生命科学関連特許情報
| タイトル： | 公開特許公報(A)_皮膚に常在するアクネ菌の菌数を予測する方法 |
| 出願番号： | 2012246965 |
| 年次： | 2014 |
| IPC分類： | G01N 33/48,G01N 33/50 |
特許情報キャッシュ
赤座 誠文 竹岡 史帆里 高橋 千奈 間嶋 康夫 宮脇 維章 広瀬 統 JP 2014095608 公開特許公報(A) 20140522 2012246965 20121109 皮膚に常在するアクネ菌の菌数を予測する方法 日本メナード化粧品株式会社 592262543 赤座 誠文 竹岡 史帆里 高橋 千奈 間嶋 康夫 宮脇 維章 広瀬 統 G01N 33/48 20060101AFI20140425BHJP G01N 33/50 20060101ALI20140425BHJP JPG01N33/48 MG01N33/50 D 5 ＯＬ 12 2G045 2G045BB01 2G045BB20 2G045CB09 2G045DA02 2G045FB06 2G045GC22本発明は、顔面において、皮脂に含有される遊離脂肪酸組成の分析を利用して皮膚表面に常在するアクネ菌（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｎｅｓ）の菌数を予測する方法に関する。ヒトの顔面の皮膚表面には、アクネ菌（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｎｅｓ）、ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐｐ．）及びマラセチア（Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ ｓｐｐ．）などの常在菌が生息している。このうち最も優勢な皮膚常在菌はアクネ菌である（非特許文献１）。また、アクネ菌は、尋常性ざ瘡（ニキビ）に深く関与している。アクネ菌の産生するリパーゼは、皮脂を分解し、それによって産生された遊離脂肪酸が炎症を引き起こす（非特許文献２）。つまり、皮膚上のアクネ菌の菌数を知ることは、皮膚常在菌叢を把握するだけでなく、ニキビの予測や病態の把握及び治療にとって、重要と言える。皮膚に常在するアクネ菌の菌数を測定する方法としては、一般的に培養法が用いられている（特許文献１）。しかし、培養法は操作が煩雑であり、また結果が出るまでに１週間程の培養時間が必要と言う欠点がある。培養法を用いずにアクネ菌数を測定する方法としては、遺伝子解析を利用した方法がある（非特許文献３）。しかし、本手法を用いる場合、遺伝子工学実験に精通した者しか実施できず、高額な測定器（リアルタイムＰＣＲ）や試薬が必要という欠点がある。皮膚に常在するアクネ菌数は、皮表の皮脂量や遊離脂肪酸量に比例するとも言われているが（非特許文献４）、統計学的な相関関係にあるわけではなく、皮表の皮脂量や遊離脂肪酸量からアクネ菌数を予測することは現実的には不可能である。特開２０１０−２０２６０４Ｊ Ｄｅｒｍａｔｏｌ，Ｖｏｌ．３７，ＰＰ．７８６−７９２（２０１０）Ｅｕｒ Ｊ Ｄｅｒｍａｔｏｌ，Ｖｏｌ．１４，ＰＰ．４−１２（２００４）Ｊ Ｃｌｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，Ｖｏｌ．４８，ＰＰ．３５７５−３５８１（２０１０）Ｊ Ｃｌｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，Ｖｏｌ．１２，ＰＰ．６７２−６７５（１９８０）そこで、皮膚表面に常在するアクネ菌の菌数を測定する新しい方法の開発が望まれていた。本発明者は、上記課題の解決に向け鋭意検討を行った結果、顔面において、皮脂に含有される遊離脂肪酸組成と皮膚表面に常在するアクネ菌の菌数に相関関係があることを見出した。具体的には、アクネ菌の菌数は、遊離脂肪酸に占めるリノレン酸、ヘキサデセン酸及びペトロセリン酸の割合と相関関係を示した。このことから、皮脂中の遊離脂肪酸に占めるリノレン酸、ヘキサデセン酸又はペトロセリン酸の割合を算出することによって、皮膚に常在するアクネ菌の菌数を予測できることを見出し、本発明を完成するに至った。本願発明のリノレン酸（α−ｌｉｎｏｌｅｎｉｃ ａｃｉｄ）は分子式Ｃ１８Ｈ３０Ｏ２、正式名ｃｉｓ，ｃｉｓ，ｃｉｓ−９，１２，１５−オクタデカトリエン酸である。ヘキサデセン酸（Ｈｅｘａｄｅｃｅｎｏｉｃ ａｃｉｄ）は、分子式Ｃ１６Ｈ３０Ｏ２、正式名ｃｉｓ−６−ヘキサデセン酸である。ペトロセリン酸（Ｐｅｔｒｏｓｅｌｉｎｅ ａｃｉｄ）は、分子式Ｃ１８Ｈ３４Ｏ２、正式名ｃｉｓ−６−オクタデセン酸である。リノレン酸や、ヘキサデセン酸及びペトロセリン酸の異性体であるパルミトレイン酸及びオレイン酸が、抗菌性を有するということは知られている（特許文献２、３、非特許文献５）。一方、濃度によっては、オレイン酸がアクネ菌の増殖を促進するという報告もある（非特許文献６）。しかし、皮脂中に遊離しているリノレン酸、ヘキサデセン酸又はペトロセリン酸の量が、皮膚に常在するアクネ菌の菌数と相関するという報告はない。さらには、遊離脂肪酸に占めるリノレン酸、ヘキサデセン酸又はペトロセリンの割合が、皮膚に常在するアクネ菌の菌数と相関するという報告はない。特開平８−１５１３０３特開２００９−１５５２５７醗酵工学、Ｖｏｌ．５７，ＰＰ．１６４−１７６（１９７９）医学と生物学、Ｖｏｌ．１０３，ＰＰ．４６３−４６８（１９８１）本発明は、皮脂に含有される遊離脂肪酸に占めるリノレン酸、ヘキサデセン酸又はペトロセリン酸の割合から、皮膚に常在するアクネ菌の菌数を予測するようにしたものである。次に本発明を詳細に説明するため、実施例及び実験例を挙げるが、本発明はこれに限定されるものではない。皮脂に含有される遊離脂肪酸の解析健常人４０名（女性２０名：２４〜３８歳（平均３０歳）、男性２０名：２５〜３８歳（平均３０歳））を被験者とした。サンプリングは、化粧品を使用していない状態で実施した。頬部の１０ｃｍ２から、油取り紙を用いて皮脂を採取した。アセトン／ジエチルエーテル（１：１）混合液を用いて油取り紙から皮脂を抽出した後、減圧留去し、残渣に０．１ｍＬのＰｈｅｎｙｌｔｒｉｍｅｔｈｙｌａｍｍｏｎｉｕｍ Ｈｙｄｒｏｘｉｄｅ（０．２Ｍ）を加えて再溶解した。１μＬを採取し、ガスクロマトグラフィーにて解析した。カラムは、ＳＵＰＥＬＣＯ ＳＰ−２５６０（１００ｍ×０．２５ｍｍ×膜圧０．２μｍ）を用いた。各脂肪酸量は、モル数に換算し、解析を行った。皮膚に常在するアクネ菌の菌数測定皮脂を採取した部位の対照部の頬部５ｃｍ２から、２％ポリソルベート８０加リン酸緩衝液（ｐＨ７．０）を含ませた綿棒を用いて常在菌を採取した。採取液に常在菌を分散させ、適宜段階希釈した後、カンテン平板塗抹法にてアクネ菌数を測定した。培養には、変法ＧＡＭカンテン培地（日水製薬）を用い、３５℃にて７日間、嫌気培養した。皮脂に含まれる遊離脂肪酸中に占めるリノレン酸の割合（％）とアクネ菌数の関係を図１（全体）、図２（女性）及び図３（男性）に示す。（図１）（図２）（図３）遊離脂肪酸に占めるリノレン酸の割合（％）をＸとした時、アクネ菌数（Ｙ）は、全体では−０．０８７Ｘ＋５．６５０（相関係数０．６２）、女性では−０．０７５Ｘ＋５．４４７（相関係数０．６９）、男性では−０．５３３Ｘ＋６．４１４（相関係数０．５９）で求められた。皮脂に含まれる遊離脂肪酸に占めるヘキサデセン酸の割合（％）とアクネ菌数の関係を図４（全体）、図５（女性）及び図６（男性）に示す。（図４）（図５）（図６）遊離脂肪酸中に占めるヘキサデセン酸の割合（％）をＸとした時、アクネ菌数（Ｙ）は、全体では０．１１３Ｘ＋１．８８６（相関係数０．５６）、女性では０．１０９Ｘ＋１．７０２（相関係数０．５７）、男性では０．１０２Ｘ＋２．５０９（相関係数０．５４）で求められた。皮脂に含まれる遊離脂肪酸中に占めるペトロセリン酸の割合（％）とアクネ菌数の関係を図７（全体）、図８（女性）及び図９（男性）に示す。（図７）（図８）（図９）遊離脂肪酸に占めるペトロセリン酸の割合（％）をＸとした時、アクネ菌数（Ｙ）は、全体では０．３４５Ｘ＋１．７２２（相関係数０．６１）、女性では０．３８５Ｘ＋１．１２８（相関係数０．６２）、男性では０．２５５Ｘ＋２．９０５（相関係数０．５３）で求められた。皮脂に含まれる遊離脂肪酸に占めるパルミチン酸（Ｃ１６：０）の割合（％）とアクネ菌数の関係を図１０（全体）に示す。（図１０）遊離脂肪酸に占めるパルミチン酸の割合（％）とアクネ菌数の相関係数は全体で０．２０であり、相関を認めなかった。女性又は男性毎に見ても、相関は認めなかった。皮脂に含まれる遊離脂肪酸を構成する他の主要な脂肪酸、例えばラウリン酸（Ｃ１２：０）、トリデカン酸（Ｃ１３：０）、ミリスチン酸（Ｃ１４：０）、ペンタデシル酸（Ｃ１５：０）、パルミトレイン酸（Ｃ１６：１（ｃｉｓ９））、マルガリン酸（Ｃ１７：０）、ステアリン酸（Ｃ１８：０）、オレイン酸（Ｃ１８：１（ｃｉｓ９））及びリノール酸（Ｃ１８：２）についても、遊離脂肪酸に占める割合とアクネ菌数との間に相関を認めなかった。これらの結果から、遊離脂肪酸に占めるリノレン酸、ヘキサデセン酸又はペトロセリン酸の割合は、皮膚に常在するアクネ菌数と特異的に相関関係を示すことが明らかとなった。実験例 ニキビが出来ている女性、ニキビができやすい女性、ニキビができにくい女性の各３名（計９名）について、皮脂中の遊離脂肪酸に占めるリノレン酸、ヘキサデセン酸及びペトロセリン酸の割合を利用したアクネ菌数予測を行った。被験部位としては頬部を用いた。また、確認のため、実施例に示した方法で、培養法によるアクネ菌測定も同時に実施した。結果を表１に示す。（表１）上記の表１から、ニキビができている人、ニキビができやすい人、ニキビができにくい人の順に、皮膚に常在するアクネ菌数が多いことが確認された。本発明の、皮脂中の遊離脂肪酸に占めるリノレン酸、ヘキサデセン酸又はペトロセリン酸の割合を測定することによって、皮膚に常在するアクネ菌の菌数を予測する方法は、皮膚常在菌叢の解析研究や、ニキビの予測や病態の把握及び治療に利用できる。顔面において皮脂中の総遊離脂肪酸に占める特定の遊離脂肪酸の割合を算出することによって皮膚表面に常在するアクネ菌（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｎｅｓ）の菌数を予測する方法。請求項１における特定の遊離脂肪酸がリノレン酸、ヘキサデセン酸又はペトロセリン酸であることを特徴とする皮膚に常在するアクネ菌の菌数を予測する方法。皮脂中の総遊離脂肪酸に占めるリノレン酸の割合（％）をＸ、皮膚に常在するアクネ菌数をＹとした時、Ｙ＝ａＸ＋ｂにおけるａが−０．５３３〜−０．０７５である皮膚表面に常在するアクネ菌の菌数を予測する請求項２記載の方法。皮脂中の総遊離脂肪酸に占めるヘキサデセン酸の割合（％）をＸ、皮膚に常在するアクネ菌数をＹとした時、Ｙ＝ａＸ＋ｂにおけるａが０．１０２〜０．１１３である皮膚表面に常在するアクネ菌の菌数を予測する請求項２記載の方法。皮脂中の総遊離脂肪酸に占めるペトロセリン酸の割合（％）をＸ、皮膚に常在するアクネ菌数をＹとした時、Ｙ＝ａＸ＋ｂにおけるａが０．２５５〜０．３８５である皮膚表面に常在するアクネ菌の菌数を予測する請求項２記載の方法。 【目的】皮脂に含有される遊離脂肪酸組成の解析を利用して皮膚表面に常在するアクネ菌（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｎｅｓ）の菌数を予測する方法を提供する。【構成】皮脂に含有される遊離脂肪酸組成と皮膚表面に常在するアクネ菌の菌数の関係について解析した結果、アクネ菌の菌数は、皮脂中の遊離脂肪酸に占めるリノレン酸、ヘキサデセン酸及びペトロセリン酸の割合と相関関係を示した。このことから、皮脂中の遊離脂肪酸に占めるリノレン酸、ヘキサデセン酸又はペトロセリン酸の割合を算出することによって、皮膚に常在するアクネ菌の菌数を予測できることを見出した。【選択図】なし