生命科学関連特許情報
| タイトル： | 特許公報(B2)_膣健康改善のためのプロバイオティックラクトバチルス株 |
| 出願番号： | 2007534546 |
| 年次： | 2013 |
| IPC分類： | C12N 1/20,A61K 35/74,A61P 31/04,A61P 31/12,A61P 15/02,A61P 13/02,A23L 1/30,C12N 15/09,C12R 1/225 |
特許情報キャッシュ
モーリン ゴーラン アールネ シヴ ジェップソン ベント ヴァスケス アレハンドラ ベルググレン アンナ JP 5147402 特許公報(B2) 20121207 2007534546 20051005 膣健康改善のためのプロバイオティックラクトバチルス株 プロビ エービー 500045257 三枝 英二 100065215 掛樋 悠路 100076510 斎藤 健治 100099988 モーリン ゴーラン アールネ シヴ ジェップソン ベント ヴァスケス アレハンドラ ベルググレン アンナ SE 0402406-3 20041005 20130220 C12N 1/20 20060101AFI20130131BHJP A61K 35/74 20060101ALI20130131BHJP A61P 31/04 20060101ALI20130131BHJP A61P 31/12 20060101ALI20130131BHJP A61P 15/02 20060101ALI20130131BHJP A61P 13/02 20060101ALI20130131BHJP A23L 1/30 20060101ALI20130131BHJP C12N 15/09 20060101ALN20130131BHJP C12R 1/225 20060101ALN20130131BHJP JPC12N1/20 AA61K35/74 AA61P31/04A61P31/12A61P15/02A61P13/02A23L1/30 ZC12N15/00 AC12N1/20 AC12R1:225 C12N 1/00-1/38 PubMed 米国特許出願公開第２００２／００９０３６５（ＵＳ，Ａ１） J.Clin.Microbiol.,2004,42(2),p.713-7 J.Infect.Dis.,2001,184(11),p.1431-6 J.Infect.Dis.,2001,183(3),p.485-91 J.Appl.Microbiol.,2002,93(5),p.884-93 18 DSMZ DSM 16735 DSMZ DSM 16736 DSMZ DSM 16738 DSMZ DSM 16739 DSMZ DSM 16740 DSMZ DSM 16741 DSMZ DSM 16742 DSMZ DSM 16743 DSMZ DSM 16737 DSMZ DSM 15312 DSMZ DSM 15313 DSMZ DSM 15316 DSMZ DSM 6595 DSMZ DSM 9843 SE2005001467 20051005 WO2006038869 20060413 2008518588 20080605 24 20080929 名和 大輔発明の分野 本発明は、ヒト膣にコロニーを形成する能力を有するラクトバチルス属又はその突然変異株に属するプロバイオティック細菌株に関する。より詳細には、該プロバイオティック細菌株は、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ、 Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ 及び Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉからなる群より選択された種に属する。さらに、本発明は薬剤、前記株を含む組成物（例えば食品もしくは薬学的組成物）、衛生製品、前記株の生物学的に純粋な培養物、並びに新規食品としての使用に関する。発明の背景 健康な膣は、膣上皮と微生物叢との相互作用によって維持されており、ここでラクトバチルスは非常に重要な役割を演じている。ラクトバチルス種はグルコース代謝により膣内のｐＨ酸度を維持しており、さらには、過酸化水素及びバクテリオシン様生産物とともに、病原体やその他好ましくない微生物の増殖を抑制する。このことは、細菌性膣炎やＣａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓによる酵母性膣炎といった尿路感染症の原因となる尿路病原体（Ｕｒｏｐａｔｈｏｇｅｎｓ）に対する、非常に効果的な保護に寄与する（Ｒｅｉｄ Ｇ， Ｂｒｕｃｅ ＡＷ． Ｕｒｏｇｅｎｉｔａｌ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ ｉｎ ｗｏｍｅｎ： ｃａｎ ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ ｈｅｌｐ？ Ｐｏｓｔｇｒａｄ Ｍｅｄ Ｊ ２００３； ７９： ４２８−４３２．）。 長い間、膣内で優勢なラクトバチルス種はＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓだと受け入れられてきたが、遺伝子型特定法（ｇｅｎｏｔｙｐｉｃ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｓ）により、健康な膣で最も一般的なラクトバチルスは、実際はＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｉｎｅｒｓ及びＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉであることが明らかとなった。しかし、別の研究は、優勢なラクトバチルスとしてＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｅｎｔｏｓｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ及びＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓといった種を示し、膣から回収されるラクトバチルス間の差異を実証している。これは、おそらく、サンプル、膣の状態又は分離に好ましい手法の相違のためである（Ｖａｓｑｕｅｚ Ａ， Ｊａｋｏｂｓｓｏｎ Ｔ， Ａｈｒｎｅ Ｓ， Ｆｏｒｓｕｍ Ｕ， Ｍｏｌｉｎ Ｇ． Ｖａｇｉｎａｌ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｌｏｒａ ｏｆ ｈｅａｌｔｈｙ Ｓｗｅｄｉｓｈ ｗｏｍｅｎ． Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｍｉｒｏｂｉｏｌ． ２００２； ４０： ２７４６−９）。 世界保健機関は、プロバイオティックス（ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ）を“適切な量が投与されたとき宿主に健康利益をもたらす、生きた微生物（複数）”と定義した。抗生物質耐性の発達及び膣感染治療の失敗は、代替ツールとしてプロバイオティックスへの興味を高じさせてきた。膣プロバイオティック（ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ）の必要性は、膣感染の高い再発率の点から明らかである（Ｒｅｉｄ Ｇ， Ｂｒｕｃｅ ＡＷ， Ｆｒａｓｅｒ Ｎ， Ｈｅｉｎｅｍａｎｎ Ｃ， Ｏｗｅｎ Ｊ， Ｈｅｎｎｉｎｇ Ｂ． Ｏｒａｌ ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ ｃａｎ ｒｅｓｏｌｖｅ ｕｒｏｇｅｎｉｔａｌ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ． ＦＥＭＳ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ ２００１； ３０： ４９−５２； Ｆａｍｕｌａｒｏ Ｇ， Ｐｉｅｌｕｉｇｉ Ｍ， Ｃｏｃｃｉａ Ｒ， Ｍａｓｔｒｏｉａｃｏｖｏ Ｐ， Ｄｅ Ｓｉｍｏｎｅ Ｃ． Ｍｉｃｒｏｅｃｏｌｏｇｙ， ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｖａｇｉｎｏｓｉｓ ａｎｄ ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ： ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ ｆｏｒ ｂａｃｔｅｒｉｏｔｈｅｒａｐｙ． Ｍｅｄ Ｈｙｐｏｔｈｅｓｅｓ ２００１； ５６： ４２１−３０．）。ラクトバチルスの減少を特徴とする膣フローラの変化は、細菌性膣炎症候群（ｔｈｅ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｖａｇｉｎｏｓｉｓ）の主な原因のようである。膣にコロニーを形成する能力を有するラクトバチルス株の定期的な投与は、この問題の代替解決策となり得る。 家庭療法としてのヨーグルト処置は、長年、膣疾患の予防又は軽減のために用いられてきた。しかし、ヨーグルト内に見つかるラクトバチルス、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｅｕｋｉｉ ｖａｒ． ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓは、プロバイオティックスによる膣修復のために最適の候補ではない。なぜなら、このラクトバチルスは通常そういった環境に見つかるものではなく、そして膣上皮細胞にあまり接着せず、高効率なコロニー形成をしないからである（Ｆａｍｕｌａｒｏ Ｇ， Ｐｉｅｌｕｉｇｉ Ｍ， Ｃｏｃｃｉａ Ｒ， Ｍａｓｔｒｏｉａｃｏｖｏ Ｐ， Ｄｅ Ｓｉｍｏｎｅ Ｃ． Ｍｉｃｒｏｅｃｏｌｏｇｙ， ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｖａｇｉｎｏｓｉｓ ａｎｄ ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ： ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ ｆｏｒ ｂａｃｔｅｒｉｏｔｈｅｒａｐｙ． Ｍｅｄ Ｈｙｐｏｔｈｅｓｅｓ ２００１； ５６： ４２１− ４３０）。膣プロバイオティックに最適な候補は、膣内に通常見つかり、病原体を抑制する特性を有する種である。 通常の膣フローラは直腸粘膜からあがってきたものであり（Ｒｅｉｄ Ｇ， Ｂｒｕｃｅ ＡＷ． Ｕｒｏｇｅｎｉｔａｌ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ ｉｎ ｗｏｍｅｎ： ｃａｎ ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ ｈｅｌｐ？ Ｐｏｓｔｇｒａｄ Ｍｅｄ Ｊ ２００３； ７９： ４２８−４３２）、このことは、経口投与した、胃腸の通過を生き延びた微生物は、ある一定期間後に膣内に現れるであろうことを意味する。この事実は、膣プロバイオティックが宿主に口から与えられ、膣問題の予防を意図した長期間投与を簡単にする可能性を高める。 ６ヶ月間Ｌ． ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓを与えられた女性は、その結果カンジダのコロニー形成及び感染がともに減少した（Ｈｉｌｔｏｎ Ｅ， Ｉｓｅｎｂｅｒｇ ＨＤ， Ａｌｐｅｒｓｔｅｉｎ Ｐ， Ｆｒａｎｃｅ Ｋ， Ｂｏｒｅｎｓｔｅｉｎ ＭＴ． Ｉｎｇｅｓｔｉｏｎ ｏｆ ｙｏｇｕｒｔ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ ａｓ ｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ ｆｏｒ ｃａｎｄｉｄａｌ ｖａｇｉｎｉｔｉｓ． Ａｎｎ Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｍｅｄ １９９２； １１６： ３５３−３５７）。発明の要旨 ラクトバチルス属に属する特定のプロバイオティック細菌株、より詳細にはＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ及びＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉからなる群より選択される種がヒト膣にコロニーを形成する能力を有し、例えば経口、経膣又は経直腸投与されたとき膣の健康を保存又は改善するということが、今驚くべきことに見出された。 １つの局面において、本発明は、ヒト膣にコロニーを形成する能力を有するラクトバチルス属に属するプロバイオティック細菌又はその突然変異株（但し、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＨＥＡＬ ９（寄託番号 ＤＳＭ １５３１２）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＨＥＡＬ １９（寄託番号 ＤＳＭ １５３１３）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＨＥＡＬ ９９（寄託番号 ＤＳＭ １５３１６）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ２９９（寄託番号 ＤＳＭ ６５９５）又はＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ２９９ｖ（寄託番号 ＤＳＭ ９８４３）は除外）に関する。 １つの実施形態において、前記細菌株は、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ、 Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ 及び Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉからなる群より選択される種又はその突然変異株に属し、別の実施形態においては、前記株は、マンノース特異的な付着素(adhesion)又は膣内部表面、胃腸管、尿道を含む膀胱への結合を可能とする他の接着メカニズムを有する。 本発明の１つの実施形態において、プロバイオティック細菌株はＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＶＰＣ５（寄託番号 ＤＳＭ １６７３５）又はその突然変異株である。 本発明の別の実施形態において、プロバイオティック細菌株はＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＶＰＣ４０（寄託番号 ＤＳＭ １６７３６）又はその突然変異株である。 本発明のさらに別の実施形態において、プロバイオティック細菌株はＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＶＰＣ７０（寄託番号 ＤＳＭ １６７３８）又はその突然変異株である。 なおさらなる実施形態において、プロバイオティック細菌株はＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＶＰＣ７１（寄託番号 ＤＳＭ １６７３９）又はその突然変異株である。 なおさらなる実施形態において、プロバイオティック細菌株はＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＶＰＣ７７（寄託番号 ＤＳＭ １６７４０）又はその突然変異株である。 別の実施形態において、プロバイオティック細菌株はＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＶＰＣ１１１（寄託番号 ＤＳＭ １６７４１）又はその突然変異株である。 なお別の実施形態において、プロバイオティック細菌株はＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＶＰＣ１３０（寄託番号 ＤＳＭ １６７４２）又はその突然変異株である。 なお別の実施形態において、プロバイオティック細菌株はＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＶＰＣ１７７（寄託番号 ＤＳＭ １６７４３）又はその突然変異株である。 さらなる実施形態において、プロバイオティック細菌株はＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＶＰＧ４４（寄託番号 ＤＳＭ １６７３７）又はその突然変異株である。 なお別の実施形態において、上記細菌株は薬剤として使用される。 第２の局面において、本発明は、細菌性膣炎、ウイルス性膣炎、酵母性膣炎、膣内感染症、ＨＩＶやクラミジア感染といった性的感染症、妊娠した女性内の胎児を危険にする感染症、早産、及び尿路感染症の、治療並びに／あるいは予防のための薬剤の製造のための上記細菌株の使用に関する。 第３の局面において、本発明は、細菌性膣炎、ウイルス性膣炎、酵母性膣炎、膣内感染症、ＨＩＶやクラミジア感染といった性的感染症、妊娠した女性内の胎児を危険にする感染症、早産、及び尿路感染症の、治療並びに／あるいは予防のための薬剤の製造のための、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＨＥＡＬ ９（寄託番号 ＤＳＭ １５３１２）、 Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＨＥＡＬ １９（寄託番号 ＤＳＭ １５３１３）、 Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＨＥＡＬ ９９（寄託番号 ＤＳＭ １５３１６）、 Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ２９９（寄託番号 ＤＳＭ ６５９５）、 Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ２９９ｖ（寄託番号 ＤＳＭ ９８４３）、又はその突然変異株からなる群より選択される（但し、尿路感染症のためのＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ２９９ｖ（寄託番号 ＤＳＭ ９８４３）を除く）細菌株の使用に関する。 第４の局面において、本発明は、少なくとも１つの上記プロバイオティック細菌株、及び／又はＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＨＥＡＬ ９（寄託番号 ＤＳＭ １５３１２）、 Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＨＥＡＬ １９（寄託番号 ＤＳＭ １５３１３）、 Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＨＥＡＬ ９９（寄託番号 ＤＳＭ １５３１６）、 Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ２９９（寄託番号 ＤＳＭ ６５９５）、 又はＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ２９９ｖ（寄託番号 ＤＳＭ ９８４３）、もしくはその突然変異株、及び／又はその断片もしくは分画を含む組成物に関する。１つの実施形態において、該組成物はキャリア物質を含む。 別の実施形態において、該組成物は食品であり、好ましくは、オートミール粥、乳酸発酵食品、レジスタントスターチ、食物繊維、炭水化物、タンパク質及び糖タンパク質からなる群より選択されるキャリア物質を含む食品である。さらに別の実施形態においては、前記食品はパン、チーズ、ヨーグルト、ジュース、ヘルスバー、(ｈｅａｌｔｈ ｂａｒｓ)、スプレッド（ｓｐｒｅａｄｓ）、ビスケット及びシリアルからなる群より選択され、なおさらに別の実施形態においては、前記少なくとも１つのプロバイオティック細菌株は封入(ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｅｄ)又はコーティング(ｃｏａｔｉｎｇ)され、好ましくは消費時において１０７から１０１２ＣＦＵ、さらに好ましくは１０９から１０１０ＣＦＵの有効日用量を与える量で存在する。 さらに別の実施形態において、該組成物はフードサプリメントであり、好ましくはオートミール粥、乳酸発酵食品、レジスタントスターチ、食物繊維、イヌリン、炭水化物、タンパク質及び糖タンパク質からなる群より選択されるキャリア物質を含むフードサプリメントである。 さらに別の実施形態において、該組成物は、細菌性膣炎、ウイルス性膣炎、酵母性膣炎、膣内感染症、ＨＩＶやクラミジア感染といった性的感染症、妊娠した女性内の胎児を危険にする感染症、早産、及び尿路感染症の、治療並びに／あるいは予防のための薬学的組成物（但し、尿路感染症のためのＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ２９９ｖ（寄託番号 ＤＳＭ ９８４３）を除く）である。 １つの実施形態において、前記薬学的組成物は、経口、経膣又は経直腸投与され、あるいは膀胱に点滴注入される。そして好ましくは、前記キャリア物質は少なくとも１つの薬学的に許容されたキャリアである。 さらなる実施形態において、前記薬学的組成物は、経口及び経膣、経口及び経直腸、あるいは経口、経膣及び経直腸に組み合わせて投与される。 別の実施形態において、前記薬学的組成物は、タブレット、吸引タブレット（ｓｕｃｋｉｎｇ ｔａｂｌｅｔｓ）、スイーツ、チューインガム、カプセル、腸溶タブレット及びカプセル、座薬、マイクロ浣腸（ｍｉｃｒｏ−ｅｎｅｍａｓ）、膣タブレット、膣ゼラチンカプセル、膣トローチ、クリーム、ゲル、軟膏、ローション、タンポン、ナプキン、パッド、融解ストリップ、コンドーム、ペッサリー、スプレー及び医療用栄養製品という形で投与される。該組成物のさらに別の実施形態において、経口投与されるとき、前記少なくとも１つのプロバイオティック細菌株が、１０７から１０１２ＣＦＵ、好ましくは１０９から１０１０ＣＦＵの有効日用量を与える量で存在し、膣又は直腸に投与されるとき、前記少なくとも１つのプロバイオティック細菌株が、１０３から１０１２ＣＦＵ、好ましくは１０５から１０９ＣＦＵの有効日用量を与える量で存在する。 該薬学的組成物の１つの実施形態において、前記少なくとも１つのプロバイオティック細菌株は封入又はコーティングされ、別の実施形態においては、該組成物は、ビタミン、ミネラル及びプレバイオティックス（ｐｒｅｂｉｏｔｉｃｓ）からなる群より選択される添加物を含む。 第５の局面において、本発明は上記組成物を含む衛生製品に関する。１つの実施形態において、前記衛生製品は、タンポン、生理用ナプキン、生理用パッド、ダイヤパー、石けん、シャンプー、ゲル、軟膏、クリーム、スプレー及びローションからなる群より選択される。 第６の局面において、本発明は、少なくとも１つの上記プロバイオティック細菌株、及び／又はＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＨＥＡＬ ９（寄託番号 ＤＳＭ １５３１２）、 Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＨＥＡＬ １９（寄託番号 ＤＳＭ １５３１３）、 Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＨＥＡＬ ９９（寄託番号 ＤＳＭ １５３１６）、 Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ２９９（寄託番号 ＤＳＭ ６５９５）、 Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ２９９ｖ（寄託番号 ＤＳＭ ９８４３）、もしくはその突然変異株、及び／又はその断片もしくは分画の生物学的培養物に関する。 第７の局面において、本発明は、少なくとも１つの上記プロバイオティック細菌株、及び／又はＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＨＥＡＬ ９（寄託番号 ＤＳＭ １５３１２）、 Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＨＥＡＬ １９（寄託番号 ＤＳＭ １５３１３）、 Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＨＥＡＬ ９９（寄託番号 ＤＳＭ １５３１６）、 Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ２９９（寄託番号 ＤＳＭ ６５９５）、 Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ２９９ｖ（寄託番号 ＤＳＭ ９８４３）、もしくはその突然変異株、及び／又はその断片もしくは分画を含む、新規食品に関する。 第８の局面において、本発明は、少なくとも１つの上記プロバイオティック細菌株、及び／又はＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＨＥＡＬ ９（寄託番号 ＤＳＭ １５３１２）、 Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＨＥＡＬ １９（寄託番号 ＤＳＭ １５３１３）、 Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＨＥＡＬ ９９（寄託番号 ＤＳＭ １５３１６）、 Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ２９９（寄託番号 ＤＳＭ ６５９５）、 Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ２９９ｖ（寄託番号 ＤＳＭ ９８４３）、もしくはその突然変異株、及び／又はその断片もしくは分画を含む、フードサプリメントに関する。 １つの実施形態において、前記プロバイオティック細菌株は増殖可能である。別の実施形態においては、不活化又は抑制される。さらに別の実施形態においては、遺伝的に改変され、また別の実施形態においては、殺菌される。 第８の局面において、本発明は上記プロバイオティック細菌株の断片又は分画に関する。発明の説明 本発明は特に、経口投与及び腸での馴化を経由して膣にコロニーを形成できる１又はそれ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ株もしくは近縁のラクトバチルス種を含む組成物に関する。前記組成物は、例えば膣の健康を保存し、膣疾患、酵母性膣炎、尿路感染症、性的感染症、妊娠した女性内の胎児を危険にする感染症を軽減させる。 健康な尿生殖器の（ｕｒｏ−ｇｅｎｉａｌ）微生物叢は、５０種以上の微生物を含む。健康な尿生殖器の細胞は、ラクトバチルスが優勢な細菌バイオフィルム（ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｂｉｏ ｆｉｌｍｓ）によって覆われている。この健康な膣は、膣上皮と微生物叢の相互作用によって維持されている。糞便のフローラ内の病原体は、尿路感染症及び細菌性膣炎の起源である。病原（ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ）の要因の１つは、病原体の上皮への接着能力である。付着素及び受容体部位が、この接着プロセスに関与する。例えば、病原性大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）は上皮表面上でマンノース特異的付着素を有する。いくつかのラクトバチルスは、同様にマンノース特異的付着素を有することが、以前から示されてきた。このメカニズムの利用により、いくつかのプロバイオティックラクトバチルスは、また、病原体の膣及び尿道粘膜といった粘膜表面への接着を防ぎ得、このようにして感染を防いでいる。他の要因は、病原体やその他好ましくない微生物の増殖を抑制するグルコース代謝による膣内の低ｐＨの維持、過酸化水素及びバクテリオシン様生産物の産生である。 本発明は特に、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＶＰＣ５（寄託番号 ＤＳＭ １６７３５）、 Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＶＰＣ４０（寄託番号 ＤＳＭ １６７３６）、 Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＶＰＣ７０（寄託番号 ＤＳＭ １６７３８）、 Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＶＰＣ７１（寄託番号 ＤＳＭ １６７３９）、 Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＶＰＣ７７（寄託番号 ＤＳＭ １６７４０）、 Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＶＰＣ１１１（寄託番号 ＤＳＭ １６７４１）、 Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＶＰＣ１３０（寄託番号 ＤＳＭ １６７４２）、 Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＶＰＣ１７７（寄託番号 ＤＳＭ １６７４３）及びＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＶＰＧ４４（寄託番号 ＤＳＭ １６７３７）（これらは２００４年９月１７日にＤｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨに寄託され、前述のようにアクセッションナンバーが付与された。）、又はその突然変異株に関する。前記株は膣にコロニーを形成する能力を有する。 本発明はまた、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＨＥＡＬ ９（寄託番号ＤＳＭ １５３１２）、 Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＨＥＡＬ １９（寄託番号ＤＳＭ １５３１３）、 Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＨＥＡＬ ９９（寄託番号 ＤＳＭ １５３１６）（これらは２００２年１１月２７日にＤｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨに寄託され、前述のようにアクセッションナンバーが付与された）、又はその突然変異株の細菌株の使用に関する。 本発明はまた、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ２９９（寄託番号 ＤＳＭ ６５９５）及び Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ２９９ｖ（寄託番号 ＤＳＭ ９８４３）（前者は１９９１年７月２日に、後者は１９９５年３月１６日にそれぞれＤｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨに寄託され、前述のようにアクセッションナンバーが付与された）、又はその突然変異株の細菌株の使用に関する。 本発明の細菌株、特に寄託された株に関してここで使用する“その突然変異株”とは、次のように定義される細菌である。 −前記プロバイオティック細菌株と少なくとも８０％のＲＡＰＤ類似性（ピアソンの積率相関係数及び非加重結合法（ＵＰＧＭＡ； ＢｉｏＮｕｍｅｒｉｃｓ ２．５， Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍａｔｈｓ， Ｋｏｒｔｒｉｊｋ， Ｂｅｌｇｉｕｍ）の使用による）を持つクラスターに属し、及び／又は −前記プロバイオティック細菌株に好ましくは少なくとも７５％の制限エンドヌクレアーゼ解析類似性（ピアソンの積率相関係数及び非加重結合法（ＵＰＧＭＡ； ＢｉｏＮｕｍｅｒｉｃｓ ２．５， Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍａｔｈｓ， Ｋｏｒｔｒｉｊｋ， Ｂｅｌｇｉｕｍ）の使用による）を持つクラスターに属し、及び／又は −ヒト膣にコロニーを形成する能力を有し、及び／又は −マンノース特異的な付着素、もしくは、膣内部表面、胃腸管、及び尿道を含む膀胱への細菌の結合を可能とする他の接着メカニズムを有する細菌。 本発明に関してここで使用する用語“プロバイオティック細菌株（単数及び複数）”とは、適切な量が投与されたとき宿主に健康利益をもたらす、生きた微生物の意味である。加えて、その細菌株は、経口摂取されたときは胃腸管の通過を生き延びなければならず、細菌株は膣と直腸に摂取されたときは膣及び直腸それぞれでコロニーを形成しなければならない。 本発明の細菌株に関してここで使用する用語“ヒト膣にコロニーを形成する”とは、膣液及び／又は糞便中のラクトバチルスの生菌数（ｌｏｇ ｃｆｕ／スワブ）が、最初、すなわちどの細菌株も摂取される前のラクトバチルス数と比べて、本細菌株が経口、経直腸または経膣に摂取された後に少なくとも増加するという意味である。本発明の実施形態の詳細な説明ＲＥＡによるジェノタイプの同定 株（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＶＰＣ５（寄託番号 ＤＳＭ １６７３５）、 Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＶＰＣ４０（寄託番号 ＤＳＭ １６７３６）、 Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＶＰＣ７１（寄託番号 ＤＳＭ １６７３９）、 Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＶＰＣ１１１（寄託番号 ＤＳＭ １６７４１）、 Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＶＰＣ１３０（寄託番号 ＤＳＭ １６７４２）、 Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＶＰＣ１７７（寄託番号 ＤＳＭ １６７４３）及びＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＶＰＧ４４（寄託番号 ＤＳＭ １６７３７））は、制限エンドヌクレアーゼ解析−ＲＥＡ−法（Ｓｔａｈｌ Ｍ， Ｍｏｌｉｎ Ｇ， Ｐｅｒｓｓｏｎ Ａ， Ａｈｒｎｅ Ｓ ＆ Ｓｔａｈｌ Ｓ， Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ， ４０：１８９−１９３， １９９０、 そしてＪｏｈａｎｓｓｏｎ， Ｍ−Ｌ， ｅｔ ａｌ ． ， Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ ４５：６７０− ６７５， １９９５によってさらに発展）を通じて、染色体ＤＮＡの切断パターンについて調べられた。概略的にＲＥＡ法は次のように記載され得る：染色体ＤＮＡを、研究している株から調製し、そして、制限エンドヌクレアーゼによって切断した。０．７５μｇの各ＤＮＡを、別々に、３７℃にて、４ｈの間、１０ユニットのＨｉｎｄ ＩＩＩ、Ｃｌａ Ｉ及びＥｃｏ ＲＩで消化した；各エンドヌクレアーゼを別々に使用した。切断されたＤＮＡフラグメントを、サブマージ水平アガローススラブゲル（ｓｕｂｍｅｒｇｅｄ ｈｏｒｉｚｏｎｔａｌ ａｇａｒｏｓｅ ｓｌａｂ ｇｅｌｓ）を用いたゲル電気泳動によって、サイズに応じて分離した。ゲルは、１５０ｍｌの０．９％アガロース（ｕｌｔｒａｐｕｒｅ ＤＮＡ ｇｒａｄｅ； ｌｏｗ ｅｌｅｃｔｒｏ−ｅｎｄｏ ｏｓｍｏｓｉｓ； ＢｉｏＲａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ， Ｒｉｃｈｍｏｎｄ， ＵＳＡ）からなり、スラブゲル（１５０×２３５ｍｍ）としてキャストした。０．２ μｇの高分子量ＤＮＡマーカー（Ｂｅｔｈｅｓｄａ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ， ＭＤ， ＵＳＡ）とともに０．５μｇのＤＮＡ分子量マーカーＶＩ（Ｒｏｃｈｅ， Ｇｅｒｍａｎｙ）をスタンダードとして使用した。最小のバンドゆがみ及び最大のシャープさは、フィコールローディングバッファー（２ｇのフィコール、８ｍｌの水、０．２５％のブロモフェノール）中のサンプルＤＮＡをアプライすることによって達成された。 約６から８℃にて、１８時間、４０Ｖの定電圧でゲルを泳動した。緩衝液（８９ｍＭ Ｔｒｉｓ、２３ｍＭ Ｈ３ＰＯ４、２ｍＭ ＥＤＴＡナトリウム、ｐＨ８．３）は泳動中、再循環した。その後、ゲルを２０分間エチジウムブロマイド（２μｇ／ｍｌ）中で染色し、蒸留水中で脱色し、ＵＶトランスイルミネーター（ＵＶＰ Ｉｎｃ．， Ｓａｎ Ｇａｂｒｉｅｌ， ＵＳＡ）を用いて３０２ｎｍにて視覚化し、写真を撮影した。ゲル電気泳動を行うこの手法は、十分に広く分布し且つ１．２×１０６の分子量まで比較的十分に分離されたバンドを与えた。 本解析の結果は、図４から１０に示した。実施例１ボランティア及び株（Ｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓ ａｎｄ ｓｔｒａｉｎｓ） 膣感染又はどんな腸の疾患にも罹患していない、異なった年齢の１０人の健康な女性が本研究に参加した。本研究被験者は、アンケート調査で、彼女たちの年齢、月経周期及び保健行動についての情報を提供した。ボランティアが最初のサンプルを摂取する前一週間を洗浄期間とし、彼女たちは処方物を含む全ての種類のプロバイオティックを避けた。 本研究の使用した細菌株を表１に示す。これらは、実験室内での培養後の生菌数（Ｖｉａｂｌｅ Ｃｏｕｎｔ ｎｕｍｂｅｒｓ）、オートミール粥の発酵並びに凍結及び解凍への耐性能力といった質によって２３のラクトバチルス群の中から選択された。 最も耐性であった１２株がボランティアへの投与のために選択された；細菌濃度及び培養のためのインキュベーション時間を表１に示した。投与は１０日間行われた。細菌株は、新鮮なＬＣＭ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｒｒｙｉｎｇ ｍｅｄｉｕｍ）（Ｅｆｔｈｙｍｉｏｕ Ｃ， Ｈａｎｓｅｎ ＣＡ． Ａｎ ａｎｔｉｇｅｎｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ． Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ １９６２； １１０： ２５８−２６７）培地から調製した。全量１００ｍｌ内に約１０９の細菌の濃度となるようにした、それぞれの培地の細胞を、遠心分離によって回収し、そしてＭｉｌｌｉｐｏｒｅ−水で１回洗浄した。それからペレットを、被験者へ投与される飲料である、２０ｍｌのオートミルク（ｏａｔ ｍｉｌｋ）（Ｂｅｎｅｖｉｖａ， Ｆｉｎｌａｎｄ）及び８０ｍｌのブルーベリースープ（Ｅｋｓｔｒｏｍｓ， Ｓｗｅｄｅｎ）に溶かした。 第１表．投与のため選択した細菌ラクトバチルス（Ｌ．）株サンプル収集 ボランティアは糞便及び膣液サンプルを集め、それらは研究室に届けられた後３時間以内に寒天プレート上で培養された。サンプリングは、処置の開始時（Ｔ０）、１０日投与した後（Ｔ１）及び投与の終了から７日後（Ｔ２）に行った。 膣サンプルを、細菌の汚染を防止するためにキャップ（ｃａｐ）を通じて膣スワブ（Ｃｏｐａｎ ａｍｉｅｓ ａｇａｒ ｇｅｌ ｓｗａｂｓ； Ｃｏｐａｎ ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ， Ｉｔａｌｙ）を挿入することで採取した。膣スワブを９ｍｌの滅菌リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）ｐＨ７．２中でかきまぜ、そして連続的に希釈した。糞便１ｇを９ｍｌのＰＢＳ中でかきまぜ、そして連続的に希釈した。膣サンプルのそれぞれの希釈のアリコート、及び、糞便サンプルの最後の３段階希釈のアリコートをＲｏｇｏｓａ寒天培地（Ｏｘｏｉｄ ＡＢ， Ｓｏｌｌｅｎｔｕｎａ， Ｓｗｅｄｅｎ）に播き、そしてＢＢＬガスパックシステムの中で３７℃で３日間嫌気的にインキュベートした。 インキュベーション後、糞便及び膣サンプル両方から６コロニーを無作為に採取した。さらに、典型的な形態学的外見のコロニーを探して、見つかったときは追加として採取した。株タイピング（Ｓｔｒａｉｎ ｔｙｐｉｎｇ） 全部で３３８分離株をＲａｎｄｏｍｌｙ Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ＤＮＡ （ＲＡＰＤ）を用いて投与した株と一緒に分類した。これらが、汚染を含まないこと実証するため、Ｒｏｇｏｓａ寒天培地（Ｏｘｏｉｄ）で再び培養した。 ＰＣＲ増幅に用いたプライマーは、配列３’− ＡＣＧ ＣＧＣ ＣＣＴ − ５’を持つ９塩基長（Ｓｃａｎｄｉｎａｖｉａｎ Ｇｅｎｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ＡＢ， Ｋｏｐｉｎｇ， Ｓｗｅｄｅｎ）であった。次に、Ｑｕｅｄｎａｕ Ｍ， Ａｈｒｎｅ Ｓ， Ｐｅｔｔｅｒｓｓｏｎ ＡＣ， Ｍｏｌｉｎ Ｇ． Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｌｉｎｉｃａｌｌｙ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｓｐｅｃｉｅｓ ｏｆ Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｗｉｔｈ ｉｎ １ ｄａｙ ｗｉｔｈ Ｒａｎｄｏｍ Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ＤＮＡ （ＲＡＰＤ） Ｃｕｒｒ． Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ． １９９８； ３６： ３３２−６に以前記述されたように、ＰＣＲ増幅及びアガロースゲル電気泳動を行った。１．５ ｍＭ ＭｇＣｌ２ （Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ ＧｍｂＨ， Ｍａｎｎｈｅｉｍ， Ｇｅｒｍａｎｙ）、 ０．２ ｍＭの各ヌクレオチド（Ｒｏｃｈｅ）及び２．５ユニットのＴａｑ ＤＮＡ ポリメラーゼ （Ｒｏｃｈｅ）とともにＰＣＲ緩衝液を含む５０μｌの全反応量内で、１μｌのＰＣＲ鋳型（ＰＣＲ−ｔｅｍｐｌａｔｅｓ）を使用した。ＰＣＲ増幅は次の温度プロファイルに従った：９４℃で４５秒、３０℃で１２０秒、７２℃で６０秒、を４サイクル行い、次に９４℃で５秒、３６℃で３０秒（各サイクルごとに１秒延長）、７２℃で３０秒、を２６サイクル行った。ＰＣＲセッション（ｓｅｓｓｉｏｎ）は７２℃で１０分で終了し、次に４℃で冷却した。生成物はアガロース電気泳動で可視化し、そしてＲＡＰＤ−ゲルのフォトネガティブ（ｐｈｏｔｏ−ｎｅｇａｔｉｖｅｓ）をＨｅｗｌｅｔｔ Ｐａｃｋａｒｄ ＳｃａｎＪｅｔ ５３００Ｃによってスキャンし３００ｄｐｉの解像度でコンピューターへ取り込んだ。そしてゲルイメージを、ピアソンの積率相関係数（ｒ）及び非加重結合法（ＵＰＧＭＡ）を用いたＧｅｌＣｏｍｐａｒ ４．２ （Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍａｔｈｓ， Ｋｏｒｔｒｉｊｋ， Ｂｅｌｇｉｕｍ）により解析し、分類した。株同定（Ｓｔｒａｉｎ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ）ＲＥＡ−制限エンドヌクレアーゼ解析 投与された株とともに、３６分離株をＲＡＰＤ分類（ＲＡＰＤ−ｇｒｏｕｐｉｎｇ）から選択し、そしてさらに、被験者の糞便及び膣サンプル内の内在性株であることを保証するためにＲＥＡ（制限エンドヌクレアーゼ解析）により同定した。 染色体ＤＮＡの調製は、以前に述べられた手順（Ｕｌｒｉｃｈ ＲＬ， Ｈｕｇｈｅｓ ＴＡ． Ａ ｒａｐｉｄ ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ ｆｏｒ ｉｓｏｌａｔｉｎｇ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ ＤＮＡ ｆｒｏｍ Ｌａｃｔｏ− ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｅｃｉｅｓ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｇｒａｍ−ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｂａｃｔｅｒｉａ． Ｌｅｔｔ Ａｐｐｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ ２００１； ３２： ５２−５６）のように行った。ゲル電気泳動は、Ｊｏｈａｎｓｓｏｎら （Ｊｏｈａｎｓｓｏｎ ＭＬ， Ｑｕｅｄｎａｕ Ｍ， Ａｈｒｎｅ Ｓ， Ｍｏｌｉｎ， Ｇ． Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ｂｙ ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ ｅｎｄｏｎｕｃｌｅａｓｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ ＤＮＡ ｕｓｉｎｇ ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌ ａｇａｒｏｓｅ ｇｅｌ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ． Ｉｎｔ Ｊ Ｓｙｓｔ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ １９９５； ４５： ６７０−５）による、公知のプロトコールに従った。 ＤＮＡ（０．７５μｇ）を、別々に、３７℃にて４時間、１０ユニットのＨｉｎｄ ＩＩＩ及びＥｃｏＲＩ（Ｒｏｃｈｅ）で消化した。サブマージ水平０．９％アガロース（Ｈｉｇｈ Ｓｔｒｅｎｇｔｈ Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｇｒａｄｅ Ａｇａｒｏｓｅ： ｌｏｗ ｅｌｅｃｔｒｏ−ｅｎｄｏ ｏｓｍｏｓｉｓ， Ｂｉｏ−Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ， ＣＡ， ＵＳＡ）スラブゲル（１５０×２３５ｍｍサイズ）を用いた。０．２μｇ量の高分子ＤＮＡマーカー（Ｇｉｂｃｏ， Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ， Ｓｗｅｄｅｎ）とともに０．５μｇのＤＮＡ分子量マーカーＶＩ（Ｒｏｃｈｅ）をスタンダードとして使用した。ゲルを、５℃にて、１８時間、４０Ｖの定電圧で泳動した。その後、バンドはＵＶトランスイルミネーター（ＵＶＰ Ｉｎｃ．， Ｓａｎ Ｇａｂｒｉｅｌ，ＣＡ， ＵＳＡ）を用いて３０２ｎｍにて視覚化し、写真を撮影した。結果 １０日処置した後（Ｔ１）及び投与の終了から１週間後（Ｔ２）のどちらにおいても、１０被験者のうち８人から、投与された５株が回収された。Ｔ１において再分離された株は、Ｌ．ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＶＰＣ１７７、Ｌ．ｇａｓｓｅｒｉ ＶＰＧ４４及びＬ．ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＨＥＡＬ １９であり、一方、Ｌ．ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＨＥＡＬ ９９及びＬ．ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＨＥＡＬ ９はＴ１及びＴ２両方で回収された（表２）。 第２表．被験者（Ｓ）の膣及び糞便サンプル内に見つかった再分離株。括弧内の“ｄ”はその株が無作為に採取したコロニーから再分離されたことを示す（すなわち、その株は全ラクトバチルスフローラの優勢部であることを表す）。ＲＡＰＤ−Ｒａｎｄｏｍｌｙ Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ＤＮＡ （ＲＡＰＤ） 最も興味深い細菌株をまた、Ｊｏｈａｎｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ １９９５ Ｒａｎｄｏｍｌｙ Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ＤＮＡ （ＲＡＰＤ） ｆｏｒ ｒａｐｉｄ ｔｙｐｉｎｇ ｏｆ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ｓｔｒａｉｎｓ． Ｌｅｔｔ． Ａｐｐｌ． Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２１ ： １５５−１５９に記載の、ＰＣＲに基づく手法であるＲａｎｄｏｍｌｙ Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ＤＮＡ （ＲＡＰＤ）に次のような修正を加えたものにより、解析した。粗製の細胞抽出物を、ＭＲＳ寒天プレートで純粋培養した３から５コロニーから調製した。純粋培養の細胞を２回、１ｍｌの滅菌Ｍｉｌｌｉ−Ｑ水で洗い、そしてガラスビーズ（直径２ｍｍ）を入れたエッペンドルフチューブ内でエッペンドルフミキサー（５４３２； Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ， Ｈａｍｂｕｒｇ Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて１０分間破壊した。使用したプライマーは、配列５’− ＣＣＧＣＡＧＣＣＡＡ − ３’と１５μＭの濃度を有した。ＱｉａｇｅｎのＴａｑマスターミックス（ｍａｓｔｅｒｍｉｘ）をＰＣＲ反応に使用した。ゲルのバンドパターンをピアソンの積率相関係数（ｒ）及び非加重結合法（ＵＰＧＭＡ）を用いたＢｉｏＮｕｍｅｒｉｃｓ ２．５ （Ａｐｐ− ｌｉｅｄ Ｍａｔｈｓ， Ｋｏｒｔｒｉｊｋ， Ｂｅｌｇｉｕｍ）により、解析した。ＲＡＰＤパターンのコンピュータークラスター解析（Ｔｈｅ ｃｏｍｐｕｔｅｒｉｚｅｄ ｃｌｕｓｔｅｒ ａｎａｌｙｓｉｓ）を、視覚的な比較と併用した。 上述のＲＡＰＤ手法の使用により、表１のＬ．ｃｒｉｓｐａｔｕｓ８株及びＬ．ｇａｓｓｅｒｉ１株において、８０％の類似性を有する株を含む２クラスターが同定できた（図１の樹形図参照）。このクラスターに含まれる株はお互いの突然変異株と見なされ、そして類似の性質を有すると予測される。１つのクラスターはＶＰＣ７０、ＶＰＣ７１及びＶＰＣ５株を含み、もう１つのクラスターはＶＰＣ１７７、ＶＰＣ４０及びＶＰＣ１１１株を含む。例えばＶＰＣ１７７株は、膣内に経口投与後に見つけることができ、ゆえに、おそらく同一のＲＡＰＤクラスター内の他株もまた、そういった能力を有する。結論 本実験は、選択したＬ．ｐｌａｎｔａｒｕｍ株の、経口投与を経て、膣にコロニーを形成及び腸で馴化するという、予期できない能力を示している。本結果は、短期間投与された比較的低い用量（ｌｏｗ ｄｏｓｅｓ）のプロバイオティックスで達成されたこと、及びＬ．ｐｌａｎｔａｒｕｍ株は、膣でより典型的な株（すなわち、より頻繁に膣から分離される種及び株）と比較されたことが指摘されるべきである。実施例２マンノース接着の測定としての酵母の凝集 この実験において、細菌の酵母細胞を凝集する能力を、酵母細胞及び細菌の可視の沈殿として目視で決定した。洗浄した細菌を２×１０１０細胞／ｍｌのＰＢＳ（ｐＨ７．２）の濃度に懸濁した。２．５％（ｗｔ／ｖｏｌ）パン酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）をＰＢＳ又は０．１２５％（ｗｔ／ｖｏｌ）Ｄ−マンノースを含むＰＢＳに懸濁した溶液を、顕微鏡スライド（ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ ｓｌｉｄｅ）上の等量の細菌溶液へ加えた。この細菌及び酵母溶液をスライドを穏やかに振動させて混合し、そして凝集した酵母及び細菌細胞の沈殿が現れるまで回数（ｔｈｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｔｕｒｎｓ）を計算した。この回数を、マンノースを含む溶液と含まない溶液間で比較した。可視の沈殿が現れるまで、回数がマンノースを含む溶液と含まない溶液間で１０倍以上異なるかどうかで、酵母の凝集をマンノース感受性によって分類した。 実験の間、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＶＰＣ１７７及びＶＰＣ７０はマンノース感受性様式で酵母を凝集する能力を有することが示された。マンノース感受性酵母凝集は、ヒト大腸ガン細胞株であるＨＴ−２９細胞へ接着する能力と相関することが、以前に示され（Ａｄｌｅｒｂｅｒｔｈ， Ｉ．， Ａｈｒｎｅ， Ｓ．， Ｊｏｈａｎｓｓｏｎ， Ｍ−Ｌ．， Ｍｏｌｉｎ， Ｇ．， Ｈａｎｓｏｎ， Ｌ−Ａ．， ａｎｄ Ｗｏｌｄ， Ａ．Ｅ． （１９９６） ． Ａ ｍａｎｎｏｓｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｄｈｅｒｅｎｃｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｉｎ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ｃｏｎｆｅｒｒｉｎｇ ｂｉｎｄｉｎｇ ｔｏ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｃｏｌｏｎｉｃ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ ＨＴ−２９， Ａｐｐｌ． Ｅｎｖｉｒｏｎ． Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ． ， ６２， ２２４４−２２５１．）、従って、このことは、腸内での本細菌のコロニー形成及び残留性を促進する要因である。ゆえに、この本細菌の特徴はまた、膣及び泌尿器内でのコロニー形成のために重要であり、その結果、尿路疾患性のＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ菌株と競合する機構となるというのが、真実である可能性は非常に高い。このマンノース特異的接着メカニズムという特徴は、以前にもまたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ２９９（寄託番号 ＤＳＭ ６５９５）及び Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ２９９ｖ（寄託番号 ＤＳＭ ９８４３）においても示されている。実施例３ 本実験の以下の目的は４ラクトバチルス株の腸及び膣内での馴化を、凍結乾燥形の乳酸菌製剤を経口摂取した後に糞便及び膣液内のその存在を研究することで、調査することである。 実験はｉｎ ｖｉｖｏのヒトにおいて実行され、ｉｎ ｖｉｔｒｏ試験でも動物試験でもなく、ヒトに投与されたときの生存の程度を反映していることを強調することが重要である。これらの細菌の、培養後に直接投与したとき腸内で馴化に至る能力は、より早期の研究で記述されている（Ｍｏｒｅｎｏ， Ａｌｅｊａｎｄｒａ Ｖａｓｑｕｅｚ ２００４ ＰｈＤ ｔｈｅｓｉｓ ： Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃｓ ｏｆ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｐ． ｏｆ ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ Ｆｏｏｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ； Ｌｕｎｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ．）。前記研究では、終夜培養された新鮮な細菌細胞が用いられた。しかし、実際の製品では凍結乾燥された製品を使用するのがより便利であろう。ゆえに、本実験においては凍結乾燥製剤を選択した。 第一の目標は、オープン試験（ｏｐｅｎ ｓｔｕｄｙ）において、膣起源である４ラクトバチルス株の経口摂取後の、糞便及び膣液内のそれらの株の存在の調査である。 尿路感染症といった多くの膣内の疾患は直腸粘膜からあがってくるので、糞便及び膣液内の健康的な（ｈｅａｌｔｈｙ）ラクトバチルスの生菌数の増加を見られれば有益である。もし本発明の健康的な細菌株が、膣に加えて直腸に影響するならば、本発明の健康的なラクトバチルス細菌は直腸内の望ましくない細菌を抑制するであろうし、それによって直腸よりあがってくる膣内の疾患を回避するであろう。材料と方法実験計画本実験はオープン試験であり、そして被験者の一群において実施された。本実験は８の期間に分けられる： １．１４日間の洗浄期間（１日目から１４日目） ２．１４日間の経口によるＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＶＰＣ１１１の摂取期間（１５日目から２８日目） ３．１４日間の洗浄期間（２９日目から４２日目） ４．１４日間の経口によるＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＶＰＧ４４の摂取期間（４３日目から５６日目） ５．１４日間の洗浄期間（５７日目から７０日目） ６．１４日間の経口によるＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＶＰＣ１７７の摂取期間（７１日目から８４日目） ７．１４日間の洗浄期間（８５日目から９８日目） ８．１４日間の経口によるＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＨＥＡＬ ９の摂取期間（９９日目から１１２日目）被験者及び募集（Ｓｕｂｊｅｃｔｓ ａｎｄ ｒｅｃｒｕｉｔｍｅｎｔ）３６人の、１８歳から６５歳の健康な女性は、ルンドにあるＩｄｅｏｎ ａｎｄ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｅｎｔｒｅ （Ｌｕｎｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ） の従業員へ送付された情報により集められた。重度の胃腸疾患のための現行処置及び重度の膣疾患のための現行処置の製剤に含まれるどんな成分にも不耐性又はアレルギーとして知られたプロビ エービー（Ｐｒｏｂｉ ＡＢ）の従業員は除外された。 実験製品は、凍結乾燥したＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＶＰＣ１７７、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＶＰＣ１１１、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＨＥＡＬ ９及びＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＶＰＧ４４をそれぞれ含んでいた。スクロース、マルトデキストリン（ｍａｌｔｏｄｅｘｔｒｉｎｅ）及び加水分解されたゼラチンは、凍結保護物質として加えられた。 毎日の摂取は２×１ｇの凍結乾燥したラクトバチルス（およそ１×１０９ ｃｆｕ／日）の経口であった。本用量は朝及び夕に処置され、そして食事に付随して摂取された。本製品はサシェ（ｓａｃｈｅｔｓ）で供給された。食事の調節（Ｄｉｅｔａｒｙ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｓ） １日目から１１３日目まで、本被験者はプロバイオティック細菌を含む製品を摂取することが許されなかった。各被験者には、研究期間中に消費が許されないプロバイオティック製品のリストが与えられた。これは、他のプロバイオティック細菌が本実験を干渉できないことを確実にするために行われた。併用療法（Ｃｏｎｃｏｍｉｔａｎｔ ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎ）全ての併用療法（Ｃｏｎｃｏｍｉｔａｎｔ ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎ）は、ケースリポートフォーム（Ｃａｓｅ Ｒｅｐｏｒｔ Ｆｏｒｍ；ＣＲＦ）及び日記で注目された。 研究中の除外判断基準は、連続して＞４用量（２日）の摂取をしなかった、又は研究のそれぞれの摂取期間内に＞８用量（４日）の摂取をしなかった被験者、食事規制に従わなかった被験者、１日目から１１２日目の間に重度の胃腸疾患のための一連の医療処置が始まった被験者（主要な研究員の慎重さのため）、及び本研究を中止することを望んだ被験者であった。 糞便及び膣サンプルは１５、２９、４３、５７、７１、８５、９９及び１１３日目に提出された。１５、４３、７１及び９９日目のサンプルは、その期間の実験製品の最初の服用の前に集められた。前記サンプルは、解析のために提出される前の１８時間以内に集められ、そしてこの期間中冷蔵庫内で保管された。このサンプルはラクトバチルスの解析がなされた。 膣サンプルは、細菌の汚染を防止するためにキャップ（ｃａｐ）を通じて膣スワブ（ｖａｇｉｎａｌ ｓｗａｂ）（Ｃｏｐａｎ ａｍｉｅｓ ａｇａｒ ｇｅｌ ｓｗａｂｓ； Ｃｏｐａｎ ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ， Ｂｒｅｓｃｉａ， Ｉｔａｌｙ）を挿入することにより集められた。前記サンプルは、解析のために提出される前の３時間以内に集められ、そしてこの期間中冷蔵庫内で保管された。 前記サンプルはラクトバチルスフローラに関して（Ｊｏｈａｎｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， １９９８に従って）微生物学的に解析された（Ｒｏｇｏｓａ寒天培地、嫌気的条件、３７℃で３日間）。異なるラクトバチルスは、Ｊｏｈａｎｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ｌｅｔｔ． Ａｐｐｌ． Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ． １９９５； ２１： １５５−１５９に従ったＲａｎｄｏｍｌｙ Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ＤＮＡ （ＲＡＰＤ）により同定された。 統計学的な値はウィルコクソン サインド ランクテスト（Ｗｉｌｃｏｘｏｎ ｓｉｇｎｅｄ ｒａｎｋｓ ｔｅｓｔ）に従って計算された。第３表及び４表を参照。結果 前記３６人の女性は、期間１及び２（ＷＯ ＋ ＶＰＣ１１１）に参加した３１人、期間３及び４（ＷＯ ＋ ＶＰＧ４４）に参加した３４人、期間５及び６（ＷＯ ＋ ＶＰＣ１７７）に参加した２８人並びに期間７及び８（ＨＥＡＬ９）に参加した３１人を含む。２５人の女性がすべての研究期間に参加した。第３表．実験製品を２週間摂取する前及び後の糞便サンプル中のラクトバチルス（平均（最小−最大））。計算可能にするため、検出レベルの下限値は３．０に、上限値は９．０に設定した。第４表．実験製品を２週間摂取する前及び後の膣サンプル中のラクトバチルス（平均（最小−最大））。計算可能にするため、膣サンプルの検出レベルの下限値は２．０に設定した。 Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＶＰＣ１１１及びＶＰＣ１７７の２株は、糞便フローラ内のトータルのラクトバチルスの有意な増加を起こした。加えて、膣液中のトータルのラクトバチルスの有意な増加は、ＶＰＣ１７７を経口摂取した後に観察された。このように、プロバイオティック細菌Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＶＰＣ１１１及びＶＰＣ１７７を経口摂取した後に糞便中のラクトバチルスのトータルの増加が観察されることに注目するのは、非常に興味深い。トータルのラクトバチルスの有意な増加はまた、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＶＰＣ１７７を経口摂取した後に膣液内に観察される。従って、健康的なラクトバチルスによって、膣又は直腸内での有益な効果を達成するために、前記株の座薬又は膣挿入による摂取は必要でない。あるラクトバチルス；（ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＶＰＣ１１１及びＶＰＣ１７７といったラクトバチルス）の経口摂取は、糞便内と同様に膣液内でのラクトバチルスのトータルの増加がもたらされることが、今示された。 糞便及び膣の両フローラにおけるＬ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＨＥＡＬ ９による効果の不足は、トータルのラクトバチルスの最初の高濃度が原因であり得る。ＶＰＣ１７７の摂取後の洗浄期間は十分に長くなかったと推測され得る。しかし、３１人中２７人の女性から、Ｊｏｈａｎｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ｌｅｔｔ． Ａｐｐｌ． Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ． １９９５； ２１： １５５−１５９に従ったＲａｎｄｏｍｌｙ Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ＤＮＡ （ＲＡＰＤ）により、Ｌ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＨＥＡＬ ９が回収され得たことは、注目に値する。他の実験株もまた、摂取後に（ＲＡＰＤ）で検査された女性から回収された。 結論として、糞便及び膣液内のトータルのラクトバチルス濃度の有意な増加は、前記ラクトバチルスが活動的であり、そして馴化していることを示す。各摂取期間中に供給されたプロバイオティック材料（ｍａｔｅｒｉａｌ）は他に無いため、摂取されたプロバイオティック細菌株が本効果を達成したに違いない。 このように、膣ラクトバチルス株、すなわち膣起源として分離された株は、凍結乾燥された製品として経口摂取されることで、胃腸管の通過を生き延びることができ、そして膣で再びコロニーを形成できる。特にＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＶＰＣ１７７は、膣内のラクトバチルスのトータルの濃度を増加させる。これは非常に驚くべきことである。なぜなら、分離された膣のラクトバチルス株の安定性は、非常に高感受性であるため、非常に低いことが知られているからである。膣の健康における、本発明の細菌株の有益な効果を増加させるための、経口及び経膣両方の細菌株の投与は、膣を健康（あるいはそれ以上）に保つために役立つであろう。図１は、いくつかの最も好ましいプロバイオティック細菌株のＲＡＰＤ解析に基づいた樹形図を示す。図２ＡからＩは、図１の樹形図の基となったいくつかの最も好ましいプロバイオティック細菌株のＲＡＰＤパターンを示す。図３Ａは、実施例３の、４つの異なる実験製品の摂取後のｌｏｇ ｃｆｕ／ｇ糞便 を示す。図３Ｂは、実施例３の、４つの異なる実験製品の摂取後のｌｏｇ ｃｆｕ／スワブ（膣液中） を示す。図４は、Ｌ． ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＶＰＣ１７７株の染色体ＤＮＡを制限酵素Ｈｉｎｄ ＩＩＩ（レーン２）、Ｃｌａ Ｉ（レーン３）、Ｅｃｏ ＲＩ（レーン４）で切断して得られた分離ＤＮＡ断片を示す。分子量ＤＮＡマーカーをスタンダードとして用いた（レーン１及び５）。図５は、Ｌ． ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＶＰＣ５株の染色体ＤＮＡを制限酵素Ｈｉｎｄ ＩＩＩ（レーン２）、Ｃｌａ Ｉ（レーン３）、Ｅｃｏ ＲＩ（レーン４）で切断して得られた分離ＤＮＡ断片を示す。分子量ＤＮＡマーカーをスタンダードとして用いた（レーン１及び５）。図６は、Ｌ． ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＶＰＣ４０株の染色体ＤＮＡを制限酵素Ｈｉｎｄ ＩＩＩ（レーン２）、Ｃｌａ Ｉ（レーン３）、Ｅｃｏ ＲＩ（レーン４）で切断して得られた分離ＤＮＡ断片を示す。分子量ＤＮＡマーカーをスタンダードとして用いた（レーン１及び５）。図７は、Ｌ． ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＶＰＣ７１株の染色体ＤＮＡを制限酵素Ｈｉｎｄ ＩＩＩ（レーン２）、Ｃｌａ Ｉ（レーン３）、Ｅｃｏ ＲＩ（レーン４）で切断して得られた分離ＤＮＡ断片を示す。分子量ＤＮＡマーカーをスタンダードとして用いた（レーン１及び５）。図８は、Ｌ． ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＶＰＣ１１１株の染色体ＤＮＡを制限酵素Ｈｉｎｄ ＩＩＩ（レーン２）、Ｃｌａ Ｉ（レーン３）、Ｅｃｏ ＲＩ（レーン４）で切断して得られた分離ＤＮＡ断片を示す。分子量ＤＮＡマーカーをスタンダードとして用いた（レーン１及び５）。図９は、Ｌ． ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＶＰＣ１３０株の染色体ＤＮＡを制限酵素Ｈｉｎｄ ＩＩＩ（レーン２）、Ｃｌａ Ｉ（レーン３）、Ｅｃｏ ＲＩ（レーン４）で切断して得られた分離ＤＮＡ断片を示す。分子量ＤＮＡマーカーをスタンダードとして用いた（レーン１及び５）。図１０は、Ｌ． ｇａｓｓｅｒｉ ＶＰＧ４４株の染色体ＤＮＡを制限酵素Ｈｉｎｄ ＩＩＩ（レーン２）、Ｃｌａ Ｉ（レーン３）、Ｅｃｏ ＲＩ（レーン４）で切断して得られた分離ＤＮＡ断片を示す。分子量ＤＮＡマーカーをスタンダードとして用いた（レーン１及び５）。 Lactobacillus crispatus VPC111(寄託番号 DSM 16741)、Lactobacillus crispatus VPC177(寄託番号 DSM 16743)、Lactobacillus gasseri VPG44(寄託番号 DSM 16737)、及びヒト膣にコロニーを形成する能力を有するその突然変異株からなる群から選択されるプロバイオティック細菌株を含む経口組成物。 キャリア物質を含む、請求項１に記載の組成物。 食品である、請求項１又は２に記載の組成物。 フードサプリメントである、請求項１又は２に記載の組成物。 前記キャリア物質が、オートミール粥、乳酸発酵食品、レジスタントスターチ、食物繊維、イヌリン、炭水化物、タンパク質及び糖タンパク質からなる群より選択される、請求項２から４のいずれか１項に記載の組成物。 前記食品が、パン、チーズ、ヨーグルト、ジュース、ヘルスバー(health bars)、スプレッド(spreads)、ビスケット及びシリアルからなる群より選択される、請求項３又は５に記載の組成物。 少なくとも１つの前記プロバイオティック細菌株が封入又はコーティングされている、請求項２から６のいずれか１項に記載の組成物。 少なくとも１つの前記プロバイオティック細菌株が、消費されるときに有効日用量である１０７から１０１２ＣＦＵ、好ましくは１０９から１０１０ＣＦＵを与える量で存在する、請求項２から６のいずれか１項に記載の組成物。 薬学的組成物である、請求項１又は２に記載の組成物。 前記キャリア物質が、少なくとも１つの薬学的に許容されるキャリアである、請求項９に記載の組成物。 タブレット、吸引タブレット(sucking tablets)、スイーツ、チューインガム、カプセル、腸溶タブレット、及びカプセル並びに医療用栄養製品の形態で投与される、請求項９又は１０に記載の組成物。 経口投与される、少なくとも１つの前記プロバイオティック細菌株が有効日用量である１０７から１０１２ＣＦＵ、好ましくは１０９から１０１０ＣＦＵを与える量で存在する、請求項９から１１のいずれか１項に記載の組成物。 少なくとも１つの前記プロバイオティック細菌株が封入又はコーティングされている、請求項９から１２のいずれか1項に記載の組成物。 ビタミン、ミネラル及びプレバイオティックス(prebiotics)からなる群より選択される添加物を含む、請求項１から１２に記載の組成物。 Lactobacillus crispatus VPC111(寄託番号 DSM 16741)、Lactobacillus crispatus VPC177(寄託番号 DSM 16743)、Lactobacillus gasseri VPG44(寄託番号 DSM 16737)、及びヒト膣にコロニーを形成する能力を有するその突然変異株からなる群から選択されるプロバイオティック細菌株の生物学的培養物。 Lactobacillus crispatus VPC111(寄託番号 DSM 16741)、Lactobacillus crispatus VPC177(寄託番号 DSM 16743)、Lactobacillus gasseri VPG44(寄託番号 DSM 16737)、及びヒト膣にコロニーを形成する能力を有するその突然変異株からなる群から選択されるプロバイオティック細菌株を含む食品。 Lactobacillus crispatus VPC111(寄託番号 DSM 16741)、Lactobacillus crispatus VPC177(寄託番号 DSM 16743)、Lactobacillus gasseri VPG44(寄託番号 DSM 16737)、及びヒト膣にコロニーを形成する能力を有するその突然変異株からなる群から選択されるプロバイオティック細菌株を含むフードサプリメント。 細菌性膣炎、ウイルス性膣炎、酵母性膣炎、膣内感染症及び尿路感染症の、治療及び/又は予防のための経口薬剤の製造のための、Lactobacillus crispatus VPC111(寄託番号 DSM 16741)、Lactobacillus crispatus VPC177(寄託番号 DSM 16743)、Lactobacillus gasseri VPG44(寄託番号 DSM 16737)、Lactobacillus plantarum HEAL 9(寄託番号 DSM 15312)、Lactobacillus plantarum HEAL 19(寄託番号 DSM 15313)、Lactobacillus plantarum HEAL 99(寄託番号 DSM 15316)、及びヒト膣にコロニーを形成する能力を有するその突然変異株からなる群から選択されるプロバイオティック細菌株の使用。