生命科学関連特許情報
| タイトル： | 公開特許公報(A)_メチオニナーゼ阻害剤 |
| 出願番号： | 2009117975 |
| 年次： | 2010 |
| IPC分類： | A61K 8/97,A61Q 11/00,A61K 36/18,A61P 43/00,A61P 1/02,C12N 9/99,A23L 1/30,A23L 2/52,A23K 1/16,A23K 1/18 |
特許情報キャッシュ
國方 敏夫 岩城 完三 福田 恵温 JP 2010265215 公開特許公報(A) 20101125 2009117975 20090514 メチオニナーゼ阻害剤 株式会社林原生物化学研究所 000155908 國方 敏夫 岩城 完三 福田 恵温 A61K 8/97 20060101AFI20101029BHJP A61Q 11/00 20060101ALI20101029BHJP A61K 36/18 20060101ALI20101029BHJP A61P 43/00 20060101ALI20101029BHJP A61P 1/02 20060101ALI20101029BHJP C12N 9/99 20060101ALI20101029BHJP A23L 1/30 20060101ALI20101029BHJP A23L 2/52 20060101ALI20101029BHJP A23K 1/16 20060101ALI20101029BHJP A23K 1/18 20060101ALI20101029BHJP JPA61K8/97A61Q11/00A61K35/78 CA61P43/00 111A61P1/02C12N9/99A23L1/30 BA23L2/00 FA23K1/16 304CA23K1/18 A 7 ＯＬ 22 特許法第３０条第１項適用申請有り 平成２１年４月１０日 特定非営利活動法人日本歯周病学会発行の「日本歯周病学会会誌（第５１巻 春季特別号）−２００９春季学術大会（第５２回）プログラムおよび講演抄録集−」に発表 2B005 2B150 4B017 4B018 4C083 4C088 2B005AA05 2B150AA06 2B150DD42 2B150DD57 4B017LC03 4B017LG15 4B018LB01 4B018LB08 4B018MD48 4B018MD61 4B018ME14 4B018MF01 4B018MF02 4C083AA072 4C083AA111 4C083AA112 4C083AB292 4C083AB322 4C083AB472 4C083AC102 4C083AC122 4C083AC132 4C083AC442 4C083AC492 4C083AC582 4C083AC712 4C083AC742 4C083AC782 4C083AC842 4C083AC852 4C083AC862 4C083AC932 4C083AD212 4C083AD222 4C083AD242 4C083AD272 4C083AD352 4C083AD532 4C083AD642 4C083BB55 4C083CC41 4C083DD08 4C083DD12 4C083DD14 4C083DD15 4C083DD16 4C083DD22 4C083DD23 4C083DD27 4C083EE34 4C088AB12 4C088AB15 4C088AB43 4C088AB46 4C088AB59 4C088BA09 4C088BA19 4C088CA03 4C088MA02 4C088MA52 4C088NA05 4C088NA14 4C088ZA67 4C088ZC20 本発明は、口臭の原因物質であるメチルメルカプタンの産生に関与する細菌由来のメチオニナーゼの阻害剤（以下、「メチオニナーゼ阻害剤」という。）に関するものである。 口臭は、口腔より出される悪臭の総称で、その主要成分は硫化水素、メチルメルカプタン及びジメチルスルフィド等の揮発性硫黄化合物といわれており、なかでもメチルメルカプタンは口臭と強い相関関係が認められる。これらは、食物残渣、口腔内の剥離上皮細胞及び唾液蛋白質等含まれる含硫アミノ酸を口腔内細菌が代謝、分解することにより発生する。メチルメルカプタンは、口腔内での蛋白質合成の抑制、コラーゲン合成の抑制及び口腔内粘膜の透過性の亢進等、人体に対して有害な作用を有しているので、メチルメルカプタンの生成抑制は、口臭の低減だけでなく、健康維持の上でも重要な課題である。 従来、口臭除去は、歯磨剤、洗口剤等の外用剤や、ガム、キャンディ、口中清涼フィルム等の食品が利用されてきた。これらの製品の中には口臭除去の目的のために、銅クロロフィリンナトリウムのような悪臭成分に対する直接的な消臭成分が配合されていることが多く、メチルメルカプタンに化学的に反応する消臭成分としては緑茶（例えば、特許文献１参照）、延命草（例えば、特許文献２参照）やラズベリー（例えば、特許文献３参照）等も提案されている。また、外用剤では、抗菌成分を配合している製品も数多く存在する。 口臭の主原因であるメチルメルカプタンは、フゾバクテリウム ヌクレイタム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｎｕｃｌｅａｔｕｍ）やポルフィロモナス ジンジバリス（Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ）等の口腔内細菌が持つ菌体内酵素のメチオニナーゼにより、含硫アミノ酸のＬ−メチオニンから生成する。近年、このメチオニナーゼの活性（以下、単に「メチオニナーゼ」という場合がある。）を阻害して、口臭の原因となるメチルメルカプタンの生成を抑制する試みがなされている。ヒトには、メチオニナーゼは存在しないので、メチオニナーゼの阻害によりメチルメルカプタンの発生を抑制し、口臭の発生を抑制する方法は、人体に有害な影響を与えない、安全でかつ効果的な口臭の抑制方法である。 現在まで、メチオニナーゼ阻害剤としてトマト、アセンヤク、キラヤ樹皮、カラホオ、ホオノキ、アカメガシワ、クワ、アイスランドゴケ、グァバ、ホアハウンド、ガラナ、オオバコ、アルカネット、アケビ、クコ、カゴソウ、オレガノ、フェンネル、ハス、キンカン、緑茶やシソ等の天然物由来の抽出成分が提案されており（例えば、特許文献４及び５参照。）、これらが、口腔内細菌のポルフィロモナス ジンジバリスによるメチルメルカプタン産生を抑制することが明らかになっている。しかしながら、口臭抑制を目的とするメチオニナーゼ阻害剤は、長期間継続的に使用する必要があるので、単一の有効成分だけでは、十分な効果が得られない場合や、有効成分に特有の味や臭いのために、人によっては長期間の摂取の継続を拒絶する場合があるので、摂取しても、安全で、かつ、十分な効果が得られる新規メチオニナーゼ阻害剤の開発が望まれている。 一方、藍草は、藍染め用染料のインディゴを生成するインジカンを含む含藍植物とよばれる草木で、蓼藍、琉球藍（キツネノマゴ科）、蝦夷藍（アブラナ科）、山藍（トウダイグサ科）、インド藍（マメ科）等がある。日本等では、蓼藍は染料の調製に用いられるだけでなく、その葉及び果実には有用な生理活性成分が含まれているとされ、その葉及び果実を陽乾して得られる藍葉及び藍実は、古来、生薬として用いられている。また、近年、藍草抽出物のもつ、抗腫瘍活性、抗ウイルス活性、抗菌活性、抗アレルギー活性等の作用を期待した飲食品、化粧品、医薬品等が提案されている（例えば、特許文献６乃至特許文献９参照）。特公昭５８−１８０９８号公報特許第３２３３７５９号公報特公平５−３６０６１号公報特開２００２−３３５３号公報特開２００５−１６２６９７号公報特開２００１−３１５８１号公報特開２００４−１８９７３２号公報国際公開ＷＯ ２００３／０３５０９１号パンフレット国際公開ＷＯ ２００８／０６２８６１号パンフレット 本発明は、人体に有害な影響がなく、安心して使用できる、安全性の高い植物抽出物を有効成分とするメチオニナーゼ阻害剤を提供することを課題とする。 本発明者等は、上記課題を解決するために、古来より生薬や食品として利用されている安全性の高い植物に注目し、口腔内細菌の持つメチオニナーゼに対して阻害作用を有する抽出物を検索したところ、藍草抽出物が、強いメチオニナーゼ阻害活性を有することを見出し、本発明を完成した。すなわち、本発明は、藍草抽出物を有効成分とするメチオニナーゼ阻害剤を主な構成とする。 本発明のメチオニナーゼ阻害剤は、メチルメルカプタンの産生を抑制する作用を有するので、経口用組成物として口腔内で使用することにより、口臭を低減し、口腔内環境を改善することができる。また、本発明のメチオニナーゼ阻害剤の有効成分の藍草抽出物は、古くより食経験があり、長期間、安全に使用することができる。 本発明で使用する「藍草」とは、藍染め用の染料の調製に主要な役割を果たすインジカンを含む、いわゆる、含藍植物をいい、具体的には、蓼藍（タデ科）、琉球藍（キツネノマゴ科）、蝦夷藍（ウォード；アブラナ科）、山藍（トウダイグサ科）、インド藍（マメ科）を挙げることができ、他にもキク科、モクセイ科、ラン科等に属する植物であってもよい（以下、本明細書ではこれらの含藍植物を総称して「藍草」という場合がある。）。なかでも、タデ科に属する１年生の植物「蓼藍」（ポリゴナム ティンクトリウム ロウア：Ｐｏｌｙｇｏｎｕｍ ｔｉｎｃｔｏｒｉｕｍ Ｌｏｕｒ）は、入手しやすく、特有の抗菌成分であるトリプタンスリンを豊富に含んでいることから、口腔内の細菌数を低減できるので、口臭抑制を含む口腔内の環境改善に使用するには望ましい。 本発明で使用する藍草は、その起源や栽培方法に特に制限はなく、天然に自生する藍草でも、栽培されているものでもよく、これらを常法により育種して得られる変異株等でもよく、また、藍草を、組織培養、カルス培養、細胞培養等により得ることのできる培養物であってもよい。植物体を抽出の原料として用いる場合、その植物体の一部又は全部を用いることができる。また、これらの原料は新鮮な、すなわち、水分を含む状態であっても、凍結品であっても、或いは、乾燥させた状態であっても、これらの混合物であってもよい。取り扱いの容易さの点では、乾燥物が望ましい。 本発明で使用する藍草抽出物は、藍草の植物体の全部或いはその一部に溶媒を加えて、食品工業、化粧品工業や医薬品工業等において通常一般に行われる抽出法により調製すればよい。なお、藍草抽出物の製造には、上記以外にも、藍草の搾汁物を利用することも、この搾汁物と抽出液とを混合して利用することも、さらには疎水性の有機溶媒抽出液を使用することもできる。また、溶媒抽出の前に、上記原料を、食品工業、化粧品工業や医薬品工業等において通常一般に用いられる、細断、破砕、磨砕、粉砕、圧搾、発酵、乾燥、冷凍等の１種又は２種以上を適宜組み合わせた、物理的及び／又は化学的前処理を施すことにより、藍草の細断物、破砕物、磨砕物、粉砕物、圧搾物、発酵物、乾燥物、或いは、凍結物とし、これらの何れか１種又は２種以上を抽出用の原料として使用することも随意である。また、細断物、破砕物、磨砕物、粉砕物、圧搾物、発酵物、乾燥物、或いは、凍結物をそのままで、又は、抽出物と共に、本発明のメチオニナーゼ阻害剤の有効成分として使用してもよい。 本発明で使用する藍草抽出物を調製するための溶媒としては、水性溶媒（例えば水、酸性又は塩基性の水性溶媒等）、アルコール類（例えば、メタノール、無水エタノール、エタノール等の低級アルコール、多価アルコール）、アセトン等のケトン類、酢酸エチル等のエステル類等、グリセリン、プロピレングリコールの１種又は２種以上を適宜混合して使用することができる。なかでも、安全性の点からは、水が望ましく、水を含む混合溶媒（以下、本明細書では、藍草の溶媒による抽出液を総称して、「藍草抽出物」という場合がある。）も望ましい。混合溶媒としては、水とエタノールの組み合わせが特に望ましく、通常は、エタノールの濃度が、７０質量％以下のものが好ましく、６０質量％以下（以下、本明細書では、特に断らない限り「質量％」を「％」と表記する。）のものが特に好ましい。また、適宜、酸、アルカリ、又は緩衝剤等により抽出溶媒を所望のｐＨに調整することも随意である。抽出は、通常は、ｐＨ２．０乃至ｐＨ１３．０の範囲で行われ、ｐＨ４．０乃至ｐＨ１０．０の範囲が好ましく、ｐＨ４．０乃至ｐＨ７．５の範囲が特に望ましい。 この藍草抽出物の調製には、以上の如き抽出溶媒を、前述の原料に対して適量使用すればよく、通常、質量比で０．１乃至３０倍量、望ましくは０．５倍量乃至１０倍量を添加し、必要に応じて、撹拌処理、加熱処理、加圧処理、超音波処理等を施し抽出した後、濾過、遠心分離、デカンテーション等の適宜の方法で、液体部分と残渣に分け、液体部分を採取して藍草抽出物を調製することができる。また、残渣にさらに繰返し同様の抽出処理を施し、採取されるそれぞれの液体部分を合一して抽出物を得ることも随意である。また原料及び残渣に、２回以上の抽出処理を施す場合、それぞれ異なる抽出溶媒を用いて所望の液体部分のみを採取したり、これらを合一して、藍草抽出物とすることも随意である。この溶媒による抽出工程は、必要とする成分が抽出できる時間であれば特に制限はなく、藍草の粉砕の程度や抽出用の溶媒の温度にもよるが、通常、１分乃至１２０時間程度行われ、５分乃至４８時間程度が望ましい。 また、これらの藍草抽出物を調製する際に、澱の発生や褐変を抑制したり、異臭の発生や、微生物の増殖抑制等を目的として、後述の、界面活性剤、防腐剤（抗菌剤）、保湿剤、増粘剤、水溶性高分子、抗酸化剤、キレート剤、色素、香料、ｐＨ調整剤、Ｌ−アスコルビン酸やその誘導体を含むビタミン類、添加剤から選ばれる１種又は２種以上を加えることもできる。また、これらの成分の添加時期や添加量は、本発明の効果を妨げない限り、特に制限はなく、抽出工程の任意の時期に添加すればよい。 このようにして抽出して調製した藍草抽出物は、そのままで、さらに、藍草の有する生理作用効果を向上させるために、必要に応じて、通常の食品工業、化粧品工業、医薬品工業等において慣用の方法、例えば、遠心分離、真空濃縮、逆浸透膜濃縮、限外濾過、精密濾過等の濾過や濃縮処理を適宜組み合わせて施し、その有効成分含量を高めた藍草抽出物として利用できる。また、これらの液状の抽出物を、そのままで、或いは、澱粉部分分解物等の粉末化基剤等と混合し、脱水して粉末化することも随意である（例えば特許文献９参照）。なお、疎水性有機溶媒抽出液を使用してこれを粉末化する場合には、これに水と、必要に応じて乳化剤を加えて抽出物を水に懸濁及び／又は溶解した後、澱粉部分分解物等の粉末化基剤と混合、撹拌して、上記方法により、乾燥して粉末化することもできる。また、当該液状の抽出物をその使用目的に応じて精製し、その含有成分であるところのポリフェノール、アルカロイド、テルペノイド、ステロイド、フェノール類、色素、糖質、蛋白質、アミノ酸、核酸、ペプチド、脂質等の１種又は２種以上の含有比率を増加又は低減したり、さらに、これらを粉末化することも随意である。目的とする成分の種類にもよるが、精製手段は、例えば、濾過、濃縮、遠心分離、溶媒分別、分別沈澱、透析、疎水性クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、吸着クロマトグラフィー、親和性クロマトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィー及び／又はイオン交換クロマトグラフィー等から適宜の方法が選ばれる。また、限外濾過や精密濾過等の処理は、藍草の有用成分を低減することなく、澱等の固形分、澱の発生やアレルギーの原因となる高分子画分を除去し、澄明な液状の藍草抽出物を得るために使用することもできる。本発明の藍草抽出物は、メチオニナーゼ阻害活性の強さやメチオニナーゼ活性を持つ口腔内の微生物に対する抗菌性の強さの点から、ポリフェノールを５０μｇ／ｍＬ以上含有するものが望ましい。 本発明のメチオニナーゼ阻害剤は、上記方法によって調製した藍草抽出物をそのままで、又は、本発明の効果を妨げない範囲で、生理学的、製剤学的に許容される成分や、飲食品、化粧品、医薬部外品、医薬品、飼料、餌料、或いは、ペットフード等に配合することのできる適宜の成分を１種以上添加混合して、経口用組成物の形態で使用することができる。なお、本発明のメチオニナーゼ阻害剤の経口用組成物の形態とは、化粧品、医薬品、医薬部外品として口腔内に適用される外用剤、ドリンク剤、トローチ剤等の医薬品、医薬部外品、及び、飲食品をいい、動物やペットに使用するものを含む。 本発明のメチオニナーゼ阻害剤は、藍草抽出物を、阻害剤の総質量に対して、固形物換算で、約０．０１％以上、望ましくは約０．１％以上、より望ましくは０．２％乃至７０％、特に望ましくは０．１％乃至３０％の範囲で配合すればよい。なお、本発明のメチオニナーゼ阻害剤を飲食品の形態で使用する場合には、特に嗜好性の面も考慮すると約０．０１乃至５％、望ましくは約０．１乃至３％の割合になるように配合するのが好適である。 本発明のメチオニナーゼ阻害剤に、藍草抽出物と共に配合できる適宜の成分としては、具体的には、例えば、水、アルコール類、油成分、界面活性剤、防腐剤、抗菌剤、香料、保湿剤、増粘剤、水溶性高分子、ｐＨ調整剤、発泡剤、粉体、還元性糖質、非還元性糖質、糖アルコール、高甘味度甘味料、水溶性多糖類、有機酸、無機酸、塩類、乳化剤、酸化防止剤、キレート作用を有する物質、着色料、着香料、保存料、酸味料、旨味料、甘味料、安定剤、増量剤、アルコール類、水溶性高分子、ビタミン類やその誘導体、アミノ酸類、生理活性物質、抗炎症剤、医薬品・医薬部外品・化粧品・食品用の添加剤、医薬用・医薬部外品用の有効成分等を挙げることができる。また、藍草抽出物以外の口臭抑制効果を有する成分と併用することも有利に実施できる。 本発明のメチオニナーゼ阻害剤に配合できる藍草抽出物以外の口臭抑制効果を有する成分としては、具体的には、トマト、アセンヤク、キラヤ樹皮、カラホオ、ホオノキ、アカメガシワ、クワ、アイスランドゴケ、グァバ、ホアハウンド、ガラナ、オオバコ、アルカネット、アケビ、クコ、カゴソウ、オレガノ、フェンネル、ハス、キンカン、緑茶、シソ、カンゾウ、ケイヒ、チョウジ、ウイキョウ、プロポリス等の天然物由来の抽出成分、塩化セチルピリジニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、塩化デカリニウム、クロルヘキシジン類、トリクロサン塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、塩酸クロルヘキシジン、グルコン酸クロルヘキシジン、イソプロピルメチルフェノール、トリクロサン、ヒノキチオール等の抗菌成分、銅クロロフィリンナトリウム、グルコン酸銅等の銅の有機酸又無機酸の塩、鉄クロロフィリンナトリウム、グルコン酸亜鉛等の消臭成分、イソプロピルメチルフェノール、ヒノキチオール、シクロデキストリン、環状四糖、α，α−トレハロースやその糖質誘導体などの非還元性糖質、ヘスペリジン、ルチンやそれらの誘導体などのビタミンＰ類等を例示することができる。口臭抑制効果の強さや安全性を考慮すると天然物由来成分、銅クロロフィリンナトリウム、グルコン酸亜鉛、鉄クロロフィリンナトリウム、非還元性糖質及び／又はビタミンＰ類が望ましく、天然物由来成分、銅クロロフィリンナトリウム、環状四糖、ビタミンＰ類が特に望ましい。これらの成分のメチオニナーゼ阻害剤への配合量は、本発明のメチオニナーゼ阻害剤の有効成分である藍草抽出物と相加的又は相乗的に作用して、口腔内のエチルメルカプタン量を効果的に低減できる量であれば特に制限はなく、通常、メチオニナーゼ阻害剤の総質量に対して、固形物換算で、０．０１％以上、望ましくは０．１以上、より望ましくは１％以上、特に望ましくは１〜５％配合すればよい。 本発明のメチオニナーゼ阻害剤を飲食品の形態で利用する場合には、例えば、醤油、粉末醤油、味噌、粉末味噌、もろみ、ひしお、ふりかけ、マヨネーズ、ドレッシング、粉末すし酢、中華の素、ソース、ケチャップ、焼肉のタレ、カレーのルウ、シチューの素、スープの素、ダシの素、核酸系調味料、複合調味料、みりん、新みりん、テーブルシュガー、コーヒーシュガー等の調味料類や甘味料類を挙げることができる。 また、例えば、煎餅、あられ、おこし等の米菓類、求肥、もなか、餅、おはぎ、まんじゅう、かるかん、ういろう、あん類、羊羮、水羊羮、錦玉、きんつば、スィートポテト、ゼリー、ハバロア、カステラ、飴玉等の各種和菓子類、ビスケット、クッキー、クラッカー、パイ、シュークリーム、ワッフル、スポンジケーキ、ドーナツ、ペストリー類等の焼き菓子、プリン、バタークリーム、カスタードクリーム、チョコレート、チューインガム、ヌガー、ゼリービーンズ、グミキャンディ、キャラメル、マシュマロをはじめとするソフトキャンディ、ハードキャンディ、フォンダント、アイシング等の洋菓子類、スナック菓子類、シリアル類、センターリキッド菓子類、メレンゲ菓子類、食パン、ロールパン、アンパン、マフィン等のパン類、果実のシロップ漬、氷蜜等のシロップ類、フラワーペースト、ピーナッツペースト、フルーツペースト、スプレッド等のペースト類、ジャム、マーマレード、プレザーブ、シロップ漬、糖果、カット果実等の果実の加工品類、もやし、アルファルファ、ブロッコリースプラウト等の発芽野菜、青汁等の野菜ジュース、カット野菜、サラダ、野菜の煮物等の野菜の加工食品類、各種漬物やそれを製造するための浅漬けの素等の漬物の素類、白飯、おにぎり、おこわ、おかゆ、寿司飯、炊き込みご飯、α化米等の米飯類、豆乳、豆腐、高野豆腐、納豆等の豆の加工品類、うどん、和そば、ラーメン、パスタ等の麺類、お好み焼き、たこ焼き、鯛焼き、コロッケ、餃子、シュウマイ、春巻き、ハムやソーセージ等の畜肉加工品類、魚肉ハム、魚肉ソーセージ、かまぼこ、ちくわ、天ぷら等の魚肉加工品類、ウニ、イカの塩辛、酢こんぶ、さきするめ、ふぐのみりん干し、いくら、味付け海苔等の各種珍味類、焼肉、蒲焼き、団子、煎餅等の味付けに使用するタレ類、海苔、山菜、するめ、小魚、貝等で製造されるつくだ煮類、煮豆、ポテトサラダ、こんぶ巻等の惣菜食品、卵、オムレツ、卵焼き、茶碗蒸し等の卵加工品類、チーズ、ヨーグルト等の乳製品類、魚肉、畜肉、果実、野菜、或いは、これら飲食品の冷凍品、冷蔵品、チルド品、レトルト品、乾燥品、凍結乾燥品、さらには、野菜のビン詰類、缶詰類、プリンミックス、ホットケーキミックス、バッターミックス等のミックス類、即席しるこ、即席スープ等の即席食品、離乳食、治療食、ペプチド食品、清酒、合成酒、リキュール、洋酒、ビール、発泡酒等のアルコール飲料、お茶、紅茶、コーヒー、ココア、ジュース、炭酸飲料、乳酸飲料、乳酸菌飲料等の清涼飲料水等の各種飲食品の形態を挙げることができる。さらには、固状（錠剤、散剤、顆粒剤等）、ペースト状、シラップ状、液状、マイクロカプセル、カプセル等の形態の医薬品や医薬部外品であってもよく、動物やペット用の飼料、餌料、ペットフードの形態でも利用することもできる。 本発明のメチオニナーゼ阻害剤は外用剤の形態で使用することもできる。外用剤の形態としては、具体的には、粉歯磨、潤性歯磨、練歯磨、水歯磨、薬用歯磨、口中清涼剤、口中清涼フィルム、口腔内貼付剤（フィルム状の製剤を含む）、マウスウオッシュ、うがい薬等を例示することができる。 本発明のメチオニナーゼ阻害剤は、有効成分である藍草抽出物を、その組成や使用形態を勘案して、原料の段階から製品が完成するまでの工程で配合して製造すればよい。その方法としては、例えば、混和、混捏、溶解、融解、分散、懸濁、乳化、逆ミセル化、浸透、晶出、散布、塗布、付着、噴霧、被覆（コーティング）、注入、浸漬、固化、担持等の公知の１種又は２種以上の方法が適宜に選ばれる。このようにして調製された本発明のメチオニナーゼ阻害剤は、その形状を問わず、例えば、シラップ、マスキット、ペースト、粉末、固状、顆粒、錠剤等の何れの形状であってもよく、そのままで、又は、必要に応じて、増量剤、賦形剤、結合剤等と混合して、顆粒、球状、短棒状、板状（シート状、フィルム状を含む）、立方体、錠剤、カプセル剤等各種形状に成型して使用することも随意である。 本発明のメチオニナーゼ阻害剤は、藍草抽出物を有効成分として含有しているので、副作用もなく安全で、経口摂取により口腔内の微生物のもつメチオニナーゼの活性を阻害し、口腔内のメチルメルカプタンの生成を効果的に抑制することができるので、ヒト、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、サルなどの哺乳動物に口臭を抑制する目的で使用することができる。 本発明のメチオニナーゼ阻害剤は、メチルメルカプタン生成抑制剤、メチルメルカプタン低減剤、口臭抑制剤としても有利に使用できる。また、これらの効果がある旨を表示して販売することも有利に実施できる。 以下、実験により、本発明をさらに詳しく説明する。＜実験１＞＜微生物によるメチルメルカプタン産生に及ぼす藍草抽出物の影響＞ 後述の実施例１の方法で、市販の蓼藍乾燥葉３ｋｇに精製水３０ｋｇを加えて煮出して調製した抽出液を、さらに、濃縮して８ｋｇの藍草抽出物（固形分含量２７ｍｇ／ｍＬ、固形分換算でポリフェノールを７０ｍｇ／ｇ、トリプタンスリンを３４０μｇ／ｇ含有）を調製した。この、藍草抽出物を蒸留水で希釈して、藍草抽出物由来の固形分含量が表１に示す量となる５種類の試験試料を調製した（試験試料１乃至５）。ポルフィロモナス ジンジバリス（Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ）ＪＣＭ１２２５７株及びＡＴＣＣ３３２７７株（以下、各々「ＪＣＭ１２２５７株」、「ＡＴＣＣ３３２７７株」という場合がある。）を、各々、５μｇ／ｍＬのヘミン（ｈｅｍｉｎ）と０．５μｇ／ｍＬのビタミン Ｋ３とを含むブレインハートインヒュージョンブイヨン培地（日水製薬株式会社販売、以下、「ＢＨＩ培地」という）を使用して、３７℃で培養した。培養は、嫌気ジャーに酸素吸収・炭酸ガス発生剤（三菱ガス化学株式会社販売、商品名「アネロパック・ケンキ」）を組み合わせた嫌気条件下で、培養液の濁度（５５０ｎｍの吸光度（光路長１０ｍｍ）、以下「ＯＤ５５０」と略記する。）が約０．８になるまで行い、その後、遠心により（３，５００×ｇ、５分間）菌体を集菌した。この菌体を、５０ｍＭ塩化ナトリウムを含む４０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．６）で２回洗浄後、ＯＤ５５０が約０．３になるように同じ緩衝液に懸濁した。この菌体懸濁液を、１５ｍＬ容ポリプロピレンチューブ（ベクトン・ディッキンソン株式会社販売、商品名「Ｆａｌｃｏｎ ２０５９」）に８５０μＬずつ分注後、各チューブに１００ｍＭのＬ−メチオニン溶液５０μＬを加え、さらに、試験試料１乃至５の何れかを１００μＬ添加して、密栓後、３７℃で９０分間、インキュベートした。各チューブに、３Ｍリン酸溶液５００μＬを添加して反応を停止し、ヘッドスペース中のガス（以下、「ヘッドスペースガス」という。）に含まれるメチルメルカプタン量を、下記条件のガスクロマトグラフィーにより定量した。対照として、試験試料に替えて蒸留水を添加してインキュベートしたときの、ヘッドスペースガス中のメチルメルカプタン量を測定した。対照のメチルメルカプタン量を１００％として、各試験試料を添加した時のメチルメルカプタン量の相対値を求め、１００％から減じて、メチルメルカプタン生成抑制率（％）として表１に併せて示す。 ＜メチルメルカプタンの定量方法＞ 装置：ガスクロマトグラフィー装置（株式会社島津製作所販売、商品名「ガスクロマト グラフ ＧＣ−８ＡＰＦ」） カラム：β，β’−Ｏｘｙｄｉｐｒｏｐｉｏｎｉｔｒｉｌｅ（ジーエルサイエンス社販 売、ＯＤＰＮ、２５％ Ｕｎｉｐｏｒｔ ＨＰ、６０／８０ｍｅｓｈ）充填カラ ム（カラムサイズ：３．２ｍｍφ×３ｍ） キャリアガス：ヘリウムガス（流速：４０ｍＬ／分） カラム温度：９０℃ 注入口・検出器温度：１００℃ 検出器：水素炎イオン化検出器（株式会社島津製作所販売、商品名「ＧＣ−８ＡＰＦ」 ） データ解析：装置付属の解析機（株式会社島津製作所販売、商品名「Ｃ−Ｒ７Ａ クロ マトパック」） 定量：既知濃度のメチルメルカプタン標準液（和光純薬工業株式会社販売、１μｇ／ μＬベンゼン溶液）を使用して得られたピーク面積から作成した検量線に基づ き計算 表１から明らかなように、メチルメルカプタン生成抑制率は、試験試料中の藍草抽出物の固形分量に依存して上昇し、藍草抽出物を固形分換算で３３００μｇ／ｍＬ含む試験試料（試験試料５）を添加した場合には、抑制率が１００％となって、メチルメルカプタンの生成が完全に抑制された。なお、藍草抽出物には抗菌作用があるので、藍草抽出物によるメチルメルカプタン生成抑制がその抗菌作用によるのかどうかを確認するために、藍草抽出物の抗菌作用の主要な成分として知られているトリプタンスリン（例えば、特許文献８参照）を、各々の試験試料に含まれるのと同量（０．００６乃至６μｇ／ｍＬ）、ＡＴＣＣ３３２７７株の菌体懸濁液に添加して同様の試験を行ったところ、トリプタンスリンはメチルメルカプタンの生成を全く抑制しなかったので、藍草抽出物によるメチルメルカプタン生成抑制は、抗菌作用以外の作用によるものと判断した。＜実験２＞＜メチオニナーゼ活性に及ぼす藍草抽出物の影響＞ 実験１において、藍草抽出物によるメチルメルカプタン生成抑制が、抗菌作用以外の作用によることが判明したので、藍草抽出物のメチルメルカプタン生成抑制のメカニズムを調べるために、Ｌ−メチオニンからのメチルメルカプタン生成に関与するメチオニナーゼ活性に及ぼす藍草抽出物の影響を、特許文献５の００３９乃至００４２段落に開示された方法により、２−ケト酪酸の生成量を指標にしたメチオニナーゼ活性測定法により調べた。すなわち、実験１で使用したものと同じ藍草抽出物を、蒸留水で希釈して、藍草抽出物由来の固形分含量が表２に示す量となる５種類の試験試料を調製した（試験試料６乃至１０）。実験１と同様にポリフィロモナス ジンジバリスＪＣＭ１２２５７株を、実験１と同じ培養条件で、培地の濁度（ＯＤ５５０）が約０．８になるまで培養し、遠心して（３，５００×ｇ、５分間）菌体を集菌した。この菌体を、１ｍＭのＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）を含む１００ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．６）で、２回洗浄後、同じ緩衝液に再懸濁し、超音波ホモジナイザー（ＢＲＡＮＳＯＮ社製、商品名「ＳＯＮＩＦＩＥＲ ＣＥＬＬ ＤＩＳＲＵＰＴＯＲ １８５」、強度：ダイアル「３」）で４分間破砕処理後、遠心して（２０，０００×ｇ、２０分間）、上清を回収し、膜濾過により除菌してメチオニナーゼ粗酵素液とした。なお、このメチオニナーゼ粗酵素液８５０μＬと１００ｍＭのＬ−メチオニン溶液５０μＬとを１５ｍＬ容ポリプロピレンチューブに加えて混合し、密栓後、３７℃で９０分間インキュベートした場合、粗酵素液には微生物の菌体が含まれていないにもかかわらず実験１と同じ測定法により、ヘッドスペースガス中にメチルメルカプタンが検出されたので、当該粗酵素液にはメチオニナーゼ活性があると判断した。＜メチオニナーゼ活性の測定＞ 上記メチオニナーゼ粗酵素液を、１．５ｍＬ容ポリプロピレンチューブに４００μＬずつ分注し、各チューブに４００μＭのピリドキサル−５’リン酸１５μＬと３３０ｍＭのＬ−メチオニン１５μＬとを加えて混合し、さらに、試験試料６乃至１０の何れか１００μＬを添加して、３７℃で１０分間インキュベートした。各チューブに、７．５％ＴＣＡ（トリクロロ酢酸）溶液１００μＬを添加して反応を停止後、遠心して（２０，０００×ｇ、５分間）、上清を回収した。この上清５００μＬと、１Ｍの酢酸ナトリウム（ｐＨ５．２）に溶解した０．０５％の３−メチル−２−ベンゾチアゾリノンヒドラゾン溶液５００μＬとを混和し、５０℃で、３０分間インキュベート後、酵素反応の生成物である２−ケト酪酸を定量するために、反応液の吸光度（３３５ｎｍの吸光度（光路長１０ｍｍ）、以下「ＯＤ３３５」と略記する。）を測定した。対照として、試験試料１００μＬに替えて、蒸留水１００μＬを添加して反応を行い、試験試料を加えた場合と同様に、７．５％ＴＣＡを添加して反応を停止後、遠心して上清を回収し、０．０５％３−メチル−２−ベンゾチアゾリノンヒドラゾン溶液と混和して、５０℃で、３０分間インキュベート後、その吸光度を測定した。なお、試験試料は、吸光度の測定波長（ＯＤ３３５）付近に吸収波長を有するので、試験試料自体に由来する吸光度の影響を排除するために、メチオニナーゼ粗酵素液に替えて菌体の懸濁に使用した緩衝液４００μＬを使用して、これに、４００μＭピリドキサル−５’リン酸１５μＬと３３０ｍＭ Ｌ−メチオニン１５μＬとを加えて混合し、さらに、試験試料６乃至１０の何れか１００μＬを添加して、３７℃で１０分間インキュベートした。各チューブに、粗酵素液を加えて反応を行った場合と同様に、７．５％ＴＣＡを添加して反応を停止後、遠心して上清を回収し、０．０５％の３−メチル−２−ベンゾチアゾリノンヒドラゾン溶液と混和し、５０℃で、３０分間インキュベート後、その吸光度（ＯＤ３３５）を測定した（ブランク）。粗酵素液又は対照（蒸留水）を入れて反応した時の吸光度から、同じ試験試料又は対照を添加して、粗酵素液に替えて緩衝液を加えて反応したときの吸光度（ブランク）を減じて吸光度を補正し、各試験試料又は対照（蒸留水）を加えて酵素反応させた後の吸光度とした。対照の吸光度を１００％として、各試験試料を添加した時の吸光度の相対値を求め、１００％から減じて、メチオニナーゼ阻害率（％）として表２に併せて示す。なお、Ｌ−メチオニンにメチオニナーゼを作用させると、メチルメルカプタン、アンモニア及び２−ケト酪酸が生成するので、この反応生成物の中では安定性の高い２−ケト酪酸の生成量を測定してメチオニナーゼ活性の指標とした（特許文献５参照）。 表２から明らかなように、メチオニナーゼ阻害率は、試験試料に含まれる藍草抽出物の固形分量に依存して上昇し、藍草抽出物を固形分換算で２０００μｇ／ｍＬ含む試験試料（試験試料１０）を添加した場合には、メチオニナーゼ阻害率が９０．６％となったので、藍草抽出物によるメチルメルカプタンの生成抑制は、メチオニナーゼ阻害作用によるものと判断した。この結果は、藍草抽出物がメチオニナーゼ阻害剤として有用であることを物語っている。また、実験１の結果も考慮すると、藍草抽出物はポルフィロモナス ジンジバリスの生菌中のメチオニナーゼを阻害できることから、経口的に使用すれば、口腔内のメチルメルカプタン生成を抑制できるので、メチルメルカプタン生成抑制剤、口臭抑制剤としても有用であることを物語っている。＜実験３＞＜メチルメルカプタンに及ぼす藍草抽出物の直接的な影響＞ 藍草抽出物に、メチルメルカプタンと直接反応して、その悪臭を低減する作用があるかどうかを検討した。すなわち、実験１で使用したものと同じ藍草抽出物を、冷リン酸緩衝食塩水で希釈して、藍草抽出物由来の固形分を、１０ｍｇ／ｍＬ又は１００ｍｇ／ｍＬ含有する試験試料１１及び１２を調製した。試験試料の何れか１ｍＬに対して、メチルメルカプタン標準液（和光純薬工業株式会社販売、１μｇ／μＬベンゼン溶液）０．４μＬを添加、混合し、３７℃で５分間振とう後、ヘッドスペースガスを採取した。対照１として、試験試料に替えて、蒸留水１ｍＬを使用して、同様の処理を行い、ヘッドスペースガスを採取した。また、対照２として、口臭の消臭剤として汎用されている銅クロロフィリンナトリウム（和光純薬工業株式会社販売）を１０ｍｇ／ｍＬ含有する冷リン酸緩衝食塩水１ｍＬに対して、メチルメルカプタン標準液０．４μＬを添加、混合し、３７℃で５分間振とう後、ヘッドスペースガスを採取した。採取した各々のヘッドスペースガス１ｍＬに含まれるメチルメルカプタン量を、実験１と同じガスクロマトグラフィーにより測定した。対照１（蒸留水）にメチルメルカプタンを加えた場合に発生するヘッドスペースガス１ｍＬ中に含まれるメチルメルカプタン量を１００％として、試験試料又は対照２にメチルメルカプタンを加えた場合に発生するヘッドスペースガス中のメチルメルカプタン量の相対値を計算し、１００％から減じて、メチルメルカプタン低減率（％）として表３に示す。 表３から明らかなように、対照２（銅クロロフィリンナトリウムの１０ｍｇ／ｍＬ溶液）にメチルメルカプタンを加えた場合には、ヘッドスペースガス中のメチルメルカプタン低減率は６２．４％となった。これに対して、藍草抽出物を固形分換算で１０又は１００ｍｇ／ｍＬ含む試験試料（試験試料１１及び１２）にメチルメルカプタンを添加した場合には、何れの場合もその低減率は０％となった。実験２においてメチオニナーゼ阻害率が９０％以上となる量の藍草抽出物（固形分量換算で２０００μｇ／ｍＬ）の５倍又は５０倍量の藍草抽出物を含む試験試料においても、ヘッドスペースガス中のメチルメルカプタン量は対照１に比して全く低減されなかったので、藍草抽出物には、直接反応によるメチルメルカプタンの低減効果はないものと判断した。 ＜実験４＞ ＜微生物により産生されるメチルメルカプタン量に及ぼす藍草抽出物とそれ以外の成分を併用した場合の影響＞ 実験１で使用した藍抽草出物と、併用成分として銅クロロフィリンナトリウム、環状四糖（シクロニゲロシルニゲロース、株式会社林原生物化学研究所製造）、糖転移ヘスペリジン（株式会社林原商事販売、商品名「林原ヘスペリジンＳ」）、プロポリス抽出物（株式会社林原生物化学研究所製造）、含水結晶α，α−トレハロース（株式会社林原商事販売、商品名「トレハ」）の何れか１種とを、その含量が、固形物換算で、表４に示す量となるように蒸留水に溶解して、試験試料を調製した。また、併用成分の何れか１種を、その含量が、固形物換算で、表４に示す量となるように蒸留水に溶解して、試験試料を調製した。実験１と同様の方法で調製したＪＣＭ１２２５７株の菌体懸濁液を、５０ｍＭ塩化ナトリウムを含む４０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．６）で２回洗浄後、ＯＤ５５０が約０．３になるように同じ緩衝液に懸濁した。この菌体懸濁液を、実験１と同様に１５ｍＬ容ポリプロピレンチューブ（ベクトン・ディッキンソン株式会社販売、商品名「Ｆａｌｃｏｎ ２０５９」）に８５０μＬずつ分注後、各チューブに１００ｍＭのＬ−メチオニン溶液５０μＬを加え、さらに、試験試料の何れかを１００μＬ添加して、密栓後、３７℃で９０分間、インキュベートした。各チューブに、３Ｍリン酸溶液５００μＬを添加して反応を停止し、ヘッドスペース中のガス（以下、「ヘッドスペースガス」という。）に含まれるメチルメルカプタン量を、実験１と同一条件のガスクロマトグラフィーにより定量した。対照１として、試験試料に替えて蒸留水を添加してインキュベートしたときの、ヘッドスペースガス中のメチルメルカプタン量を測定した。また、対照２として、試験試料に替えて藍草抽出物を１０μｇ／ｍＬ含有する試料を添加してインキュベートしたときの、ヘッドスペースガス中のメチルメルカプタン量を測定した。対照１を添加した時のメチルメルカプタン量を１００％として、各試験試料又は対照２を添加した時のメチルメルカプタン量の相対値を求め、１００％から減じて、メチルメルカプタン生成抑制率（％）として表４に併せて示す。なお、プロポリス抽出物は、塊状のブラジル産プロポリスを粗砕して、９５容積％エタノール水溶液で、常法にしたがって抽出し、次いで残渣を少量の水で洗浄し、洗液を合わせて得られたプロポリス粗抽出物含有８０容積％エタノール（無水物換算で、固形分約２０％含有）水溶液に、水を加えてエタノール濃度を５０容積％に低減して、５０℃に１時間保ち、プロポリス中の有効成分を含有する上層と粘着性沈殿物の下層を形成させ、室温で一夜放置し、この上層を分離し採取したプロポリス抽出物を使用した。当該プロポリス抽出物は、無水物換算で、固形分を１２５ｍｇ／ｍｌ（エタノール濃度４３．５％）含有し、フラボノイドを９２ｍｇ／ｇ、アルテピリンＣを８６ｍｇ／ｇ含有していた。 表４から明らかなように、藍草抽出物のみを含有する試料を添加した場合（対照２）には、蒸留水を添加した場合（対照１）に比して、メチルメルカプタン生成抑制率が２９．８％となった。また、併用成分として使用した銅クロロフィリンナトリウム、環状四糖、糖転移ヘスペリジン、プロポリス抽出液、又は、α，α−トレハロースのみを含有する試験試料を添加した場合には、各々、その添加量に依存して、対照１に比してヘッドスペースガス中のメチルメルカプタンの生成が抑制された。これに対して、藍草抽出物と、銅クロロフィリンナトリウム、環状四糖、糖転移ヘスペリジン、プロポリス抽出液、又はα，α−トレハロースの何れか１種とを含有する試験試料を添加した場合には、何れの場合にも、藍草抽出物又は併用成分を単独で添加した場合に比して、併用成分の濃度に依存して、ヘッドスペースガス中のメチルメルカプタン生成抑制率が上昇した。メチルメルカプタン生成抑制率で見ると、藍草抽出物と銅クロロフィリンナトリウム、環状四糖、糖転移ヘスペリジン、プロポリス抽出物の何れか１種とを添加した場合に、ヘッドスペースガス中のメチルメルカプタンの生成が効果的に抑制され、とりわけ、藍草抽出物と、銅クロロフィリンナトリウム、糖転移ヘスペリジン及びプロポリス抽出物の何れかとを含有する試験試料を添加した場合に、メチルメルカプタンの生成が効果的に抑制された。この結果は、藍草抽出物と、銅クロロフィリンナトリウム、環状四糖、糖転移ヘスペリジン、プロポリス抽出液、及び、α，α−トレハロースの１種又は２種以上とを併用することにより、口臭の原因となるメチルメルカプタンの生成を効果的に抑制できることを物語っている。 以下、本発明のメチオニナーゼ阻害剤について、実施例により説明するが、本発明がこれら実施例に、何ら限定されることはない。 ＜メチオニナーゼ阻害剤＞ ジャケットタンクに水２５ｋｇを入れ、水蒸気を使用して９０℃に加温して、これに市販の蓼藍乾燥葉をミルで細断したもの２．５ｋｇを加えて撹拌し、６０分間、煮出し抽出し、常法により、濾布遠心、高速遠心を併用して、残渣を除去し、藍草抽出物１８ｋｇを得た。この抽出液を、限外濾過膜（ＵＦ膜）（旭化成工業株式会社社販売、製品名「限外濾過モジュール マイクローザー ＡＰＩ２０１３」）を用いて濾過した後、減圧下で加温して水分を蒸発させ、６．５ｋｇの液状のメチオニナーゼ阻害剤を得た。本品は、固形分を２８ｍｇ／ｍＬ含有し、固形分換算で、１ｇ当たりポリフェノール７１ｍｇ、トリプタンスリンを３５０μｇ含有していた。 本品は、このままで、希釈して、濃縮して、又は、精製して、メチオニナーゼ阻害剤とすることができ、或いは、これらのメチオニナーゼ阻害剤に製剤学的に許容される適宜の成分を配合して、飲食品、化粧品、医薬部外品、医薬、飼料、餌料、ペットフード等の経口用組成物の形態のメチオニナーゼ阻害剤とすることもできる。これらのメチオニナーゼ阻害剤は、経口的に摂取することにより、口腔内のメチオニナーゼを阻害して、メチルメルカプタンの生成を抑制するので、口臭抑制の目的で使用することができる。また、これらのメチオニナーゼ阻害剤は、メチルメルカプタン生成抑制剤や口臭抑制剤として利用してもよく、これらの効果がある旨を表示して販売することも随意である。 ＜メチオニナーゼ阻害剤＞ 実施例１で調製した液状のメチオニナーゼ阻害剤（固形分２８ｍｇ／ｍＬ）の固形分１質量部に対して、デキストリン（三和澱粉工業株式会社販売、商品名「サンデック＃３０」、ＤＥ３．５）を無水物換算で１質量部の割合で添加し、混合して、常法により噴霧乾燥して、粉末状のメチオニナーゼ阻害剤０．６ｋｇを調製した。本品は、２５℃、相対湿度５３％の環境で１週間以上保存しても、吸湿や固結もなく、取り扱いの容易な粉末である。本品は、藍草抽出物由来の固形分を５００ｍｇ／ｇ含有し、１ｇ当たり、ポリフェノール３４ｍｇ、トリプタンスリンを１６７μｇ含有していた。 本品は、そのままで、打錠して、或いは、溶媒に溶解乃至懸濁する等して、メチオニナーゼ阻害剤を製造することができる。本品は、経口用組成物に配合して、飲食品、化粧品、医薬部外品、医薬、飼料、餌料、ペットフード等の形態のメチオニナーゼ阻害剤を製造することができる。また、本品やこれを配合した経口用組成物は、メチオニナーゼ阻害剤としてだけでなく、メチルメルカプタン生成抑制剤や口臭抑制剤として利用してもよく、これらの効果がある旨を表示して販売することも随意である。 ＜メチオニナーゼ阻害剤＞ 刈り取った直後の蓼藍の地上部３０ｋｇを破砕した後、酢酸エチルを３５乃至５５ｋｇを加え、室温下で３回繰返し抽出をおこなった。抽出物を合一し、濾過した後、濾液を採取し、エバポレーターで酢酸エチルを留去し、乾固して得た固状物１５０ｇを、粉砕して粉末状のメチオニナーゼ阻害剤を調製した。本品を実験２と同じ方法で、試験試料中に藍草抽出物由来の固形分が１ｍｇ／ｍＬとなるように溶解して、メチオニナーゼ阻害率を測定したところ、その阻害率は８４．３％となり、藍草の酢酸エチル抽出物は、水抽出物と同様に、メチオニナーゼ阻害活性を有することが確認された。 本品は、そのままで、造粒して、打錠して、或いは、溶媒に溶解乃至懸濁する等して、メチオニナーゼ阻害剤を製造することができる。本品は、経口用組成物に配合して、飲食品、化粧品、医薬部外品、医薬、飼料、餌料、ペットフード等の形態のメチオニナーゼ阻害剤を製造することができる。また、本品やこれを配合した経口用組成物は、メチオニナーゼ阻害剤としてだけでなく、メチルメルカプタン生成抑制剤や口臭抑制剤として利用してもよく、これらの効果がある旨を表示して販売することも随意である。 ＜メチオニナーゼ阻害剤＞ 刈り取った直後の蓼藍の地上部３０ｋｇを破砕した後、７０％エタノール水溶液を４０ｋｇ加え、室温下で３回繰返し抽出した。抽出物を合一し、濾過した後、濾液を採取し、エバポレーターでエタノールを留去後、常法により、凍結乾燥して得た固状物４００ｇを、粉砕して粉末状のメチオニナーゼ阻害剤を調製した。本品を実験２と同じ方法で、試験試料中に藍草抽出物由来の固形分が１ｍｇ／ｍＬとなるように溶解して、メチオニナーゼ阻害率を測定したところ、その阻害率は７７．４％となり、藍草の７０％エタノール水溶液の抽出物は、水抽出物と同様に、メチオニナーゼ阻害活性を有することが確認された。 本品は、そのままで、造粒して、打錠して、或いは、溶媒に溶解乃至懸濁する等して、メチオニナーゼ阻害剤を製造することができる。また、本品は、経口用組成物に配合して、飲食品、化粧品、医薬部外品、医薬、飼料、餌料、ペットフード等の形態のメチオニナーゼ阻害剤を製造することができる。また、本品やこれを配合した経口用組成物は、メチオニナーゼ阻害剤としてだけでなく、メチルメルカプタン生成抑制剤や口臭抑制剤として利用してもよく、これらの効果がある旨を表示して販売することも随意である。 ＜メチオニナーゼ阻害剤＞ 常法にしたがって、下記の配合処方により歯磨形態のメチオニナーゼ阻害剤を調製した。 第二リン酸カルシウム ４５質量部 プルラン ２．５質量部 ラウリル硫酸ナトリウム １．５質量部 グリセリン １０質量部 ポリオキシエチレンソルビタンラウレート ０．５質量部 ソルビトール １０質量部 α，α−トレハロースの糖質誘導体含有糖質（株式会社 林原生物化学研究所販売、商品名「トルナーレ」） １０質量部 実施例１で調製した液状のメチオニナーゼ阻害剤（固形分を ２８ｍｇ／ｍＬ含有） ５質量部 プロポリス抽出物（株式会社林原商事販売、商品名 「林原プロポリス」） ０．５質量部 精製水を加えて全量を１００質量部とする。 本品で歯磨をすれば、口腔内の微生物のメチオニナーゼを阻害して、メチルメルカプタンの生成を抑制するので、本品は、メチルメルカプタン生成抑制剤や口臭抑制剤として利用してもよく、これらの効果がある旨を表示して販売することも随意である。 ＜メチオニナーゼ阻害剤＞ 常法にしたがって、下記の配合処方により、歯磨形態のメチオニナーゼ阻害剤を調製した。 炭酸カルシウム ５０質量部 グリセリン １５質量部 α，α−トレハロースの糖質誘導体含有糖質（株式会社 林原生物化学研究所販売、商品名「トルナーレ」） ３質量部 シクロニゲロシルニゲロース（株式会社林原生物化学 研究所製造） ０．５質量部 カルボオキシメチルセルロース ２質量部 ラウリル硫酸ナトリウム ２質量部 香料 １質量部 サッカリン ０．１質量部 実施例１で調製したメチオニナーゼ阻害剤（固形分を ２８ｍｇ／ｍＬ含有） ３質量部 クロルヘキシジン ０．０１質量部 水を加えて全量を１００質量部とする。 本品で歯磨をすれば、口腔内の微生物のメチオニナーゼを阻害して、メチルメルカプタンの生成を抑制するので、本品は、メチルメルカプタン生成抑制剤や口臭抑制剤として利用してもよく、これらの効果がある旨を表示して販売することも随意である。 ＜メチオニナーゼ阻害剤＞ 常法にしたがって、下記の配合処方により、スプレー形態のメチオニナーゼ阻害剤を調製した。 エタノール １０質量部 グリセリン ２質量部 実施例１で調製したメチオニナーゼ阻害剤（固形分を ２８ｍｇ／ｍＬ含有） ５質量部 α，α−トレハロース １質量部 プロポリス抽出物（株式会社林原商事販売、商品名 「林原プロポリス」） １質量部 香料 ０．０５質量部 着色料 ０．００１質量部 水を加えて全量を１００質量部とする。 本品は、口腔内に噴霧することにより、口腔内の微生物のメチオニナーゼを阻害して、メチルメルカプタンの生成を抑制するので、本品は、メチルメルカプタン生成抑制剤や口臭抑制剤として利用してもよく、これらの効果がある旨を表示して販売することも随意である。 ＜メチオニナーゼ阻害剤＞ 常法にしたがって、下記の成分を混合して、押し出し造粒し、流動層乾燥して、バスケット顆粒状のメチオニナーゼ阻害剤を調製した。この顆粒を、アルミピロー容器に１．５ｇずつ分包した。 実施例２乃至４で調製したメチオニナーゼ阻害剤の何れか１種 ２０質量部 エリスリトール ３５質量部 α，α−トレハロース ９質量部 マルチトール ９質量部 Ｌ−アスコルビン酸２−グルコシド（株式会社林原商事販売、 商品名「アスコフレッシュ」） ５質量部 蔗糖（フロストシュガー） ６質量部 コエンザイムＱ１０ ５質量部 糖転移ヘスペリジン（株式会社林原商事販売、商品名 「林原ヘスペリジンＳ」） ４．５質量部 Ｌ−カルニチン ２．５質量部 Ｌ−シトルリン １質量部 α―リポ酸 １．５質量部 ビタミンＢ１ ０．１質量部 ビタミンＢ２ ０．１質量部 ビタミンＢ６ ０．１質量部 パイナップルパウダー ０．５質量部 オレンジパウダー ０．２質量部 ピーチ香料 ０．５質量部 本品は、口腔内で溶解させながら摂取することにより、口腔内の微生物のメチオニナーゼを阻害して、メチルメルカプタンの生成を抑制するので、本品は、メチルメルカプタン生成抑制剤や口臭抑制剤として利用してもよく、これらの効果がある旨を表示して販売することも随意である。 ＜メチオニナーゼ阻害剤＞ 常法にしたがって、下記の配合処方により、マウスウオッシュの形態のメチオニナーゼ阻害剤を調製した。 実施例１で調製したメチオニナーゼ阻害剤（固形分を ２８ｍｇ／ｍＬ含有） ３質量部 エタノール ２質量部 α，α−トレハロースの糖質誘導体含有糖質（株式会社 林原生物化学研究所販売、商品名「トルナーレ」） ２質量部 糖転移ステビア ０．０２質量部 塩酸クロルヘキシジン ０．０１質量部 緑茶ポリフェノール（三井農林株式会社販売、商品名 「ポリフェノンＧ」） ０．５質量部 香料 １質量部 水を加えて全量を１００質量部とする。 本品を使用して口腔内を洗浄することにより、口腔内の微生物のメチオニナーゼを阻害して、メチルメルカプタンの生成を抑制するので、本品は、メチルメルカプタン生成抑制剤や口臭抑制剤として利用してもよく、これらの効果がある旨を表示して販売することも随意である。 常法にしたがって、下記の処方の配合成分を、９０℃で３時間撹拌して溶解し、２×１０ｍのステンレス板上に均質に流延し、６０℃で４時間乾燥して、厚さ約２００μｍ、幅約２００ｃｍ、長さ１０ｍ、水分含量約８％、１００ｃｍ２当たりの質量が約２．２ｇのシート状組成物を得た。このシートを１×２ｃｍに裁断して、２０枚ずつ携帯用の容器に充填して、フィルム形態のメチオニナーゼ阻害剤を調製した。 プルラン（株式会社林原商事販売、商品名「食品添加物 プルラン」） ２２質量部 カラギーナン ０．５質量部 キサンタンガム ０．１質量部 実施例１で調製したメチオニナーゼ阻害剤（固形分を ２８ｍｇ／ｍＬ含有） ３質量部 ８５％エタノール水溶液 ０．７質量部 α，α−トレハロース ０．０１質量部 グリセリン ０．５質量部 スクラロース １質量部 カラメル色素 ０．５質量部 蔗糖脂肪酸エステル ０．８質量部 銅クロロフィリンナトリウム ０．５質量部 精製水を加えて全量を１００質量部とする。 本品を口腔内で溶解させながら摂取することにより、口腔内の微生物のメチオニナーゼを阻害して、メチルメルカプタンの生成を抑制するので、本品は、メチルメルカプタン生成抑制剤や口臭抑制剤として利用してもよく、これらの効果がある旨を表示して販売することも随意である。 ＜メチオニナーゼ阻害剤＞ 常法にしたがって、下記の配合処方により、トローチ剤形態のメチオニナーゼ阻害剤を調製した。 麦芽糖 ６８質量部 α，α−トレハロース １５質量部 プルラン ５質量部 実施例２乃至４で調製したメチオニナーゼ阻害剤の何れか１種 １０質量部 香料 １質量部 モノフルオロリン酸ナトリウム １質量部 本品は、口腔内で溶解させながら摂取することにより、口腔内の微生物のメチオニナーゼを阻害して、メチルメルカプタンの生成を抑制するので、本品は、メチルメルカプタン生成抑制剤や口臭抑制剤として利用してもよく、これらの効果がある旨を表示して販売することも随意である。 ＜メチオニナーゼ阻害剤＞ 常法にしたがって、下記の配合処方により、チューインガム形態のメチオニナーゼ阻害剤を調製した。 ガムベース ２０質量部 蔗糖 ５４質量部 α，α−トレハロース １５質量部 α，α−トレハロースの糖質誘導体含有糖質（株式会社 林原商事販売、商品名「ハローデックス」） ８．５質量部 糖転移ヘスペリジン（株式会社林原商事販売、商品名 「林原ヘスペリジンＳ」） ０．４質量部 香料 ０．５質量部 実施例２乃至４で調製したメチオニナーゼ阻害剤の何れか１種 １．５質量部 メントール ０．１質量部 本品を口腔内で咀嚼することにより、口腔内の微生物のメチオニナーゼを阻害して、メチルメルカプタンの生成を抑制するので、本品は、メチルメルカプタン生成抑制剤や口臭抑制剤として利用してもよく、これらの効果がある旨を表示して販売することも随意である。 常法にしたがって、下記の配合処方により、ハードキャンディ形態のメチオニナーゼ阻害剤を調製した。 蔗糖 ５０質量部 ラクトスクロース含有水飴（株式会社林原商事販売、 商品名「乳果オリゴ５５０」） ３２質量部 実施例２乃至４で調製したメチオニナーゼ阻害剤の何れか１種 ４．７質量部 香料 ０．３質量部 水を加えて全量を１００質量部とする。 本品は、口腔内で溶解させながら摂取することにより、口腔内の微生物のメチオニナーゼを阻害して、メチルメルカプタンの生成を抑制するので、口臭抑制の目的で使用することができる。また、その効果がある旨を表示して販売することも随意である。 ＜メチオニナーゼ阻害剤＞ 常法にしたがって、下記の配合処方により、錠菓の形態のメチオニナーゼ阻害剤を調製した。 蔗糖 ７５．６質量部 α，α−トレハロース １８質量部 シクロニゲロシルニゲロース（株式会社林原生物化学 研究所製造） １質量部 実施例２乃至４で調製したメチオニナーゼ阻害剤の何れか１種 ５質量部 蔗糖脂肪酸エステル ０．２質量部 香料 ０．２質量部 本品は、口腔内で溶解させながら摂取することにより、口腔内の微生物のメチオニナーゼを阻害して、メチルメルカプタンの生成を抑制するので、本品は、メチルメルカプタン生成抑制剤や口臭抑制剤として利用してもよく、これらの効果がある旨を表示して販売することも随意である。＜メチオニナーゼ阻害剤＞ 常法にしたがって、下記の配合処方により、グミゼリー形態のメチオニナーゼ阻害剤を調製した。 ゼラチン ６０質量部 α，α−トレハロースの糖質誘導体含有糖質（株式会社 林原商事販売、商品名「ハローデックス」） ２１質量部 蔗糖 ８．５質量部 植物油脂 ４．５質量部 マルチトール ２．５質量部 β−サイクロデキストリン ０．５質量部 レモン果汁 １質量部 実施例２乃至４で調製したメチオニナーゼ阻害剤の何れか１種 ３質量部 本品は、口腔内で咀嚼して摂取することにより、口腔内の微生物のメチオニナーゼを阻害して、メチルメルカプタンの生成を抑制するので、本品は、メチルメルカプタン生成抑制剤や口臭抑制剤として利用してもよく、これらの効果がある旨を表示して販売することも随意である。 ＜メチオニナーゼ阻害剤＞ 常法にしたがって、下記の配合処方により、チョコレートの形態のメチオニナーゼ阻害剤を調製した。 蔗糖（粉糖） ３７質量部 カカオビター ２０質量部 全脂粉乳 ２０質量部 カカオバター １６質量部 マンニトール ３質量部 実施例２乃至４で調製したメチオニナーゼ阻害剤の何れか１種 ３質量部 香料 １質量部 本品は、摂取することにより、口腔内の微生物のメチオニナーゼを阻害して、メチルメルカプタンの生成を抑制するので、本品は、メチルメルカプタン生成抑制剤や口臭抑制剤として利用してもよく、これらの効果がある旨を表示して販売することも随意である。 ＜メチオニナーゼ阻害剤＞ 常法にしたがって、下記の配合処方により、アイスクリームの形態のメチオニナーゼ阻害剤を調製した。 脱脂粉乳 ５０質量部 生クリーム ２４質量部 砂糖 １０質量部 卵黄 １０質量部 実施例１の方法で調製したメチオニナーゼ阻害剤（固形分を ２８ｍｇ／ｍＬ含有） ２質量部 香料 ０．１質量部水を加えて全量を１００質量部とする。 本品を経口摂取することにより、口腔内の微生物のメチオニナーゼを阻害して、メチルメルカプタンの生成を抑制するので、本品は、メチルメルカプタン生成抑制剤や口臭抑制剤として利用してもよく、これらの効果がある旨を表示して販売することも随意である。 ＜メチオニナーゼ阻害剤＞ 常法にしたがって、下記の配合処方により、清涼飲料形態のメチオニナーゼ阻害剤を調製した。 グレープ果汁 ３０質量部 α，α−トレハロース １０質量部 異性化糖 ５質量部 クエン酸 ０．１質量部 糖転移ビタミンＣ（株式会社林原商事販売、商品名 「アスコフレッシュ」） １質量部 スクラロース ０．０１質量部 プロポリス抽出物（株式会社林原商事販売、商品名 「林原プロポリス」） ０．２質量部 実施例１で調製したメチオニナーゼ阻害剤（固形分を ２８ｍｇ／ｍＬ含有） ３質量部 水を加えて全量を１００質量部とする。 本品を経口摂取することにより、口腔内の微生物のメチオニナーゼを阻害して、メチルメルカプタンの生成を抑制するので、本品は、メチルメルカプタン生成抑制剤や口臭抑制剤として利用してもよく、これらの効果がある旨を表示して販売することも随意である。 ＜メチオニナーゼ阻害剤＞ 常法にしたがって、下記の配合処方により、カプセル形態のメチオニナーゼ阻害剤を調製した。 実施例２乃至４で調製したメチオニナーゼ阻害剤の何れか１種 ５質量部 トウモロコシ澱粉 ５４質量部 α，α−トレハロース ２０質量部 カルボキシメチルセルロース ２０質量部 シクロニゲロシルニゲロース（株式会社林原生物化学 研究所製造） １質量部 これら成分を細かく粉砕混合して均質な粉末を製造した。硬質カプセルに粉末１００ｍｇを入れてカプセル剤を製造した。 本品を口腔内でかみ砕いて摂取することにより、口腔内の微生物のメチオニナーゼを阻害して、メチルメルカプタンの生成を抑制するので、本品は、メチルメルカプタン生成抑制剤や口臭抑制剤として利用してもよく、これらの効果がある旨を表示して販売することも随意である。 本発明のメチオニナーゼ阻害剤を経口的に使用することにより、効果的に口腔内の微生物の持つメチオニナーゼ活性を阻害することができるので、口腔内のメチルメルカプタンの生成が抑制され、結果として、口臭を抑制することができる。また、本発明のメチオニナーゼ阻害剤は、長期間使用しても、副作用がないので、安全性が高く、安心して利用することができる。本発明は、斯くも顕著な作用効果を奏する発明であり、斯界に多大の貢献をする、誠に意義のある発明である。 藍草の植物体を溶媒により抽出して得られる藍草抽出物を有効成分とするメチオニナーゼ阻害剤。 藍草抽出物を、固形物換算で、０．０１質量％以上含有する請求項１に記載のメチオニナーゼ阻害剤。 さらに、藍草抽出物以外の口臭抑制効果を有する成分を合計で０．０１質量％以上含有する請求項１又は２に記載のメチオニナーゼ阻害剤。 経口用組成物の形態の請求項１乃至３に記載のメチオニナーゼ阻害剤。 経口用組成物が飲食品、化粧品、医薬部外品、医薬品、飼料、餌料、又は、ペットフードである請求項は４に記載のメチオニナーゼ阻害剤。 メチオニナーゼの阻害効果がある旨を表示してなる請求項１乃至５の何れかに記載のメチオニナーゼ阻害剤。 請求項１乃至６の何れかに記載のメチオニナーゼ阻害剤のメチルメルカプタン生成抑制剤、メチルメルカプタン低減又は口臭抑制剤としての使用。 【課題】人体に有害な影響がなく、安心して使用できる、安全性の高い植物抽出物を有効成分とする、細菌由来のメチオニナーゼ阻害剤の提供。【解決手段】蓼藍など藍染め用染料のインディゴを生成するインジカンを含む含藍植物とよばれる草木である藍草の植物体を溶媒により抽出して得られる藍草抽出物を有効成分とするメチオニナーゼ阻害剤。該阻害剤は、メチルメルカプタン生成抑制剤、メチルメルカプタン低減又は口臭抑制剤として有効である。該阻害剤は、経口用組成物として、飲食品、化粧品、医薬部外品、医薬品、飼料、餌料、又は、ペットフードに配合される。【選択図】なし