＳＭＡポリマーは、ＤＡＢ色素原の安定性低下の原因となる機能を有することが実証された（表８参照）。デキストランサルフェート及びＰＳＳＭＡポリマーは、ＨＰＬＣ分析中に認められたＤＡＢの副生成物を形成する傾向があった。これらの副生成物について、単離、又は構造解析による確認は行なっていない。ポリスチレンスルホネート（ＰＳＳ）ポリマーは、不定量の汚染物質を含んでおり、ＤＡＢの酸化速度に影響を及ぼしている。特定の場合に、ＰＳＳ安定化ＤＡＢ色素原溶液は、ベース液と同程度に安定していた。 要約すると、より高分子量のポリスチレンスルホネート（ＰＳＳ）ポリマーは、多価金属を封鎖するための水質浄化に使用される。多価金属の混入は、ＤＡＢの酸化速度を増加させる。デキストランサルフェート、ポリスチレンスルホネート塩、及びポリスチレンスルホネートマレイン酸（ＰＳＳＭＡ）ポリマーは、このグループ内でのＤＡＢ硫酸塩の析出を減らすポリマーの筆頭候補であった。ポリビニルスルホン酸（４ｋＤａ〜６ｋＤａのＰＶＳ、Ｎａ塩）及びポリエチレングリコールサルフェート（６００Ｄａ）は、水溶性のＤＡＢ−ポリマー複合体を形成しなかった。小さなサルフェート単量体のような物質、即ち硫酸水素２−アミノエチルは、水溶性のＤＡＢ複合体を形成しなかった。 開示された本発明の原理が適用されうる多くの可能な実施態様を考慮すれば、本実施態様が本発明を好適に説明する例に過ぎず、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではないことを認識するべきである。むしろ、本発明の範囲は以下の特許請求の範囲によって定義される。本発明者らは、したがって、これらの請求項の範囲及び精神内にあるすべてを本発明として請求する。 溶液中に ａ）溶媒、 ｂ）ＤＡＢ色素原又はその誘導体、 ｃ）安定剤、及び ｄ）前記溶媒に可溶なポリマー、を含有し、前記ポリマーを含有しない類似組成物と比較して、前記溶液からの前記ＤＡＢ色素原又はその誘導体の析出が加速劣化条件下で減少する、免疫組織化学染色用の組成物。 前記ポリマーが、サルフェート官能基、スルホネート官能基、アミン官能基、又はそれらの組合せを含む、請求項１に記載の組成物。 前記アミン官能基が、第一級アミン、第二級アミン、第三級アミン、又は第四級アミンである、請求項２に記載の組成物。 前記ポリマーが、ポリアルキレンアミンポリマーである、請求項１に記載の組成物。 前記ポリマーが、デキストラン硫酸、ポリスチレンスルホネート、ポリエチレンイミン、アミノデキストラン、ＤＥＡＥ−デキストラン、ポリスチレンスルホネートマレイン酸コポリマー、ポリビニルスルホネート、ポリ（２−ビニル−１−メチルピリジニウムブロミド、ポリ（２−メチルアクリルオキシエチルトリメチルアンモニウムブロミド）、ポリ（アクリルアミド／２−メチルアクリルオキシエチルトリメチルアンモニウムブロミド、及びそれらの組合せから選択される、請求項１に記載の組成物。 前記ポリマーが、直鎖状又は分岐状ポリエチレンイミンである、請求項１に記載の組成物。 前記直鎖状又は分岐状ポリエチレンイミンが、４ｋＤａのポリエチレンイミンのＨＣｌ塩である、請求項６に記載の組成物。 前記ポリマーが、約１ｋＤａと約５００ｋＤａの間の数平均分子量を有する、請求項１に記載の組成物。 前記ポリマーが、溶液の重量の約０．０５％〜約１０％である、請求項１に記載の組成物。 前記ＤＡＢ色素原又はその誘導体が、約０．１ｍＭ〜約１００ｍＭの濃度を有する、請求項１に記載の組成物。 前記ポリマーが、から選択される式を有し、ここで、各Ｙが独立して酸素、硫黄、及びＮＲａから選択され、ここで、Ｒａが水素、脂肪族、アリール、ヘテロアリール、及びヘテロ脂肪族から選択され；Ｒ１が脂肪族、アリール、ヘテロアリール、又はエステル、酸、及びアミドから選択されるヘテロ原子含有部分から選択され；Ｒ２が水素、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、又はヘテロアリールから選択され；Ｒ３がスルホネート、アミン、カルボキシル基、カルボキシレート、又はそれらの組合せから選択されるポリマー官能基であり；ｎが１〜約１００の範囲である、請求項１に記載の組成物。 前記ポリマーが、式を有し、ここで、Ｒ２が水素、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、又はヘテロアリールから選択され；Ｒ３がスルホネート、アミン、カルボキシル基、カルボキシレート、又はそれらの組合せから選択されるポリマー官能基であり；Ｒ４が水素、脂肪族、及び（ＣＨ２）ｑＮＲａＲｂＲｃから選択され、ここで、Ｒａ、Ｒｂ及びＲｃが、独立して水素、脂肪族、アリール、及びそれらの組合せから選択され；ｑは１〜約１０の範囲であり；ｎは１〜約１００の範囲である、請求項１に記載の組成物。 イミダゾール、２−ヒドロキシピリジン、及びそれらの組合せからなる群から選択されるエンハンサーを更に含む、請求項１に記載の組成物。 前記安定剤が、メタ重亜硫酸ナトリウムである、請求項１に記載の組成物。 前記ＤＡＢ色素原又はその誘導体の析出が、前記ポリマーを含まない組成物に比べて加速劣化条件下で約１０％〜約１００％減少し、ここで、前記ＤＡＢ色素原又はその誘導体の析出は、４５℃でのＨＰＬＣの加速劣化試験、又はＫＨＳＯ４を用いたポリマースクリーニングのいずれかにより決定される、請求項１に記載の組成物。 前記ＤＡＢ色素原又はその誘導体の析出が、前記ポリマーを含まない組成物に比べて加速劣化条件下で減少すると同時に、検出条件下で前記ＤＡＢ色素原又はその誘導体の析出が、前記ポリマーを含まない組成物と同等である、請求項１に記載の組成物。 前記ＤＡＢ色素原又はその誘導体と同等の析出が、前記ポリマーを含まない組成物と比較して、適切な読み取り機によって測定したときに、測定された染色強度の平均値において統計的に有意な差が生じない、請求項１６に記載の組成物。 前記ポリマーが、溶媒中のＤＡＢ色素原又はその誘導体の溶解性を維持するよう、ＤＡＢ色素原又はその誘導体と複合体を形成するように構成されている、請求項１に記載の組成物。 前記安定剤及び前記ポリマーが、保存条件下で前記ＤＡＢ色素原又はその誘導体を分解及び／又は酸化から実質的に防止する、請求項１に記載の組成物。 前記安定剤が、メタ重亜硫酸ナトリウム又は亜硫酸水素ナトリウムであり、ポリマーが、デキストラン硫酸、ポリスチレンスルホネート、ポリエチレンイミン、アミノデキストラン、ＤＥＡＥ−デキストラン、ポリスチレンスルホネートマレイン酸コポリマー、ポリビニルスルホン酸、ポリ（２−ビニル−１−メチルピリジニウムブロミド、ポリ（２−メチルアクリルオキシエチルトリメチルアンモニウムブロミド、又はポリ（アクリルアミド／２−メチルアクリルオキシエチルトリメチルアンモニウムブロミドであり、前記組成物が、前記溶液中の前記ＤＡＢ色素原又は誘導体の量を維持するために、ポリマーがＤＡＢ色素原又はその誘導体を複合化するよう保存条件下で安定なままであるように構成され、前記組成物が、免疫組織化学染色に適したシグナルを生成するために、検出条件下で前記ＤＡＢが析出するように構成されている、請求項１に記載の組成物。 前記ＤＡＢ色素原が３，３’−ジアミノベンジジンであり、前記安定剤がメタ重亜硫酸ナトリウムであり、前記ポリマーがポリエチレンイミンである、請求項２０に記載の組成物。 前記組成物が、約１ｍＭ〜約１５ｍＭの３，３’−ジアミノベンジジン、約０．１〜約６ｍＭのメタ重亜硫酸ナトリウム、及び約０．０５％（ｗ／ｗ）〜約０．５％（ｗ／ｗ）のポリエチレンイミンを含有する、請求項２１に記載の組成物。 ＤＡＢ色素原又はその誘導体を用いて組織試料中の標的を検出する方法であって、 ・標的に特異的な特異的結合部分と組織試料を接触させること、 ・特異的結合部分を酵素コンジュゲートで標識すること、 ・溶液中に溶媒、ＤＡＢ色素原又はその誘導体、安定剤、及び前記溶媒に可溶なポリマーを含有する、免疫組織化学染色用の組成物であって、検出条件下で前記ＤＡＢ色素原又はその誘導体の析出を維持しながらも、保存条件下で前記ＤＡＢ色素原又はその誘導体の析出を低減するように構成されている組成物と組織試料と接触させること、 ・組織試料を酸化剤と接触させ、酸化剤、免疫組織化学染色用の前記組成物、及び前記酵素コンジュゲートの間の反応により、前記ＤＡＢ色原体又はその誘導体を標的の近位に沈着させること、 ・組織試料を対比染色剤と接触させること、及び ・前記ＤＡＢ色素原又はその誘導体を探すことにより組織試料中の標的を検出することを含む方法。 前記組織試料は、ホルマリン固定、パラフィン包埋組織試料である、請求項２３に記載の方法。 保存条件が、他の試薬と流体連通していない密閉された保存容器を含み、検出条件が、組織試料に沈着され、前記酵素と接触させられた免疫組織化学染色用の前記組成物及び前記酸化剤を含む、請求項２３に記載の方法。 前記特異的結合部分が、抗体又は核酸プローブである、請求項２３に記載の方法。 免疫組織化学染色用の前記組成物と前記組織試料を接触させることが、前記ＤＡＢ色素原又はその誘導体を含有する第一の成分溶液、前記安定剤を含有する第二の成分溶液、及び前記ポリマーを含有する第三の成分溶液を組織試料に加えて、組織試料と接触しながら免疫組織化学染色用の組成物を形成することを含む、請求項２３に記載の方法。 開示された実施態様は、ＤＡＢ色素原、及び／又はその誘導体、安定剤、及びポリマーを含まない組成物に比べてＤＡＢの析出を防止又は低減しうるポリマーを含有する組成物に関する。またここに開示されるものは、開示された組成物を使用する方法及びキットの実施態様である。