生命科学関連特許情報
| タイトル： | 公開特許公報(A)_汚れ判定方法 |
| 出願番号： | 2011104120 |
| 年次： | 2012 |
| IPC分類： | C12Q 1/04,C12Q 1/66,C12Q 1/32 |
特許情報キャッシュ
涌井 健 武廣 絵里子 JP 2012231765 公開特許公報(A) 20121129 2011104120 20110509 汚れ判定方法 鹿島建設株式会社 000001373 長谷川 芳樹 100088155 黒木 義樹 100113435 木元 克輔 100126653 涌井 健 武廣 絵里子 C12Q 1/04 20060101AFI20121102BHJP C12Q 1/66 20060101ALN20121102BHJP C12Q 1/32 20060101ALN20121102BHJP JPC12Q1/04C12Q1/66C12Q1/32 3 5 ＯＬ 15 4B063 4B063QA18 4B063QQ05 4B063QQ07 4B063QQ20 4B063QQ63 4B063QQ64 4B063QQ92 4B063QR04 4B063QR57 4B063QS10 4B063QS36 4B063QX01 本発明は、建築物の屋内の汚れ判定方法に関する。より詳細には、屋内の汚れがカビか否かを現場で判定する方法に関する。 建築物の屋内の汚れが微生物、特にカビであった場合、直ちに対策を施さなければ汚染が拡大し、除去が困難になる場合がある。また、汚れが微生物を原因とするものであるか否かにより、汚れを除去する対策が異なる。このため、汚れが微生物によるものか否かを判定する必要がある。 一般的に、検査対象から採取したサンプル中の微生物について調査する場合、サンプルを培地に接種し、数日間の培養が行われる。例えば、特許文献１には、耐熱性を有するメンブレンフィルターを介して空気を吸引することにより空気中に浮遊する微生物を該メンブレンフィルター上に捕捉し、該メンブレンフィルター上に捕捉した微生物を培地上で培養した後、培養された微生物中のＡＴＰをバイオルミネッセンス反応により検出する微生物の迅速測定方法が開示されている。特開２００８−１６１１４３号公報 しかしながら、サンプルを培地に接種して培養する工程は、最低５日間程度の日数を要する。このため、サンプルを採取してから判定結果が出るまで最短でも１週間程度必要である。このため、従来の方法で建築物の屋内の汚れがカビか否かを判定した場合、判定に時間がかかり、汚れがカビによるものであった場合には対応が遅れ、汚れの除去が困難になる場合があった。 また、培養において、培地の選択が適切でなかった場合には、サンプル中に微生物が存在していたにもかかわらずコロニーとして検出することができず、本来検出されるべき微生物が検出されず、誤判定してしまう場合があった。 そこで本発明は、屋内の汚れがカビか否かを、現場で迅速に正しく判定する方法を提供することを目的とする。 本発明は、屋内の汚れがカビか否かを現場で判定する方法であって、汚れからサンプルを採取するサンプル採取ステップと、サンプル中の補酵素の存在量を定量する定量ステップと、補酵素の存在量に基づいて汚れがカビか否かを判定する判定ステップとを含む方法を提供する。 上記本発明の方法によれば、屋内の汚れがカビか否かの判定を、現場において短時間で行うことができる。このため、汚れの除去に適切な対策をその場で判断することができる。また、本発明の方法は、微生物を培養する工程を含まないため、培地の選択が不適切であることにより誤判定することがなく、正しい判定結果を得ることができる。 上記補酵素は、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰ）、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤＨ）及び還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰＨ）からなる群より選択される１種以上の化合物であることが好ましい。また、上記判定ステップにおいて、上記選択された化合物の合計の単位面積当たりの存在量が、所定値Ａ１未満の場合には、汚れはカビではないと判定し、所定値Ａ２以上の場合には、汚れはカビであると判定し、所定値Ａ１以上Ａ２未満の場合には、サンプルの顕微鏡観察により、汚れがカビであるか否かを判定することが好ましい。 補酵素として、ＮＡＤ、ＮＡＤＰ、ＮＡＤＨ又はＮＡＤＰＨを測定対象とすることにより、迅速に定量することができる。また、上記判定ステップにおいて、上記選択された化合物の合計の単位面積当たりの存在量に基づいて判定することにより、汚れがカビか否かを迅速に判定することができる。さらに、ＮＡＤ、ＮＡＤＰ、ＮＡＤＨ又はＮＡＤＰＨの存在量に基づいて、汚れがカビであるか否かを判定することが困難な場合であっても、顕微鏡観察を行うことにより、現場でカビか否かを判定することができる。 上記補酵素は、アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）であってもよい。また、上記判定ステップにおいて、ＡＴＰの単位面積当たりの存在量が、所定値Ｂ１未満の場合には、汚れはカビではないと判定し、所定値Ｂ２以上の場合には、汚れはカビであると判定し、所定値Ｂ１以上Ｂ２未満の場合には、サンプルの顕微鏡観察により、汚れがカビであるか否かを判定することが好ましい。 補酵素としてＡＴＰを測定対象とすることにより、迅速に定量することができる。また、上記判定ステップにおいて、ＡＴＰの単位面積当たりの存在量に応じて汚れがカビであるか否かを判定することにより、汚れがカビか否かを迅速に判定することができる。さらに、ＡＴＰの存在量に基づいて、汚れがカビであるか判定することが困難な場合であっても、顕微鏡観察を行うことにより、現場でカビか否かを判定することができる。 本発明により、屋内の汚れがカビか否かを、現場で迅速に正しく判定する方法を提供することができる。テンプレートの一実施形態を示す概略図である。テンプレート貼付用伸縮ポールの一実施形態を示す概略図である。サンプル採取用伸縮ポールの一実施形態を示す概略図である。試験紙の一実施形態を示す概略図である。ＮＡＤ法の一実施形態を示すフローチャートである。ＡＴＰ法の一実施形態を示すフローチャートである。実験例２の結果を示すグラフである。Ａ：ルシパックＩＩ、Ｂ：ルシフェール２５０プラス、Ｃ：ルシフェール２５０プラス及びルシフェールＡＴＰ消去試薬セット、Ｄ：ルシフェールＨＳセットからＡＴＰ消去試薬を省いたもの、Ｅ：ルシフェールＨＳセット。実験例３の結果を示すグラフである。実験例６の結果を示すグラフである。 以下、場合により図面を参照しながら、好適な実施形態を説明する。なお、図面の説明において同一要素には同一符号を付し、重複する説明を省略する。また、図面は理解を容易にするため一部を誇張して描いており、寸法比率は説明のものとは必ずしも一致しない。 屋内の汚れがカビか否かを現場で判定する方法は、汚れからサンプルを採取するサンプル採取ステップと、サンプル中の補酵素を定量する定量ステップと、補酵素の存在量に基づいて汚れがカビか否かを判定する判定ステップとを含む。 まず、サンプル採取ステップについて説明する。一実施形態において、屋内の壁、天井、床等の汚れからサンプルを採取する。サンプルは一定の面積から採取することが好ましい。これにより、後述する定量ステップで得られる補酵素の存在量を、単位面積当たりの値として基準値と比較することが容易になる。 一定の面積からサンプルを採取するためには、ふきとり検査枠又はテンプレートと呼ばれるサンプル回収用の枠を使用することが好ましい。テンプレートとは、中央部が切り取られた紙製の枠であり、検査対象表面に押し付けてサンプル採取範囲を特定し、枠で特定された領域からサンプルを採取するものであり、一般に市販されている。市販のテンプレートは１００ｃｍ２の開口部を有しており、これを検査対象の表面に押しつけながらサンプル採取範囲を特定し、特定された領域内を脱脂綿等で拭き取ることにより、サンプルを採取することが一般的である。しかしながら、発明者らが検討した結果、通常の１００ｃｍ２のテンプレートでは、本実施形態の判定方法には広すぎることが明らかとなった。後述する判定ステップにおける判断を、より正確に行うためには、テンプレートの開口部は１〜２５ｃｍ２であることが好ましく、１〜９ｃｍ２であることがより好ましく、４ｃｍ２が特に好ましい。 図１はテンプレートの一実施形態を示す概略図である。図１に示すように、テンプレート１００は、サンプル採取範囲を特定する開口部２０、テンプレート回収のための穴３０を備えており、折り目４０に沿って折り曲げられている。穴３０の周囲は補強されている。穴３０は、サンプル採取後に、検査対象表面からテンプレートを回収するときに用いる。手の届かない場所にテンプレートを貼付した場合であっても、例えば、伸縮ポールの先端に取りつけたフックを穴３０に引っかけて引きはがすことにより、テンプレートを測定対象の表面から回収することが容易になる。テンプレート１００の面１０は全面が粘着層である。開口部２０は、１〜２５ｃｍ２の面積を有する。 市販のテンプレートは粘着層を有していないため、片手で押さえつけながらサンプルを採取する必要がある。このため、手の届く範囲でしかサンプルの採取ができなかった。また、天井面等の手の届かないところでは脚立などの使用が必要であった。これに対し、上記実施形態のテンプレートを使用することにより、テンプレートを片手で押さえつける必要がなくなるため、手の届かない場所からもサンプル採取を行うことが容易となる。手の届かない場所でサンプル採取を行うために、以下に説明する伸縮ポール等を用いてテンプレートを検査対象表面に貼付することができる。 図２は、テンプレート貼付用伸縮ポールの一実施形態を示す概略図である。テンプレート貼付用伸縮ポール２００は、伸縮ポール２１０、伸縮ポール２１０の先端に固定バンド２１５により固定された治具２２０を備えている。治具２２０の面２３０にテンプレートをセットし、これを検査対象の表面に押しつけてテンプレートを貼付する。これにより、手の届かない場所であっても容易にテンプレートを貼付することができる。 一実施形態において、サンプル採取には、滅菌された綿棒を用いることができる。サンプルを効率よく採取するために、サンプル採取時には、綿棒を滅菌水で湿らせることが好ましい。滅菌水の代わりにリン酸緩衝食塩水などの滅菌された適切な液体を用いてもよい。正確な判定を行うために、綿棒を用いてテンプレートで特定された範囲をまんべんなくなぞり、検査対象表面のサンプルを採取する。手の届かない範囲からサンプルを採取する場合には、伸縮ポールの先端に綿棒を取り付けた、サンプル採取用伸縮ポールを使用する。図３は、サンプル採取用伸縮ポールの一実施形態を示す概略図である。サンプル採取用伸縮ポール３００は、伸縮ポール２１０、伸縮ポール２１０の先端に固定バンド２１５により固定された治具３１０を備えている。治具３１０に綿棒３２０を接続し、テンプレートで特定された範囲からサンプルを採取する。 一実施形態において、サンプル採取パッドを用いてサンプルを採取することができる。図４は、サンプル採取パッドを備える試験紙の一実施形態を示す概略図である。試験紙４００は、支持体４１０の表面に接着されたサンプル採取パッド４２０を備える。サンプル採取パッド４２０の面４３０は、１〜５ｃｍ２の面積を有する。検査対象の表面に、サンプル採取パッド４２０を一定の回数押しつけることによりサンプルを採取する。サンプル採取パッド４２０は、サンプル採取位置が重ならないように、毎回異なる位置に押しつけることが好ましい。これにより、テンプレートを使用しなくても一定の面積からサンプルを採取することができる。サンプルを効率よく採取するために、サンプル採取時には、サンプル採取パッド４２０を滅菌水で湿らせることが好ましい。滅菌水の代わりにリン酸緩衝食塩水などの滅菌された適切な液体を用いてもよい。例えば、１．６８ｃｍ２の面積を有するサンプル採取パッドを使用する場合、サンプル採取のために検査対象表面に押しつける回数は、１〜３０回であることが好ましく、５〜２０回であることがより好ましい。 次に、定量ステップについて説明する。定量ステップにおいて、上記のサンプル採取ステップで採取したサンプル中の補酵素の存在量を定量する。 一実施形態において、補酵素は、ＮＡＤ、ＮＡＤＰ、ＮＡＤＨ及びＮＡＤＰＨからなる群より選択される１種以上の化合物である。以下、補酵素がＮＡＤ、ＮＡＤＰ、ＮＡＤＨ又はＮＡＤＰＨである判定方法を「ＮＡＤ法」という場合がある。 ＮＡＤ又はＮＡＤＰに、β−Ｄ−グルコース及びグルコース−１−デヒドロゲナーゼを反応させると、Ｄ−グルコノラクトン、ＮＡＤＨ及びＮＡＤＰＨが生成される。続いて、上記の反応により生成されたＮＡＤＨ及びＮＡＤＰＨ、並びにサンプル中に存在していたＮＡＤＨ及びＮＡＤＰＨに、テトラゾリウム塩及びジアフォラーゼを作用させると、テトラゾリウム塩がホルマザン塩に変換される。このホルマザン塩の発色に基づいて、サンプル中のＮＡＤ、ＮＡＤＰ、ＮＡＤＨ及びＮＡＤＰＨの合計の存在量を定量することができる。したがって、本実施形態において、サンプルに、β−Ｄ−グルコース、グルコース−１−デヒドロゲナーゼ、テトラゾリウム塩及びジアフォラーゼを反応させることにより、サンプル中のＮＡＤ、ＮＡＤＰ、ＮＡＤＨ及びＮＡＤＰＨの合計の存在量に対応したホルマザン塩の発色が得られる。なお、この場合において、グルコース−１−デヒドロゲナーゼは、ＮＡＤとＮＡＤＰとの双方を基質とするものである。また、ジアフォラーゼは、ＮＡＤＨとＮＡＤＰＨの双方を基質とするものである。 本実施形態において、サンプルは、上記のサンプル採取パッドを用いて採取する。続いて、サンプルを採取したパッドにβ−Ｄ−グルコース、グルコース−１−デヒドロゲナーゼ、テトラゾリウム塩及びジアフォラーゼの溶液を滴下することにより、上記の反応を行い、サンプル中のＮＡＤ、ＮＡＤＰ、ＮＡＤＨ及びＮＡＤＰＨの合計の存在量に応じたホルマザン塩の発色を得、発色強度に基づいてＮＡＤ、ＮＡＤＰ、ＮＡＤＨ及びＮＡＤＰＨの合計の存在量を定量する。サンプル中にＮＡＤ、ＮＡＤＰ、ＮＡＤＨ又はＮＡＤＰＨが存在しない場合にはホルマザン塩の発色は得られない。定量は色差計を用いて行ってもよいが、予め段階希釈した既知濃度のＮＡＤ、ＮＡＤＰ、ＮＡＤＨ又はＮＡＤＰＨを用いて上記の反応により発色させて検量線を得ておき、目視によって定量することもできる。本実施形態によるＮＡＤ、ＮＡＤＰ、ＮＡＤＨ及びＮＡＤＰＨの合計の存在量の定量は、現場で簡便に短時間で行うことができる。 上記実施形態において、グルコース−１−デヒドロゲナーゼは、ＮＡＤのみを基質とするものであってもよい。また、ジアフォラーゼは、ＮＡＤＨのみを基質とするものであってもよい。この場合、補酵素として、サンプル中のＮＡＤ及びＮＡＤＨの合計の存在量が定量される。 また、上記実施形態において、グルコース−１−デヒドロゲナーゼは、ＮＡＤＰのみを基質とするものであってもよい。また、ジアフォラーゼは、ＮＡＤＰＨのみを基質とするものであってもよい。この場合、補酵素として、サンプル中のＮＡＤＰ及びＮＡＤＰＨの合計の存在量が定量される。 上記のＮＡＤ、ＮＡＤＰ、ＮＡＤＨ及びＮＡＤＰＨの合計の存在量の定量は、例えば、ＨＹ−ＲｉＳＥ（商品名、メルク社）を用いて実施することができる。 一実施形態において、補酵素はＡＴＰである。以下、補酵素がＡＴＰである判定方法を「ＡＴＰ法」という場合がある。発光基質であるルシフェリンは、ＡＴＰ及びマグネシウムイオンの存在下で、ルシフェラーゼによってオキシルシフェリンに変換されて発光する。この発光量はＡＴＰ量に比例する。 本実施形態において、サンプルは、上記のテンプレート及び滅菌された綿棒を用いて採取する。続いて、サンプルを採取した綿棒を、ルシフェリン、マグネシウムイオン及びルシフェラーゼを含む反応液に浸して撹拌する。この結果、サンプル中のＡＴＰの存在量に応じた発光が得られる。サンプル中にＡＴＰが存在しない場合には発光は得られない。発光量はルミノメーターを用いて測定することができる。ルミノメーターは現場に持ち込み可能なものであり、小型のポータブルタイプのものが好ましく、例えばルミテスターＣ−１１０（商品名、キッコーマン株式会社）が好適に用いられる。予め段階希釈した既知濃度のＡＴＰを用いて上記の反応を行い発光させて、検量線を得ておくことが好ましい。検量線を用いて、発光量からサンプル中のＡＴＰの存在量を求めることができる。本実施形態によるＡＴＰの定量は、現場で簡便に短時間で行うことができる。 上記のＡＴＰの定量は、例えば、ＡＴＰ定量用キットである、ルシパックＩＩ（商品名、キッコーマン株式会社）を用いて実施することができる。 ＮＡＤやＡＴＰは、微生物の代謝物である。したがって、上記実施形態によりサンプルからＮＡＤやＡＴＰが検出された場合、検査対象表面に微生物が存在していると判断することができる。この微生物はカビに限られない。しかしながら、屋内において、カビ以外の微生物が大量に発生して汚れを形成することは非常に稀である。そのため、ほとんどの場合において、上記実施形態によりサンプルからＮＡＤやＡＴＰが検出された場合、検査対象表面にカビが存在していると判断することができる。 次に、判定ステップについて説明する。判定ステップでは、上記定量ステップで定量したサンプル中の補酵素の存在量に基づいて、屋内の汚れがカビか否かを現場で判定する。 ＮＡＤ法の場合、サンプル中のＮＡＤ、ＮＡＤＰ、ＮＡＤＨ及びＮＡＤＰＨの合計の存在量が、検査対象表面の単位面積当たり、所定値Ａ１未満の場合には、汚れはカビではないと判定し、所定値Ａ２以上の場合には、汚れはカビであると判定する。一方、所定値Ａ１以上Ａ２未満の場合には、確定的に判定することが困難な場合がある。このため、サンプルの顕微鏡観察により、汚れがカビであるか否かを判定する。顕微鏡は現場に持ち込み可能な、小型のポータブルタイプのものであることが好ましい。顕微鏡で観察した結果、胞子や菌糸の存在が認められた場合には、カビであると判定できる。 一実施形態において、所定値Ａ１、Ａ２は次の通りである。ＮＡＤ定量キットとして、ＨＹ−ＲｉＳＥ（商品名、メルク社）を使用し、検査対象表面に２０回押しつけることによりサンプルを回収して発色させた場合、発色量を目視で判定し、発色の度合いに応じて次のように０〜３段階に分類する。ほとんど発色が見られないものを第０段階と分類する。周辺部が薄い紫色であり、わずかに変色しているものを第１段階と分類する。中央部が黒ずんだ紫色に変色し、周辺部も紫色に変色しているものを第２段階と分類する。中央部がはっきりとした濃い紫色に変色し、周辺も紫色に変色しているものを第３段階と分類する。数値として表現する場合には、第０段階を０、第１段階を１、第２段階を２、第３段階を３と表現する。本実施形態において、所定値Ａ１は１（第１段階）であり、所定値Ａ２は３（第３段階）である。 ＡＴＰ法の場合、サンプル中のＡＴＰの存在量が、検査対象表面の単位面積当たり、所定値Ｂ１未満の場合には、汚れはカビではないと判定し、所定値Ｂ２以上の場合には、汚れはカビであると判定する。一方、サンプル中のＡＴＰの存在量が、所定値Ｂ１以上Ｂ２未満の場合には、確定的に判定することが困難な場合がある。このため、サンプルの顕微鏡観察により、汚れがカビであるか否かを判定する。顕微鏡で観察した結果、胞子や菌糸の存在が認められた場合には、カビであると判定できる。 一実施形態において、所定値Ｂ１、Ｂ２は次の通りである。後述する実験例１の通りに校正された、ルミテスターＣ−１１０（商品名、キッコーマン株式会社）を使用する。検査対象表面４ｃｍ２から回収したサンプルを、ＡＴＰ定量キットであるルシパックＩＩ（商品名、キッコーマン株式会社）を使用して発光させ、ルミテスターＣ−１１０（商品名、キッコーマン株式会社）で発光量を測定する。本実施形態において、所定値Ｂ１は１００であり、所定値Ｂ２は１００００である。 顕微鏡としては、例えば小型の倒立型顕微鏡（ＤＳＭ−１型、ダイコーサイエンス株式会社）を使用できる。顕微鏡の接眼レンズの代わりに、パソコンに接続されたデジタルカメラシステムを接続し、顕微鏡画像をノートパソコンのディスプレイ等の携帯型のモニタ上に表示させることが好ましい。デジタルカメラシステムとしては、例えばＭｏｔｉｃａｍ２０００（商品名、株式会社島津理化）が使用できる。これにより、複数の人間で顕微鏡画像を確認することができる。顕微鏡の倍率は２０〜１２００倍が好ましい。 顕微鏡でサンプルを観察する場合、ＮＡＤ法又はＡＴＰ法で使用したサンプルの一部をスライドガラスに滴下して観察してもよく、検査対象表面から新たに顕微鏡観察用のサンプルを採取してもよい。新たにサンプル採取する場合、検査対象表面が剥離しにくい素材である場合には、検査対象表面にセロハンテープを貼付及び剥離することによりセロハンテープの粘着面にサンプルを付着させてもよい。この場合、サンプルが付着したセロハンテープをスライドガラスに貼付して顕微鏡観察することができる。また、検査対象表面が剥離しやすい素材からなり、セロハンテープでサンプル採取すると表面を破損してしまう恐れがある場合には、滅菌水等で湿らせた綿棒で検査対象表面をなぞってサンプル採取し、スライドガラス上に塗布して顕微鏡観察することができる。 上記の定量ステップにおいて、サンプル中にＮＡＤやＡＴＰ等の補酵素の存在が検出された場合には、サンプル中に生きたカビが存在すると判断できる。一方、顕微鏡による観察では、観察された胞子や菌糸の形態から、カビの生死の判断も可能である。 本方法により検出可能なカビとしては、例えば、アスペルギルス属、アルテルナリア属、ケトミウム属、クラドスポリウム属、ユーロチウム属、ペニシリウム属、フサリウム属、リゾプス属、トリコデルマ属に属するものが例示できる。 図５は、ＮＡＤ法の一実施形態を示すフローチャートである。本実施形態において、まず、検査対象表面からサンプルを採取し、サンプル中のＮＡＤ、ＮＡＤＰ、ＮＡＤＨ及びＮＡＤＰＨの合計の存在量を定量する（ステップＳ１）。定量した結果、ＮＡＤ、ＮＡＤＰ、ＮＡＤＨ及びＮＡＤＰＨの合計の存在量が、検査対象表面の単位面積当たり所定値Ａ１未満の場合には（ステップＳ２のＡ）、汚れはカビではないと判定し（ステップＳ３）、所定値Ａ２以上の場合には（ステップＳ２のＢ）、汚れはカビであると判定する（ステップＳ４）。一方、サンプル中のＮＡＤ、ＮＡＤＰ、ＮＡＤＨ及びＮＡＤＰＨの合計の存在量が、検査対象表面の単位面積当たり所定値Ａ１以上Ａ２未満の場合には（ステップＳ２のＣ）、顕微鏡観察を行う（ステップＳ５）。顕微鏡観察の結果、サンプル中に胞子や菌糸の存在が確認された場合には（ステップＳ６のＹＥＳ）、汚れはカビであると判定し（ステップＳ４）、胞子や菌糸の存在が確認されなかった場合には（ステップＳ６のＮＯ）、汚れはカビではないと判定する（ステップＳ３）。 図６は、ＡＴＰ法の一実施形態を示すフローチャートである。本実施形態において、検査対象表面からサンプルを採取し、サンプル中のＡＴＰの存在量を定量する（ステップＳ１）。定量した結果、ＡＴＰの存在量が、検査対象表面の単位面積当たり所定値Ｂ１未満の場合には（ステップＳ２のＡ）、汚れはカビではないと判定し（ステップＳ３）、所定値Ｂ２以上の場合には（ステップＳ２のＢ）、汚れはカビであると判定する（ステップＳ４）。一方、サンプル中のＡＴＰの存在量が、検査対象表面の単位面積当たり所定値Ｂ１以上Ｂ２未満の場合には（ステップＳ２のＣ）、顕微鏡観察を行う（ステップＳ５）。顕微鏡観察の結果、サンプル中に胞子や菌糸の存在が確認された場合には（ステップＳ６のＹＥＳ）、汚れはカビであると判定し（ステップＳ４）、胞子や菌糸の存在が確認されなかった場合には（ステップＳ６のＮＯ）、汚れはカビではないと判定する（ステップＳ３）。 以下、本発明の実施例を示して、本発明を更に具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではなく、本発明の技術的思想を逸脱しない範囲での種々の変更が可能である。（実験例１）（検量線の作成） ルミテスターＣ−１１０（商品名、キッコーマン株式会社）を用いて、ＡＴＰの発光量の検量線を作成した。まず、ＡＴＰの濃度が、０、２×１０−１２、２×１０−１１、２×１０−１０、２×１０−９、２×１０−８、２×１０−７（Ｍ）である標準溶液を調製した。続いて、ＡＴＰ定量キットであるルシフェール２５０プラス（商品名、キッコーマン株式会社）を用いて、取扱説明書にしたがってこれらの標準溶液を発光させた。続いて、ルミテスターＣ−１１０（商品名、キッコーマン株式会社）を用いて各溶液の発光量（相対値）を測定した。測定結果を表１に示す。（実験例２）（サンプル中のＡＴＰに基づいた発光量の測定） 複数の市販のＡＴＰ定量用キットを使用して、既知濃度に懸濁したアスペルギルス・ニガーの胞子をサンプルに用い、サンプル中のＡＴＰに基づいた発光量を測定した。まず、アスペルギルス・ニガーの胞子を滅菌水で懸濁し、１×１０４〜１×１０７個／ｍｌの範囲内で数段階に段階希釈した溶液を調製し、カビのサンプルとした。 続いて、複数のＡＴＰ定量用キットを使用して、各サンプル中のＡＴＰの存在量に応じた発光を得、発光量を測定した。キットには、ルシパックＩＩ、ルシフェール２５０プラス、ルシフェール２５０プラス及びルシフェールＡＴＰ消去試薬セット、ルシフェールＨＳセットからＡＴＰ消去試薬を省いたもの、ルシフェールＨＳセット（いずれも商品名、キッコーマン株式会社）を使用し、操作は取扱説明書にしたがって行った。実験例１で使用したルミテスターＣ−１１０（商品名、キッコーマン株式会社）を用いて発光量を測定した。 図７は、ＡＴＰの存在量に基づいた発光量をプロットしたグラフである。発光量として、ルミテスターＣ−１１０（商品名、キッコーマン株式会社）で測定された値を使用した。グラフ中Ａ〜Ｅは、それぞれ次のキットを用いた結果である。Ａ：ルシパックＩＩ、Ｂ：ルシフェール２５０プラス、Ｃ：ルシフェール２５０プラス及びルシフェールＡＴＰ消去試薬セット、Ｄ：ルシフェールＨＳセットからＡＴＰ消去試薬を省いたもの、Ｅ：ルシフェールＨＳセット。（実験例３）（サンプル中のＮＡＤに基づいた発色） 市販のＮＡＤ定量用キットを使用して、既知濃度に懸濁したアスペルギルス・ニガーの胞子をサンプルに用い、サンプル中のＮＡＤの存在量に基づいたホルマザン塩の発色を得た。まず、アスペルギルス・ニガーの胞子を滅菌水で懸濁し、１×１０４個／ｍｌから１×１０７個／ｍｌの濃度となるように段階希釈して、カビのサンプルとした。 続いて、ＮＡＤ定量用キットを使用して、各サンプル中のＮＡＤの存在量に応じた発色を得た。ＮＡＤ定量キットとして、ＨＹ−ＲｉＳＥ（商品名、メルク社）を使用した。発色量を目視で判定し、発色の度合いに応じて次のように０〜３段階に分類した。ほとんど発色が見られないものを第０段階と分類した。周辺部が薄い紫色であり、わずかに変色しているものを第１段階と分類した。中央部が黒ずんだ紫色に変色し、周辺部も紫色に変色しているものを第２段階と分類した。中央部がはっきりとした濃い紫色に変色し、周辺も紫色に変色しているものを第３段階と分類した。 図８は、各サンプル中のＮＡＤの存在量に基づいた発色量をプロットしたグラフである。発色量は、発色の度合いに応じた分類で、第０段階のものを０、第１段階のものを１、第２段階のものを２、第３段階のものを３と表記した。（実験例４）（ＡＴＰ法による判定） まず、屋内の汚れからサンプルを採取した。２×２ｃｍの開口部を有するテンプレートを壁面に貼付した。テンプレートとして、全面粘着型付せん（商品名ＳＳＺ−３３ＲＹ、住友スリーエム株式会社）の一部を２×２ｃｍサイズに切り抜いたものを使用した。続いて、ＡＴＰ定量キットであるルシパックＩＩ（商品名、キッコーマン株式会社）の綿棒を滅菌水で濡らし、この綿棒を用いてテンプレートで特定された領域をまんべんなくなぞり、サンプルを採取した。 続いて、サンプルが付着した綿棒をルシパックＩＩの本体に戻し、取扱説明書にしたがって本体を数回振り下ろし、ルシパックＩＩの試薬を測定チューブに落とした。次に、溶け残った試薬をよく振り混ぜて溶解し、測定チューブを本体から取り外し、実験例１で使用したルミテスターＣ−１１０（商品名、キッコーマン株式会社）を用いて発光量を測定した。上記のＡＴＰの存在量の定量を、様々な屋内の汚れについて行った。（顕微鏡観察による判定） ＡＴＰ法で測定した検査対象表面とほぼ同一の領域からサンプルを採取し、顕微鏡で観察した。まず、２×２ｃｍの開口部を有するテンプレートを壁面に貼付した。テンプレートとして、全面粘着型付せん（商品名ＳＳＺ−３３ＲＹ、住友スリーエム株式会社）の一部を２×２ｃｍサイズに切り抜いたものを使用した。続いて、滅菌し、リン酸緩衝食塩水で湿らせた綿棒を用いて、テンプレートで特定された領域をまんべんなくなぞり、サンプルを採取した。綿棒として、ふきふきチェックＩＩ（商品名、栄研化学株式会社）を使用した。続いて、サンプルが付着した綿棒をスライドガラス上に塗りつけ、顕微鏡で観察した。顕微鏡としては、小型倒立型顕微鏡（ＤＳＭ−１型、ダイコーサイエンス株式会社）に、デジタルカメラシステム（Ｍｏｔｉｃａｍ２０００、商品名、株式会社島津理化）を接続したものを使用した。顕微鏡画像をノートパソコンのディスプレイ上に表示させた。胞子や菌糸が認められた場合には屋内の汚れはカビであると判定した。 検査対象表面において、ルミテスターＣ−１１０（商品名、キッコーマン株式会社）で測定した場合の発光量の計測値が、１００未満のサンプルにおいては、顕微鏡観察しても胞子や菌糸の存在が確認されなかった。また、発光量の計測値が１００００以上のサンプルにおいては、顕微鏡観察によっても胞子や菌糸の存在が確認された。一方、発光量の計測値が１００以上１００００未満のサンプルにおいては、胞子や菌糸の存在が認められる場合と認められない場合があった。表２に、ＡＴＰの存在量に基づいた発光量の計測値及び顕微鏡観察による判定の結果を示す。表中の数値は、該当したサンプル数を意味する。 上記のＡＴＰ法による判定及び顕微鏡観察による判定は、検査対象の汚れが存在する現場において短時間で行うことができた。（実験例５）（ＮＡＤ法による判定） ＮＡＤ定量キットとして、ＨＹ−ＲｉＳＥ（商品名、メルク社）を使用した。取扱説明書にしたがって、ＨＹ−ＲｉＳＥの試験紙のパッド部分を湿潤液で湿らせ、検査対象である屋内の汚れに２０回押しつけてサンプルを採取した。パッド部分の面積は１．６８ｃｍ２であった。続いて、サンプルが付着したパッド部分に基質液及び酵素液を滴下し、３０分間暗所で放置した。続いて、ホルマザン塩の発色量に基づいて、実験例３と同様に、目視によりサンプル中のＮＡＤ、ＮＡＤＰ、ＮＡＤＨ及びＮＡＤＰＨの合計の存在量を０〜３段階に分類することにより定量した。上記の定量を、様々な屋内の汚れについて行った。（顕微鏡観察による判定） 実験例３と同様にして、ＮＡＤ法で測定した検査対象表面とほぼ同一の領域からサンプルを採取し、顕微鏡で観察した。胞子や菌糸が認められた場合には屋内の汚れはカビであると判定した。検査対象表面において、ＮＡＤ、ＮＡＤＰ、ＮＡＤＨ及びＮＡＤＰＨの合計の存在量が、第１段階未満のサンプルにおいては、顕微鏡観察しても胞子や菌糸の存在が確認されなかった。また、ＮＡＤ、ＮＡＤＰ、ＮＡＤＨ及びＮＡＤＰＨの合計の存在量が第３段階以上のサンプルにおいては、顕微鏡観察によっても胞子や菌糸の存在が確認された。一方、ＮＡＤ、ＮＡＤＰ、ＮＡＤＨ及びＮＡＤＰＨの合計の存在量が、第１段階以上第３段階未満のサンプルにおいては、胞子や菌糸の存在が認められる場合と認められない場合があった。表３に、ＮＡＤ、ＮＡＤＰ、ＮＡＤＨ及びＮＡＤＰＨの合計の存在量に基づいた発色量及び顕微鏡観察による判定の結果を示す。表中の数値は、該当したサンプル数を意味する。 上記のＮＡＤ法による判定及び顕微鏡観察による判定は、検査対象の汚れが存在する現場において短時間で行うことができた。（実験例６）（ＮＡＤ法とＡＴＰ法との比較） 実験例３及び４でカビか否かを判定した屋内の汚れの各サンプルにおいて、定量されたＮＡＤ、ＮＡＤＰ、ＮＡＤＨ及びＮＡＤＰＨの合計の存在量とＡＴＰの存在量との関係を検討した。図９は、各サンプルにおける、ＮＡＤ、ＮＡＤＰ、ＮＡＤＨ及びＮＡＤＰＨの合計の存在量と、ＡＴＰの存在量とをプロットしたグラフである。両者の結果には良好な相関が認められた。 本発明により、屋内の汚れがカビか否かを、現場で迅速に正しく判定する方法を提供することができる。 １０，２３０，４３０…面、２０…開口部、３０…穴、４０…折り目、１００…テンプレート、２００…テンプレート貼付用伸縮ポール、２１０…伸縮ポール、２１５…固定バンド、２２０，３１０…治具、３００…サンプル採取用伸縮ポール、３２０…綿棒、４００…試験紙、４１０…支持体、４２０…サンプル採取パッド。 屋内の汚れがカビか否かを現場で判定する方法であって、 汚れからサンプルを採取するサンプル採取ステップと、 サンプル中の補酵素の存在量を定量する定量ステップと、 補酵素の存在量に基づいて汚れがカビか否かを判定する判定ステップと を含む方法。 前記補酵素は、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド及び還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸からなる群より選択される１種以上の化合物であり、 前記判定ステップにおいて、前記補酵素の単位面積当たりの存在量が、 所定値Ａ１未満の場合には、前記汚れはカビではないと判定し、 所定値Ａ２以上の場合には、前記汚れはカビであると判定し、 所定値Ａ１以上Ａ２未満の場合には、前記サンプルの顕微鏡観察により前記汚れがカビであるか否かを判定する、請求項１に記載の方法。 前記補酵素はアデノシン三リン酸であり、 前記判定ステップにおいて、アデノシン三リン酸の単位面積当たりの存在量が、 所定値Ｂ１未満の場合には、前記汚れはカビではないと判定し、 所定値Ｂ２以上の場合には、前記汚れはカビであると判定し、 所定値Ｂ１以上Ｂ２未満の場合には、前記サンプルの顕微鏡観察により前記汚れがカビであるか否かを判定する、請求項１に記載の方法。 【課題】屋内の汚れがカビか否かを、現場で迅速に正しく判定する方法を提供する。【解決手段】屋内の汚れがカビか否かを現場で判定する方法であって、汚れからサンプルを採取するサンプル採取ステップと、サンプル中の補酵素の存在量を定量する定量ステップと、補酵素の存在量に基づいて汚れがカビか否かを判定する判定ステップとを含む方法。【選択図】図５