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| タイトル： | 公開特許公報(A)_分子イメージングにより代謝機能を測定するための検査薬 |
| 出願番号： | 2012044231 |
| 年次： | 2013 |
| IPC分類： | A61K 51/00,G01N 33/58,A61K 49/00 |
特許情報キャッシュ
川井 恵一 玉井 郁巳 國嶋 崇隆 中西 猛夫 小林 正和 JP 2013180959 公開特許公報(A) 20130912 2012044231 20120229 分子イメージングにより代謝機能を測定するための検査薬 国立大学法人金沢大学 504160781 平木 祐輔 100091096 藤田 節 100118773 島村 直己 100101904 川井 恵一 玉井 郁巳 國嶋 崇隆 中西 猛夫 小林 正和 A61K 51/00 20060101AFI20130826BHJP G01N 33/58 20060101ALI20130826BHJP A61K 49/00 20060101ALI20130826BHJP JPA61K49/02 AG01N33/58 ZA61K49/00 AA61K49/00 C 5 1 ＯＬ 15 2G045 4C085 2G045AA25 2G045CB17 2G045CB26 2G045DA20 2G045FB08 2G045FB12 4C085HH03 4C085HH07 4C085HH11 4C085KA27 4C085KA28 4C085KA29 4C085KB55 4C085LL20 本発明は、分子イメージングにより代謝機能を測定するための検査薬に関する。 分子イメージングとは、生体内での分子プロセスの可視化に関する基礎的・臨床的研究及び開発された可視化手法を利用する応用研究及びそれらの方法の総称であり、生物が生きた状態のままで外部から生体内の遺伝子やタンパク質などの様々な分子の挙動を観察するために、例えば、ポジトロン断層撮影法（Positron Emission Tomography, ＰＥＴ）、単一光子放射断層撮影法（Single Photon Emission Computed Tomography, ＳＰＥＣＴ）、近赤外光画像法（Near Infrared Imaging, ＮＩＲＩ）や核磁気共鳴画像法（Magnetic Resonance Imaging, ＭＲＩ）、化学シフト画像法（Chemical Shift Imaging, ＣＳＩ）として利用されている。 非特許文献１には、胆管腔を形成するサンドイッチ培養肝細胞（ＳＣＨ）を用いた薬物排出トランスポーターＭＲＰ２輸送活性の評価法として、細胞内で加水分解されてＭＲＰ２蛍光基質5 (and 6)-carboxy-2’-7’-dichlorofluorescein（ＣＤＦ）へ変換されるCDF Diacetate（ＣＤＦＤＡ）を用いた薬物排出トランスポーターＭＲＰ２の輸送機能の定量的可視化法（Quantitative Time-Lapse Imaging, ＱＴＬＩ）が記載されている。 しかしながら、非特許文献１は、ＭＲＰ２輸送機能の定量的可視化を意図しているだけで、分子イメージングによる代謝機能の測定までは意図していない。 放射性医薬品として用いられているＮ−ピリドキシル−５−メチルトリプトファンテクネチウム注射液（９９ｍＴｃ−ＰＭＴ）注射液は、肝胆道系の機能が正常の場合、静脈内に注射されると速やかに血液中から消失してその大部分が肝臓に集積し、次いで胆道系を経て腸管内に排泄され、一方、肝胆道系に種々の疾患や機能障害がある場合、その程度に応じて肝臓集積低下や腸管内排泄遅延など異常動態が観察でき、肝胆道系疾患及び機能の診断に有用である（非特許文献２〜４）。 同様にＭＲＩ造影剤として用いられている常磁性のガドキセト酸ナトリウム（Ｇｄ-ＥＯＢ-ＤＴＰＡ）は、静脈内へ投与後、血管内及び細胞間隙に非特異的に分布した後、肝細胞に特異的に取り込まれるため、ダイナミック撮像による血流評価及び肝細胞機能の評価に有用である。この製剤も健康成人に静脈内投与したとき、約40％が胆汁を経由して糞中に排泄されるが、血清中及び胆汁、尿試料を分析した結果、代謝物は認められていない（非特許文献５）。 しかしながら、従来生体内に投与されていた放射性医薬品あるいはＭＲＩ造影剤は、その作用・効果を奏するためには、代謝されないことが前提であり、これまで、それらの画像診断薬由来の代謝物の分析を目的に検査することはほとんど行われていない。日本薬学会北陸支部平成２３年度第１回総会及び第１２３回例会、プログラム・講演要旨集ｐ．２１、６ In vitro 蛍光イメージング(QTLI)法を用いたＭＲＰ２機能変動評価−肝代謝を考慮した薬物間相互作用予測への応用−（２０１１年１１月２１日発行）渡辺幸康，他：核医学，１９：１５８９−１５９３，１９８２大竹英二，他：画像診断，３：２６５−２７０，１９８３中村和義，他：基礎と臨床，１７：１２２７−１２３１，１９８３バイエル薬品株式会社：ガドキセト酸ナトリウム［ＥＯＢプリモビスト注］医薬品インタビューフォーム，２０１１年１０月（第３版） 本発明の課題は、非侵襲的に生体内組織における代謝機能を測定できる検査薬を提供することである。 本発明の要旨は以下のとおりである。（１）生体内に存在する酵素の作用により組織から排出されやすい放射性代謝物、蛍光性代謝物、常磁性代謝物又は磁気共鳴性代謝物に変化する化合物を含有する、分子イメージングにより代謝機能を測定するための検査薬。（２）前記化合物が、放射性化合物であって、生体内に存在する酵素の作用により組織から排出されやすい放射性代謝物に変化する放射性化合物である前記（１）に記載の検査薬。（３）前記化合物が、蛍光性化合物であって、生体内に存在する酵素の作用により組織から排出されやすい蛍光性代謝物に変化する蛍光性化合物である前記（１）に記載の検査薬。（４）前記化合物が、常磁性化合物であって、生体内に存在する酵素の作用により組織から排出されやすい常磁性代謝物に変化する常磁性化合物である前記（１）に記載の検査薬。（５）前記化合物が、磁気共鳴性化合物であって、生体内に存在する酵素の作用により組織から排出されやすい磁気共鳴性代謝物に変化する磁気共鳴性化合物である前記（１）に記載の検査薬。 本発明の検査薬によれば、非侵襲的に生体内組織における代謝機能を測定できる。図１は、本発明の検査薬が肝臓細胞で代謝され、生じた放射性代謝物が、排出トランスポーターなどの作用により速やかに胆道系を経て腸管内に排泄される状態を示す模式図である。図２は、本発明の検査薬を投与した被検者の肝臓組織における代謝機能が正常である場合及び代謝酵素の異常・機能低下がある場合の動態を示す図である。図３は、ラット肝細胞ホモジネートへのＣＤＦＤＡ添加後の蛍光強度を示す図である。図４は、Ｈ２ＦＤＡ添加後のサンドイッチ培養胆管腔における蛍光強度に対するＢＳＥＰ阻害剤トログリタゾンの影響を示す図である。図５は、加水分解酵素で構造変換する蛍光性化合物添加後のサンドイッチ培養胆管腔における蛍光強度に対するＢＳＥＰ阻害剤トログリタゾンの影響を示す図である。図６は、マウス肝臓、腎臓における［Ｓ−ｍｅｔｈｙｌ−１４Ｃ］−Ｌ−Ｍｅｔ及び［Ｓ−ｍｅｔｈｙｌ−１４Ｃ］−Ｄ−Ｍｅｔの組織内放射性代謝物の存在比を示す図である。図７は、マウス肝臓、腎臓、胆汁における１２５Ｉ−イオマゼニルの組織内放射性代謝物分析のシリカゲル薄層クロマトグラフィーを示す図である。 本発明に用いる化合物としては、生体内に存在する酵素の作用により組織から排出されやすい放射性代謝物、蛍光性代謝物、常磁性代謝物又は磁気共鳴性代謝物に変化するものであれば、特に制限はない。 本発明においては、代謝機能を測定する組織に移行し、未代謝状態では当該組織から排出されにくく、代謝機能の測定対象である酵素によって化学形が変化する、すなわち代謝され、かつ生じた放射性代謝物、蛍光性代謝物、常磁性代謝物又は磁気共鳴性代謝物が速やかにその組織から消失するものを目的に応じて適宜選択すればよい（図１参照）。 未代謝の放射性化合物等と、放射性代謝物等との組織からの排出されやすさの相違が大きい程、検査の感度が高くなる。 ヒトの体表層や、マウス、ラット等の小動物であれば、蛍光標識を利用した分子イメージングでも充分な感度が得られるが、ヒトの体深部の組織における代謝機能を測定する場合には、非侵襲的なイメージングも可能な点で、生体内に存在する酵素の作用により組織から排出されやすい放射性代謝物等に変化する放射性化合物等を用いることが好ましい。 多くのエステル化合物は肝エステラーゼにより加水分解されてカルボン酸化合物に変換することが知られている。例えば、いわゆるプロドラッグと呼ばれる化合物の放射性標識体、蛍光性標識体、常磁性標識体又は磁気共鳴元素標識体を本発明の化合物として用いることができる。 また、１２３Ｉ−ＢＭＩＰＰ（１５−（４−ヨードフェニル）−３（Ｒ、Ｓ）−メチルペンタデカン酸１２３Ｉ）、１１Ｃ−パルミチン酸、１２３Ｉ−ヘプタデカン酸等の種々の放射性カルボン酸が診断薬として用いられているが、これらの放射性カルボン酸をエステル、例えば、Ｃ１−６アルキルエステル、コレステロールエステル、又はモノ、ジもしくはトリグリセリドに変換した放射性カルボン酸エステルも本発明の放射性化合物として用いることができる。 また、シトクロムＰ４５０は基質を水酸化して、排出されやすい水溶性の物質に変換するので、シトクロムＰ４５０の基質に対応する放射性化合物、蛍光性化合物、常磁性化合物又は磁気共鳴性化合物を常法により合成して、本発明の検査薬として用いることができる。シトクロムＰ４５０の基質が、カルボキシル基又は水酸基を有する場合には、エステルに変換することにより、カルボキシル基又はアミノ基を有する場合には、アミドに変換することにより、未代謝の放射性化合物、蛍光性化合物、常磁性化合物又は磁気共鳴性化合物と、放射性代謝物、蛍光性代謝物、常磁性代謝物又は磁気共鳴性代謝物との組織からの排出されやすさの相違が大きくなるので、検査の感度が高くなる。 この場合、検査の感度を向上させる目的で速やかな組織からの排泄を達成するためには、本発明の検査薬から生じる放射性代謝物、蛍光性代謝物、常磁性代謝物又は磁気共鳴性代謝物が排出トランスポーターの基質となって細胞外に輸送されるものを用いることが望ましい。特に、特定の代謝酵素による代謝以降に複数の代謝物が存在しても、それらの代謝物のすべてが排出トランスポーターの基質として速やかに細胞外に排出されれば、代謝酵素活性をイメージングすることができる。 シトクロムＰ４５０（ＣＹＰ）の各分子種とその基質となりうる化合物との具体例を以下に示す。（ＣＹＰ１Ａ２）amitriptyline, caffeine, clomipramine, clozapine, cyclobenzaprine, estradiol, fluvoxamine, haloperidol, imipramine, mexiletine, naproxen, olanzapine, ondansetron, acetaminophen, propranolol, riluzole, ropivacaine, tacrine, theophylline, tizanidine, verapamil, R-warfarin, zileuton, zolmitriptan（ＣＹＰ２Ｂ６）bupropion, cyclophosphamide, efavirenz, ifosphamide, methadone, sorafenib（ＣＹＰ２Ｃ８）amodiaquine, cerivastatin, paclitaxel, repaglinide, sorafenib, torsemide（ＣＹＰ２Ｃ９）非ステロイド性抗炎症薬：diclofenac, ibuprofen, lornoxicam, meloxicam, S-naproxen, piroxicam, suprofen経口血糖降下剤:tolbutamide, glipizideアンジオテンシンII阻害薬：losartan, irbesartanスルホニル尿素系薬剤：glyburide, glibenclamide, glipizide, glimepiride, tolbutamideその他：amitriptyline, celecoxib, fluoxetine, fluvastatin, glyburide, nateglinide, phenytoin-4-OH2, rosiglitazone, tamoxifen, torsemide, S-warfarin（ＣＹＰ２Ｃ１９）プロトンポンプ阻害薬：lansoprazole, omeprazole, pantoprazole, rabeprazole抗てんかん剤：diazepam, phenytoin, S-mephenytoin, phenobarbitoneその他：amitriptyline, carisoprodol, citalopram, chloramphenicol, clomipramine, clopidogrel, cyclophosphamide, hexobarbital, imipramine, indomethacin, R-mephobarbital, moclobemide, nelfinavir, nilutamide, primidone, progesterone, proguanil, propranolol, teniposide, R-warfarin（ＣＹＰ２Ｄ６）tamoxifenβ遮断薬：carvedilol, S-metoprolol, propafenone, timolol抗うつ薬：amitriptyline, clomipramine, desipramine, fluoxetine, imipramine, paroxetine抗精神病薬：haloperidol, perphenazine, risperidone, thioridazine, zuclopenthixolその他：alprenolol, amphetamine, aripiprazole, atomoxetine, bufuralol, chlorphenimipramine, chlorpromazine, codeine, debrisoquine, dexfenfluramine, dextromethorphan, donepezil, duloxetine, encainide, flecainide, fluvoxamine, lidocaine, metoclopramide, methoxyamphetamine, mexiletine, minaprine, nebivolol, nortriptyline, ondansetron, oxycodone, perhexiline, phenacetin, phenformin, promethazine, propranolol, sparteine, tramadol, venlafaxine（ＣＹＰ２Ｅ１）麻酔薬：enflurane, halothane, isoflurane, methoxyflurane, sevofluraneその他：acetaminophen, aniline, benzene, chlorzoxazone, ethanol, N,N-dimethylformamide, theophylline（ＣＹＰ３Ａ４，５，７）マクロライド系抗生物質：clarithromycin, erythromycin (not 3A5)抗不整脈薬：quinidine (not 3A5)ベンゾジアゼピン系薬物：alprazolam, diazepam, midazolam, triazolam免疫調節剤：cyclosporine, tacrolimus (FK506)抗ＨＩＶ薬：indinavir, nelfinavir, ritonavir, saquinavir消化管運動改善薬：cisapride抗ヒスタミン薬：astemizole, chlorpheniramine, terfenadineカルシウム拮抗薬：amlodipine, diltiazem, felodipine, lercanidipine, nifedipine, nisoldipine, nitrendipine, verapamilＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害薬：atorvastatin, cerivastatin, lovastatin, simvastatinステロイド類：estradiol, hydrocortisone, progesterone, testosteroneその他：alfentanil, aprepitant, aripiprazole, boceprevir, buspirone, caffeine, cilostazol, cocaine, dapsone, dexamethasone, dextromethorphan, docetaxel, domperidone, eplerenone, fentanyl, finasteride, gleevec, haloperidol, imipramine, irinotecan, LAAM, lidocaine, methadone, nateglinide, ondansetron, pimozide, propranolol, quetiapine, quinine, risperidone, salmeterol, sildenafil, sirolimus, sorafenib, sunitinib, tamoxifen, taxol, telaprevir, terfenadine, torisel, trazodone, vincristine, zaleplon, ziprasidone, zolpidem 本発明においては、目的に応じて、前記放射性化合物、蛍光性化合物、常磁性化合物又は磁気共鳴性化合物を単独で、又は２種以上組み合わせて用いる。 本発明に用いる放射性化合物の標識に利用する放射性核種としては、例えばトリチウム（３Ｈ）、１１−炭素（１１Ｃ）、１４−炭素（１４Ｃ）、１３−窒素（１３Ｎ）、１５−酸素（１５Ｏ）、１８−フッ素（１８Ｆ）、３２−リン（３２Ｐ）、５９−鉄（５９Ｆｅ）、６２−銅（６２Ｃｕ）、６４−銅（６４Ｃｕ）、６７−銅（６７Ｃｕ）、６７−ガリウム（６７Ｇａ）、８１ｍ−クリプトン（８１ｍＫｒ）、８１−ルビジウム（８１Ｒｂ）、８９−ストロンチム（８９Ｓｒ）、９０−イットリウム（９０Ｙ）、９９ｍ−テクネチウム（９９ｍＴｃ）、１１１−インジウム（１１１Ｉｎ）、１２３−ヨード（１２３Ｉ）、１２４−ヨード（１２４Ｉ）、１２５−ヨード（１２５Ｉ）、１３１−ヨード（１３１Ｉ）、１３３−キセノン（１３３Ｘｅ）、１１７ｍ−スズ（１１７ｍＳｎ）、１５３−サマリウム（１５３Ｓｍ）、１８６−レニウム（１８６Ｒｅ）、１８８−レニウム（１８８Ｒｅ）、２０１−タリウム（２０１Ｔｌ）、２１２−ビスマス（２１２Ｂｉ）、２１３−ビスマス（２１３Ｂｉ）及び２１１−アスタチン（２１１Ａｔ）が挙げられる。 本発明に用いる磁気共鳴性化合物の標識に利用する磁気共鳴核種としては、例えば重水素（２Ｈ）、１０−ホウ素（１０Ｂ）、１１−ホウ素（１１Ｂ）、１３−炭素（１３Ｃ）、１４−窒素（１４Ｎ）、１５−窒素（１５Ｎ）、１７−酸素（１７Ｏ）、１９−フッ素（１９Ｆ）、２３−ナトリウム（２３Ｎａ）、２５−マグネシウム（２５Ｍｇ）、２７−アルミニウム（２７Ａｌ）、２９−ケイ素（２９Ｓｉ）、３１−リン（３１Ｐ）、３９−カリウム（３９Ｋ）、４１−カリウム（４１Ｋ）、４３−カルシウム（４３Ｃａ）、１２９−キセノン（１２９Ｘｅ）が挙げられる。 本発明に用いる常磁性化合物の標識に利用する常磁性金属としては、例えば第１遷移金属（鉄（Ｆｅ）、マンガン（Ｍｎ）、チタン（Ｔｉ）、バナジウム（Ｖ）、クロム（Ｃｒ）など）、ランタノイド（ガドリニウム（Ｇｄ）、テルビウム（Ｔｂ）、ジスプロシウム（Ｄｙ）など）、マグネシウム（Ｍｇ）、アルミニウム（Ａｌ）、ニオブ（Ｎｂ）、パラジウム（Ｐｄ）、タンタル（Ｔａ）、タングステン（Ｗ）、イリジウム（Ｉｒ）が挙げられる。 本発明においては、生体内に存在する酵素の作用により、非蛍光性化合物から蛍光性代謝物に変化する化合物、例えばＣＤＦＤＡ、dihydrofluorescein diacetate（Ｈ２ＦＤＡ）を用いることもできる。また、蛍光性化合物の標識に用いる蛍光性試薬には、近赤外領域の光を発光するものを含む。近赤外蛍光基としては、例えば、ＩＣＧ（インドシアニングリーン）などのインドシアニン色素、Ｃｙ７、ＤＹ７７６、ＤＹ７５０、Ａｌｅｘａ７９０、Ａｌｅｘａ７５０が挙げられ、これらの近赤外蛍光基を有するエステル化合物等を蛍光性化合物として用いることができる。 本発明の検査薬の投与経路としては、静脈内、皮内、皮下、経口、経粘膜、及び直腸投与などが挙げられる。 本発明の検査薬の投与形態としては、投与経路に適した剤形であれば、注射剤、液剤、錠剤等から適宜選択すればよく、本発明の作用及び効果を損なわない限り、薬学的に許容される担体、又は剤形によって当該技術分野において一般的に使用される添加剤を更に含んでもよい。添加剤として、例えば、着色剤、保存剤、風味剤、香り改善剤、呈味改善剤、甘味剤、又は安定剤、その他薬学的に許容される添加剤を含有することができる。 本発明の検査薬の投与量は、投与方法、投与する化合物ならびに患者の年齢、性別及び体重によって、適宜決定すればよい。 本発明の検査薬は、投与後、代謝機能を測定する組織に移行し、未代謝状態では当該組織から排出されにくいが、代謝により生じる放射性代謝物、蛍光性代謝物、常磁性代謝物又は磁気共鳴性代謝物は速やかにその組織から消失する（図１参照）。例えば、肝臓組織において、代謝機能が正常であれば、イメージング像は速やかに消失するが、肝臓組織において、代謝酵素の異常・機能低下があれば、イメージング像が長時間観察される（図２）。したがって、ｉｎ ｖｉｖｏで非侵襲的な方法により外部から代謝機能を測定することができる。 以下、実施例を挙げて本発明を更に具体的に説明するが、本発明の範囲は以下の実施例に限定されるものではない。 （実施例１） コラゲナーゼ還流法により調製したラット遊離肝細胞を２×１０６個／ｍＬになるように蒸留水に懸濁し、ホモジナイザーで機械的にホモジネートを調製した。このホモジネート２００μＬに対し、蒸留水で２０μＭの濃度に調製した5 (and 6)-carboxy-2’-7’-dichlorofluorescein diacetate（ＣＤＦＤＡ）を加え（終濃度１０μＭ）、３７℃で５分間インキュベーションした。４００μＬの氷冷１％Ｔｒｉｔｏｎを加えて反応を停止させ、高速遠心操作（１５０００ｒｐｍ、１０ｍｉｎ、４℃）により上清に含まれる5 (and 6)-carboxy-2’-7’-dichlorofluorescein（ＣＤＦ）及びＣＤＦＤＡを回収した。ＣＤＦの蛍光強度は蛍光プレートリーダーで測定した。９９℃で５分間熱変性させたホモジネートではＣＤＦの蛍光がほぼ観察されず、その蛍光強度は熱変性しなかった場合の約２％程度であった（図３）。このことからＣＤＦＤＡがラット肝細胞中に含まれる酵素により代謝され、ＣＤＦを含む蛍光物質が得られることがわかった。 このことにより、代謝酵素によって化学形が変化することにより初めて測定可能な信号（この場合は蛍光）を発し、その代謝物（この場合はＣＤＦという蛍光物質）が排出トランスポーターなどの作用により速やかに排出される場合、細胞外排出の律速段階は酵素反応であるため、その排出速度が代謝酵素活性を示すことになる。すなわち、サンドイッチ培養ラット肝細胞においては、顕微鏡下で蛍光物質は胆管腔に局在しており、観察される蛍光強度が酵素活性を反映している。また、肝臓や腎臓のように排出先が胆管腔や尿細管腔のように排泄系である場合には、イメージングにより、体外測定が容易になる。 前記の熱変性しなかった場合は肝臓組織の代謝機能が正常の場合に対応し、前記の熱変性させた場合は肝臓組織の代謝機能が異常であるときの典型例に対応する。 したがって、本発明の検査薬によれば、肝臓等の組織における代謝機能を測定できることがわかる。 （実施例２） 文献（Dunn, J., Yarmush, M., Koebe, H., & Tompkins, R.: Hepatocyte function and extracellular matrix geometry: long-term culture in a sandwich configuration. FASEB J., 3: 174-177, 1989）記載の方法に従い、ラット肝から遊離肝細胞を単離後、予めコラーゲンコートしておいた３５ｍｍプレートに播種した。細胞を接着させるために３７℃、５％ＣＯ２条件下で２〜６時間培養した後、Ｗｉｌｌｉａｍ’ｓ Ｅ ｍｅｄｉｕｍ（ＷＥＭ）へと培地を交換した。播種から２４時間後に培地をマトリゲル含有ＷＥＭへ交換し、細胞にマトリゲルを重層しサンドイッチ培養した。播種後４日後に実験に供した。敷石上に培養された細胞間隙にサンドイッチ培養ラット肝細胞（ＳＣＲＨ）特徴的な胆管腔の形成が促された。次に、細胞内で蛍光物質に代謝されるdihydrofluorescein diacetate（Ｈ２ＦＤＡ）１０μＭをサンドイッチ培養したラット肝細胞とインキュベートし（３７℃、ｐＨ７．４）、蛍光顕微鏡により胆管腔に蓄積される蛍光物質の蛍光強度を経時的に測定し、定量化した。Ｈ２ＦＤＡと胆汁酸トランスポーターＢＳＥＰ（Bile Salt Efflux Pump）の阻害剤であるトログリタゾン５０μＭを共存させた場合（図４、○）、非存在時（図４、●）で有意な蛍光が観察された６分以降１５分までの蛍光強度は非存在時（図４、●）と比較して有意に減少した。 肝細胞に取り込まれた後に代謝変化を受けて初めて蛍光を発するＨ２ＦＤＡを用いることにより、代謝酵素によって化学形が変化することにより初めて測定可能な信号（この場合は蛍光）を発し、その代謝物がトランスポーターなどの作用により速やかに排出される場合、細胞外排出の律速段階は酵素反応であるため、その排出速度が代謝酵素活性を示すことになり、肝臓や腎臓のように排出先が胆管腔や尿細管腔のように排泄系である場合には、イメージングにより、体外測定が可能になる。特に、Ｈ２ＦＤＡでは、実施例１とは異なって酵素によって生成する複数の蛍光代謝物の存在が確認されているが、特定の代謝酵素による代謝以降に複数の代謝物が存在しても、それらの代謝物のすべてがＢＳＥＰのようないずれかの排出トランスポーターの基質として速やかに細胞外に排出されれば、代謝酵素活性をイメージングできる。 （実施例３） ラット肝細胞内への蓄積を増加させるために脂溶性を高め、未代謝状態でも蛍光を持つように合成された加水分解酵素で構造変換する蛍光性化合物３０μＭをサンドイッチ培養したラット肝細胞に取込ませ、蛍光顕微鏡により胆管腔に蓄積される蛍光物質の蛍光強度を測定し、定量化した。前記蛍光性化合物と胆汁酸トランスポーターＢＳＥＰの阻害剤であるトログリタゾン５０μＭを共存させた場合（図５、○）、２４分までの蛍光強度は非存在時（図５、●）と比較して有意に減少した。 肝細胞に取り込まれた物質の胆管腔排泄を確認できる実験系であるサンドイッチ培養ラット肝細胞に対して、ここでは未代謝状態でも蛍光を発する加水分解酵素で構造変換する蛍光性化合物を用いた場合でも、それが肝細胞内の酵素（エステラーゼ）によって代謝されて化学形が変化し、その標識代謝物が排出トランスポーターなどの作用により速やかに排出される場合、細胞外排出の律速段階は酵素反応であるため、肝臓や腎臓のように排出先が胆管腔や尿細管腔のように排泄系である場合には、イメージングにより、体外測定が可能になる。このように、生成する代謝物がトランスポーターなどの作用により速やかに排出されれば、投与するプローブが代謝を受ける前から測定可能な信号（この場合は蛍光）を発していても、その排出速度が代謝酵素活性を示すことになるため、実施例１及び２のように代謝によって蛍光物質に変化する必要はなく、このイメージングに用いるプローブの標識には蛍光・発光体に加えて放射性化合物、例えば加水分解酵素で構造変換する放射性化合物を用いることも可能であり、放出される放射線をその種類に応じてＰＥＴやＳＰＥＣＴなどのカメラで体外検出し、標的組織を経時的にイメージングすることにより、非侵襲的に体深部の代謝酵素活性を測定できる。また同様に、標識に常磁性金属や磁気共鳴核種を用いることにより、ＭＲＩやＣＳＩ装置でそれらに由来するＭＲ信号を体外検出し、標的組織を経時的にイメージングすることにより、非侵襲的に体深部の代謝酵素活性を測定できる。 放射性カルボン酸エステルを用いた分子イメージングでは、肝臓組織において、代謝機能が正常であれば、イメージング像は速やかに消失するが、肝臓組織において、代謝酵素の異常・機能低下があれば、イメージング像が長時間観察される（図２）。 （実施例４）放射性天然アミノ酸のマウス体内分布動態と放射性代謝物の分析 放射性核種標識アミノ酸として、Ｌ−又はＤ−メチオニン（Ｌ−／Ｄ−Ｍｅｔ）の［Ｓ−ｍｅｔｈｙｌ−３Ｈ］標識体（Ｓ−Ｌ−／Ｄ−Ｍｅｔ；Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）と［１−ｃａｒｂｏｘｙｌ−１４Ｃ］標識体（１−Ｌ−／Ｄ−Ｍｅｔ；Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）を用い、ダブルトレーサー法により検討した。 ５週齢ｄｄＹ系雄性マウスにＳ−／１−Ｌ−Ｍｅｔ（Ｌ−Ｍｅｔ）又はＳ−／１−Ｄ−Ｍｅｔ（Ｄ−Ｍｅｔ）を尾静脈投与し、１０、３０、６０分後にマウスを心臓採血後に屠殺して、肝臓、胆嚢、十二指腸、膵臓、腎臓を摘出した。質重量を秤量した摘出臓器の一部にＳｏｌｖａｂｌｅ（Ｐａｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を加え、加温振透して溶解した後、液体シンチレーターＵｌｔｉｍａ Ｇｏｌｄ（Ｐａｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を加えて液体シンチレーションカウンター（Ａｌｏｋａ、ＬＳＣ−５１００）にて単位重量当たりの放射能集積率を算出した。 組織中放射性代謝物の評価には、［Ｓ−ｍｅｔｈｙｌ−１４Ｃ］−Ｌ−Ｍｅｔ（Ｓ−Ｌ−Ｍｅｔ；Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）又は［Ｓ−ｍｅｔｈｙｌ−１４Ｃ］−Ｄ−Ｍｅｔ（Ｓ−Ｄ−Ｍｅｔ；Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）を投与後１０分のマウスの肝臓、腎臓を摘出し、これらに重炭酸緩衝液を加えホモジナイズした後、最終濃度５％となるように１００％トリクロロ酢酸（Ｎａｃａｌａｉ ｔｅｓｑｕｅ）を加え、混和した。この沈殿画分をグラスフィルター（ＧＣ−５０、Ｔｏｙｏ）に捕集し、氷冷５％トリクロロ酢酸で洗浄した後、１５０℃、１時間加熱処理することによりタンパクを固定し、その放射能を測定したものをタンパク画分への組み込み率として評価した。また、前記のトリクロロ酢酸を加えたホモジネートを遠心分離し、その上清をシリカゲル薄層板（Ｍｅｒｃｋ社Ａｒｔ．５５５３）にスポット後、展開溶媒（ブタノール：酢酸：水＝４：１：１）で展開した。１４Ｃ専用イメージングプレート（ＢＡＳ−ＳＲ２０２５，Ｆｕｊｉ Ｆｉｌｍ）に露光後、ＢＡＳ５０００（Ｆｕｊｉ Ｆｉｌｍ）を用いて解析し、未変化体残存率から代謝物存在率を算出した。 図６にＳ−Ｌ−Ｍｅｔ又はＳ−Ｄ−Ｍｅｔ投与後１０分のマウスから摘出した代謝性組織である肝臓及び腎臓中の代謝物存在率を示す。Ｓ−Ｄ−Ｍｅｔを投与したマウス肝臓又は腎臓に存在する放射能は、約８０％が未変化体として存在していたのに対し、Ｓ−Ｌ−Ｍｅｔ投与マウスにおいては未変化体は約４０％以下しか存在しておらず、約２０〜５０％は放射性代謝物として存在していることを確認した。これら全く同じ分子構造を有する２種の光学異性体の相異は専ら酵素反応によるものであり、この傾向は標識部位が異なる１−Ｌ−／Ｄ−体でも同様である。 Ｓ−／１−Ｌ−Ｍｅｔ（Ｌ−Ｍｅｔ）及びＳ−／１−Ｄ−Ｍｅｔ（Ｄ−Ｍｅｔ）投与後１０、３０、６０分のマウス体内分布における血液、肝臓、胆嚢、十二指腸、膵臓、腎臓における単位重量当たりの集積率を表１に示した。 Ｌ−ＭｅｔはＤ−Ｍｅｔに比べて、投与後早期より顕著な肝臓集積を示し、その後の胆嚢移行を経て十二指腸に至る胆汁排泄が確認された。これらＬ−体のＤ−体との差異は、栄養素である天然アミノ酸Ｌ−Ｍｅｔは胆汁中には排泄されないことを考慮すると、図６に示した肝臓における放射性代謝物の有無の違いによるものである。肝臓におけるＬ−Ｍｅｔに特徴的な低分子代謝にメチル基転移反応が知られているが、特にＳ−ｍｅｔｈｙｌ基に標識部位を有するＳ−Ｌ−Ｍｅｔ（臨床ＰＥＴ製剤は１１Ｃ標識体）においては、放射性代謝物にメチル基受容体化合物が含まれており、イメージで検出し得るこの排泄速度がメチルトランスフェラーゼの酵素活性を示すことになる。 （実施例５）放射性ヨウ素標識放射性医薬品の放射性代謝物の分析 １２５Ｉ標識イオマゼニル（１２５Ｉ−ＩＭＺ（臨床ＰＥＴ製剤は１２３Ｉ標識体））は日本メジフィジックス社より提供を受けた。 １２５Ｉ−ＩＭＺの生理食塩溶液０．１ｍｌ（３７０ｋＢｑ）を体重約２５ｇのｄｄＹ系雄性マウスに尾静脈より投与し、１０分後にエーテル麻酔にて屠殺した。胆嚢より胆汁を採取した後、肝臓、胆嚢、腎臓を摘出した。 摘出臓器１００ｍｇを精秤し、Ｋｒｅｂｓ−Ｒｉｎｇｅｒリン酸緩衝溶液（ｐＨ７．４）９００μｌを加えて、超音波ホモジナイザーにてホモジナイズした。このホモジネートに最終濃度５％となるように１００％トリクロロ酢酸（Ｎａｃａｌａｉ ｔｅｓｑｕｅ）を加え、混和した。遠心分離（１５０００ｒｐｍ、５分間）した後、その上清を文献（吉村弘一，他：核医学，32: 1037-1043, 1995）記載の方法に従い、シリカゲル薄層クロマトグラフィー（Ｍｅｒｃｋ社Ａｒｔ．５５５３、展開溶媒；酢酸エチル：アセトン：アンモニア水（２８）＝９０：１０：１）にて分析した。胆嚢から採取した胆汁も全量をＫｒｅｂｓ−Ｒｉｎｇｅｒリン酸緩衝溶液（ｐＨ７．４）に混和し、同様にトリクロロ酢酸処理後、遠心分離した上清を分析した。投与前の未変化体の結果とともに図７に示す。 マウス生体内の肝臓において、１２５Ｉ−ＩＭＺは容易に代謝され、肝細胞中には未変化体は僅かに検出されるのみで、原点付近にとどまる水溶性放射性代謝物を含むいくつかの放射性代謝物が検出された。また、肝臓から排泄された胆汁中には未変化の１２５Ｉ−ＩＭＺはほとんど検出されず、その大部分が原点付近の水溶性放射性代謝物であった。 以上のように、肝臓に取り込まれた１２５Ｉ−ＩＭＺは代謝酵素によって代謝され、生成した水溶性放射性代謝物が胆汁中に排泄されていることがわかった。これらの傾向を利用し、個体差、病態の変化による胆汁排泄される放射性代謝物の量の相違を分子イメージングによる肝臓からの消失速度あるいは胆汁排泄の速度を測定することにより、薬物代謝機能を測定が可能であることが確認された。 生体内に存在する酵素の作用により組織から排出されやすい放射性代謝物、蛍光性代謝物、常磁性代謝物又は磁気共鳴性代謝物に変化する化合物を含有する、分子イメージングにより代謝機能を測定するための検査薬。 前記化合物が、放射性化合物であって、生体内に存在する酵素の作用により組織から排出されやすい放射性代謝物に変化する放射性化合物である請求項１記載の検査薬。 前記化合物が、蛍光性化合物であって、生体内に存在する酵素の作用により組織から排出されやすい蛍光性代謝物に変化する蛍光性化合物である請求項１記載の検査薬。 前記化合物が、常磁性化合物であって、生体内に存在する酵素の作用により組織から排出されやすい常磁性代謝物に変化する常磁性化合物である請求項１記載の検査薬。 前記化合物が、磁気共鳴性化合物であって、生体内に存在する酵素の作用により組織から排出されやすい磁気共鳴性代謝物に変化する磁気共鳴性化合物である請求項１記載の検査薬。 【課題】非侵襲的に生体内組織における代謝機能を測定できる検査薬を提供する。【解決手段】生体内に存在する酵素の作用により組織から排出されやすい放射性代謝物、蛍光性代謝物、常磁性代謝物又は磁気共鳴性代謝物に変化する化合物を含有する、分子イメージングにより代謝機能を測定するための検査薬。【選択図】図１