生命科学関連特許情報
| タイトル： | 公開特許公報(A)_ハイブリダイゼーション装置および方法 |
| 出願番号： | 2005021513 |
| 年次： | 2005 |
| IPC分類： | 7,C12M1/00,C12N15/09,C12Q1/68,G01N33/53,G01N33/566 |
特許情報キャッシュ
椙山 高広 JP 2005237378 公開特許公報(A) 20050908 2005021513 20050128 ハイブリダイゼーション装置および方法 キヤノン株式会社 000001007 西山 恵三 100090538 内尾 裕一 100096965 椙山 高広 JP 2004021683 20040129 7C12M1/00C12N15/09C12Q1/68G01N33/53G01N33/566 JPC12M1/00 AC12Q1/68 AG01N33/53 MG01N33/566C12N15/00 A 21 1 ＯＬ 12 4B024 4B029 4B063 4B024AA11 4B024AA19 4B024AA20 4B024CA01 4B024CA09 4B024HA12 4B029AA07 4B029BB20 4B029CC01 4B029FA15 4B063QA01 4B063QQ42 4B063QR32 4B063QR55 4B063QR84 4B063QS32 4B063QS39 4B063QX10 本発明は、プローブ核酸が固定された核酸チップを用いて、試料核酸とプローブ核酸とをハイブリダイズさせるためのハイブリダイゼーション装置に関するものである。 近年マイクロアレイ、ＤＮＡチップ等の試験片を用いた遺伝子解析が行われている。スライドガラスやシリコン基板などからなる基板の表面に多数のＤＮＡプローブをプローブスポットとしてマトリクス上に配置固定したＤＮＡチップと、蛍光色素などで標識付けられたＤＮＡなどの試料とをハイブリダイゼーション条件下で接触させる。検出体（ＤＮＡチップ）及び試料に互いにハイブリダイゼーションする核酸同士が含まれていれば、検出体に標識物質がプローブ核酸を介して固定される。そして検出体上のどこに標識物質が存在するかを検出することにより、ハイブリダイズした核酸の種類を特定することができるものである（例えば、特許文献１参照）。 図８はＤＮＡチップを用いた従来のハイブリダイゼーション装置の説明図である。ＤＮＡチップ１１上方にはチャンバー１２が設置されており、ＤＮＡチップ１１とチャンバー１２の間には微小な隙間が設けられている。試料ＤＮＡ溶液注入手段１４によってＤＮＡチップ１１上に試料ＤＮＡ溶液が注入されると試料ＤＮＡ溶液はＤＮＡチップ１１上の各ＤＮＡスポット上に拡散する。その後ヒーター１３により試料ＤＮＡ溶液が所定の温度に加熱されハイブリダイゼーションを行う。その後ＤＮＡチップを洗浄してハイブリダイゼーションしなかった不要な物質を洗浄する。その後ハイブリダイゼーション検出装置を使用してハイブリダイゼーション検出を行っている。 ところが試料ＤＮＡ溶液をＤＮＡチップ上に注入する際、プローブ領域全体にハイブリダイゼーション溶液が拡散していない、あるいはプローブ領域に泡が付着してしまうなどの場合はハイブリダイゼーション反応を起こすことができないスポットが発生し、正しい結果を得ることができなくなる。 またハイブリダイゼーション反応後に洗浄を行う際洗浄液が流れない領域や泡の付着が発生する場合は、洗浄されないスポットが発生し、バックグラウンドノイズが除去されずハイブリダイゼーション検出の際ノイズとなってしまい正確な結果を得ることができなくなる。 そこで試料ＤＮＡ溶液のプローブＤＮＡスポットへの拡散、洗浄液による洗浄を確実に行い、確実なハイブリダイゼーション反応を実施して精度の良い検査を行うことができるハイブリダイゼーション装置を提供することが望まれていた。特開平１１−１８７９００号公報 そこで試料ＤＮＡ溶液のプローブＤＮＡスポットへの拡散、洗浄液による洗浄を確実に行い、確実なハイブリダイゼーション反応を実施して精度の良い検査を行うことができるハイブリダイゼーション装置を提供することが望まれていた。 本発明に係るハイブリダイゼーション装置は、担体表面にプローブ核酸が固定された核酸チップを用いて、試料核酸と前記プローブ核酸とをハイブリダイゼーション反応させるためのハイブリダイゼーション装置であって、 前記担体表面に液体を供給する供給手段と、前記担体表面の状態を観察する観察手段を備えることを特徴とする。 ハイブリダイゼーション反応は、前記担体表面に液体を供給するための空隙を形成するチャンバー部材を用いて行なわれるものであり、前記供給手段は該チャンバー部材に設けられた注入口を介して空隙に液体を注入するための注入手段であるとよい。 前記観察手段が前記供給された液体の存在する状態を２次元画像として検出する液検出手段であるとよい。 前記ハイブリダイゼーション反応を検出するためのハイブリダイゼーション検出手段を備えると好ましく、前記液検出手段が前記ハイブリダイゼーション検出手段を兼ねることがより好ましい。 また、前記液検出手段あるいは前記ハイブリダイゼーション検出手段による検出は、前記プローブ担体のプローブ核酸固定面の反対面側から行われることも好ましい。 また、前記液検出手段による検出結果に基づいて前記試料溶液の拡散状態を判断する判断手段を有することが好ましい。 また、前記試料溶液の拡散状態判断結果と前記ハイブリダイゼーション検出手段によるハイブリダイゼーション検出結果とを処理するための制御手段を有することが好ましい。 また、前記液体が、試料核酸を含む試料溶液、ハイブリダイゼーション反応後に前記空間を洗浄する洗浄液であるとよい。 前記検出手段による検出結果から前記核酸チップ表面の洗浄状態を判断することが好ましい。 前記担体表面に供給された液体を加熱するための加熱手段を有するとよい。 前記担体表面に供給された液体を攪拌するための攪拌手段を有するとよい。 前記ハイブリダイゼーション反応は、前記担体表面に液体を供給するための空隙を形成するチャンバー部材を用いて行なわれるものであり、前記供給部の先端は該チャンバー部材に設けられた注入口に連通可能に構成されているとよい。 また、本発明に係る方法は、担体表面にプローブ核酸が固定された核酸チップを用いて、試料核酸と前記プローブ核酸とをハイブリダイゼーション反応させるための方法であって、 前記担体表面に液体を供給し、前記供給された液体の存在する状態を検出することを特徴とする。 前記液体の存在する状態の検出が、前記担体表面における液体の拡散状態を２次元像として取得するものであるとよい。 前記取得した２次元像に応じて、均一な拡散状態になるように溶液の供給が行なわれるとよい。 前記２次元像の取得が、ハイブリダイゼーション溶液を供給する際、または洗浄液を供給する際、またはハイブリダイゼーション反応条件下にある溶液に対して行なわれるとよい。 前記取得した２次元像に応じて、前記溶液を攪拌させることも好ましい。 また、本発明に係る核酸の検出方法は、担体表面にプローブ核酸が固定された核酸チップを用いた試料核酸の検出方法であって、 上述のハイブリダイゼーション反応を行うステップと、前記担体上のプローブ核酸と結合した試料核酸を検出する工程を有する。 本発明に係るハイブリダイゼーション装置は、ハイブリダイゼーション反応前に核酸チップ上に注入した試料溶液の拡散状態を検出することが可能であるので、溶液の拡散状態の正確な制御が可能となる。これにより、スポットのプローブ核酸と試料核酸のハイブリダイゼーション反応の制御をより確実に行うことができ、精度の良い検査を行うことができる。 また洗浄時には洗浄液の流れを検出することが可能であるので洗浄を確実に行うことができる。このためバックグラウンドノイズを確実に除去することができ、精度のよい検査を行うことができる。 以下に、本発明の実施の形態を図面を用いて詳細に説明する。 （第１の実施形態） 図１から図３に本発明の第一の実施形態について説明する。 図１は本発明のハイブリダイゼーション装置の構成図を示している。ＤＮＡスポットを有するＤＮＡチップ１上方には透明な部材からなるチャンバー２が設置されており、ＤＮＡチップ１とチャンバー２の間には微小な隙間が設けられている。その上方にはＣＣＤやレンズなどから構成される検出部４、ＤＮＡチップを照明する光源４が設置されており、検出部３の出力は制御手段５に接続されている。またＤＮＡチップ１に試料溶液を注入する注入部６も制御手段５に接続されている。また洗浄液タンク７とＤＮＡチップの間には電磁バルブ８が設置され、制御手段５と接続されている。洗浄液タンク７と反対側には廃液タンク９がＤＮＡチップとつながるように設置されている。またＤＮＡチップ１の下にはヒーター１０が制御手段５と接続されて配置されている。 このような構成において、光源３はチャンバー２を通してＤＮＡチップ１を照明している。注入部６よりＤＮＡチップ１上に試料溶液が注入されると検出部３はＤＮＡチップ１上でのハイブリ液の状態を検出し、その検出結果を制御手段５に送る。制御手段５はハイブリ液の状態を判断し拡散完了と判断すると、ヒーター１０により加熱を行いハイブリダイゼーション反応を開始する。ハイブリダイゼーション反応中もハイブリ液の状態を観察し、その検出結果を制御手段５に送る。制御手段５はハイブリ液の状態を判断し異常なしと判断するとハイブリダイゼーション反応を続行する。所定時間の加熱によりハイブリダイゼーション反応が終了すると、制御手段５は弁８を開きＤＮＡチップ１上に洗浄液を流し、この時検出部３はＤＮＡチップ１上の洗浄液の状態を検出し、その検出結果を制御手段５に送る。制御手段５は洗浄液の状態を判断し、洗浄終了する。 このとき検出部３がＣＣＤ（電荷結合素子）などの撮像素子で構成されている場合は、その検出部を用いて洗浄終了後にハイブリダイゼーション結果を検出することも可能である。 例えば試料ＤＮＡが蛍光物質で標識されている場合は、洗浄終了後に図示しない光源でＤＮＡチップ上に所定の波長の光を照射すると蛍光物質が蛍光し、検出部３でその光を検出することによって、ハイブリダイゼーション結果を得ることも可能である。光源４が蛍光物質を励起することができる波長を発することができれば、光源４を用いて蛍光検出を行ってもよいことはいうまでもない。 また試料ＤＮＡを化学発光方式で検出するような場合は、たとえばあらかじめ試料ＤＮＡに酵素を標識してハイブリダイズさせ、洗浄終了後に発光試薬を注入して発光試薬と酵素を反応させて化学発光を発生させ、その光を検出部３で検出することによってハイブリダイゼーション結果を検出するような構成とすることも可能である。 上記の実施例の検出方法において、図２（ａ），（ｂ）のように検出部３’および光源４‘はＤＮＡチップの下方に配置してもよい。このとき、ＤＮＡチップがスライドガラスなどの透明基材からできていれば、光源４’はＤＮＡチップ１の基材を通してＤＮＡチップ１の表面およびＤＮＡチップ１とチャンバー２の空間を照明し、検出部３’はハイブリ液の状態あるいはハイブリダイゼーション結果を検出することが可能である。 図２（ａ）の場合検出部３’による検出を行う時はヒーター１０は検出部３’による検出に影響を与えない位置に移動する。また図２（ｂ）のように、ヒーター１０はチャンバー２の上に配置し、チャンバー２の上面から加熱を行いハイブリ液を加熱するようにしてもよい。 また、画像の取得はビデオ動画のような動画や、所定期間ごとの連続画像を得ることが好ましい。これにより、液の拡散状態を画像の変化から追うことができる。 また、拡散状態をより正確に判別可能にするために、ハイブリ液を着色するなどの液検出感度を増強するための物質を液体に混入してもよい。 ここではチャンバー２とＤＮＡチップ１は別構成としているが、ハイブリダイゼーションを行うための空間が設けられていればよく、一体構成でもよい。例えば図３（ａ）（ｂ）に示すように、ハイブリダイゼーション反応チャンバー部３２を持つような筐体３１のようなものでもよい。 図４（ａ）（ｂ）（ｃ）は検出部３の検出画像である。ＡはＤＮＡスポット領域を囲むような枠である。Ｌ１は試料溶液の端であり、Ｌ２は試料溶液中の泡を示す。図４（ａ）は適正な拡散状態図である。試料溶液Ｌ１はプローブＤＮＡのスポット領域Ａを覆うように拡がっており、試料溶液と全てのＤＮＡスポットが反応可能な状態である。図４（ｂ）は不十分な拡散状態図である。試料溶液Ｌ１は部分的にＤＮＡスポット領域Ａの内側にあり、ＤＮＡスポット全域に拡散していない。図４（ｃ）は泡が発生した場合の図である。泡Ｌ２がＤＮＡスポット領域Ａの内側に存在する。（ｂ）（ｃ）の場合はハイブリダイゼーション反応できないＤＮＡスポットが存在する。この撮影画像においてＤＮＡスポット領域Ａ、試料溶液Ｌ１、泡Ｌ２の位置関係を制御手段５において比較判断することにより拡散状態の検出を行う。上記の判断方法によって、加熱中のハイブリダイゼーション溶液の状態、あるいは洗浄時の洗浄液の状態の検出を行うことが可能であることはいうまでもない。 ここではプローブＤＮＡのスポット領域を示す枠ＡはＤＮＡチップ１上に表示するようにしたが、検出部３でＤＮＡスポット領域を全て含む位置に表示できればよい。例えばカバー部材に表示したり、ＤＮＡチップが別のプレートに載せられるような構成である場合にはプレートに表示してもよい。また、枠Ａの表示形式は制御部５で認識できる方法であればよく、連続線や破線、或いは複数の点を配置し外形を表示すればよい。或いはＤＮＡチップの基板外形全体を領域と認識するようにしてもよい。またスポット自体が判別できるようにしてもよい。また洗浄液の流路中に別のフローセンサーを設け、そのフローセンサーとの組み合わせで判断するようにしてもよい。 図５（ａ）、（ｂ）、（ｃ）は本実施形態のフローチャートである。 図５（ａ）においてまずステップＳ１で注入部６から試料溶液を注入すると、液はＤＮＡチップ１上で拡散する。ステップＳ２で試料溶液を検出し、ステップＳ３でプローブ全域に拡散したかを判断する。拡散していないと判断すると、ステップＳ４で警告を発し、ステップＳ１に戻り再度試料溶液の注入を行う。拡散したと判断すると、ステップＳ５で泡がないかを判断する。あると判断すると、ステップＳ４にて警告を発し、ステップＳ１に戻り再度試料溶液の注入を行う。ないと判断すると、ステップＳ６に進み、ヒーター１０の加熱を開始する。ステップＳ７ではハイブリ液中の泡の有無を判断し、あると判断するとステップＳ８に進み泡の移動を行い所定時間の加熱を続行し、ステップＳ９に進み加熱を終了する。泡がないと判断すると所定時間加熱を行った後ステップＳ９に進み加熱を終了する。次にステップＳ１０で洗浄液を注入し、ステップＳ１１で洗浄液の状態を検出し、ステップＳ１２で洗浄液は全域に流れているかを判断する。流れていない場合はステップＳ１３で警告を発し、ステップＳ１０に戻り洗浄液の注入を続ける。流れている場合はステップＳ１４で泡の有無を判断し、泡がある場合はステップＳ１３で警告を発し、ステップＳ１０に戻り洗浄液の注入を続ける。泡がない場合はステップＳ１５に進み洗浄を終了する。 ステップＳ１４での泡の判断は、所定時間以上泡が同一個所に滞留した場合は泡があると判断し、それ以外の泡については泡なしと判断する。 ステップＳ５の警告は作業者にその旨を告知できる方法であればよく、ブザーなどの音、或いは警告ランプのようなものを用いればよい。或いは検出部での観察画像をモニターなどに表示するような装置の構成とした場合はモニター上に警告を表示してもよい。 本形態ではステップＳ３及びＳ５の判断結果に応じてステップＳ４で警告を発するようにしているが、警告を行わずにステップＳ１へと進むようにしてもよい。 また本形態においては拡散不良と判断した場合は再度試料溶液の注入を行うようにしているが、試料溶液を拡散させることができればどのような手段でもよく、注入を行わずに例えば加圧により試料を拡散させたり、ＤＮＡチップを傾けたりして試料溶液の拡散を行うようにしてもよい。 またステップＳ８で泡移動をさせることにしているが、その手段として例えば超音波振動子などの振動手段をチャンバー近傍に設けたり、液体の注入および排出を繰り返すことによって攪拌するなどの手段を適用できる。 またステップＳ７で泡の検出を行い、その結果に応じてステップＳ８で泡移動をさせることにしているが、ステップＳ７の検出結果によらず、泡が発生しても一定の場所に滞留しないように上述の泡移動手段を常に作動させるようにしてもよい。 これらにより、さらに短時間で気泡の発生に対して対処可能となるため、反応の均一化に寄与する。 図５（ｂ）は図５（ａ）のステップＳ３，Ｓ５，Ｓ７，Ｓ１２，Ｓ１４でいいえと判定された場合の別の処理フロー図である。上記のステップでいいえと判定されたらそれぞれ液の状態を制御手段５に記憶し、次のステップに進む。そしてステップＳ１５まで終了したら、記憶した液の状態をたとえばフロッピー（登録商標）ディスクなどの記録媒体、あるいはネットワークなどを介してハイブリダイゼーション反応検出装置に送り、ハイブリダイゼーション反応結果と送られた液の状態を比較して信頼性のないデータを無視あるいは削除させる。 またハイブリダイゼーション装置がハイブリダイゼーション反応検出機能を持つような構成であれば、容易にデータの比較を実施することが可能である。 図５（ｃ）は図５（ａ）のステップＳ３，Ｓ５，Ｓ７，Ｓ１２，Ｓ１４でいいえと判定された場合の処理方法が異なる場合である。いいえと判定されたらステップＳ８に進み警告を発し、ハイブリ中止の処理をして終了する。 次に図６・図７に第二の実施形態について説明する。 図６は本発明のハイブリダイゼーション装置の構成図を示している。ＤＮＡスポットを有するＤＮＡチップ２１上方には液検出用電極を有するチャンバー２２が設置されており、ＤＮＡチップ２１とチャンバー２２の間には微小な隙間が設けられている。チャンバー２２の液検出部の出力は制御手段２３に接続されている。またＤＮＡチップ２１に試料溶液を注入する注入部２４も制御手段２３に接続されている。また洗浄液タンク２５とＤＮＡチップの間には電磁バルブ２６が設置され、制御手段２３と接続されている。洗浄液タンク２５と反対側には廃液タンク２７がＤＮＡチップ２１とつながるように設置されている。またＤＮＡチップ２１の下にはヒーター２８が制御手段２３と接続されて配置されている。 このような構成において、注入部２４よりＤＮＡチップ２１上に試料溶液が注入されるとチャンバー２２はＤＮＡチップ２１上でのハイブリ液の状態を検出し、その検出結果を制御手段２３に送る。制御手段２３はハイブリ液の状態を判断し拡散完了と判断すると、ヒーター２８により加熱を行いハイブリダイゼーション反応を開始する。所定時間の加熱によりハイブリダイゼーション反応が終了すると、制御手段２３は弁２６を開きＤＮＡチップ２１上に洗浄液を流し、この時チャンバー２２はＤＮＡチップ２１上の洗浄液の状態を検出し、その検出結果を制御手段２３に送る。制御手段２３は洗浄液の状態を判断し、洗浄終了する。 図７（ａ），（ｂ）はチャンバー２２の構成の図である。 図７（ａ）において、チャンバー２２の基板２１との対向表面には複数の電極が構成されており、隣接する電極同士が互いに正負交互の電位になるように電圧が加えられている。 電極Ｅ１、Ｅ３は液と接触しており、電極Ｅ２，Ｅ４は液と接触しておらず空気と接触している状態を表している。液と空気では導電率が異なるので、例えばＥ１―Ｅ２間、Ｅ１―Ｅ３間Ｅ２―Ｅ４間、Ｅ３―Ｅ４間でのそれぞれの電流値あるいは抵抗値などを検出すれば、液の到達範囲を検出することが可能である。 図７（ｂ）の場合は電極Ｅ１１、Ｅ１３を囲むようにそれぞれ電極Ｅ１２、Ｅ１４が配置されており、Ｅ１１とＥ１２には互いに正負反対の電位になるように電圧が加えられており、Ｅ１３とＥ１４も同様である。この時、図７（ａ）と同じ様にＥ１１−Ｅ１２間、Ｅ１３−Ｅ１４間それぞれの抵抗値を検出すれば、液の到達範囲を検出することが可能である。 本実施例においては電極はチャンバー２２に配置しているが、基板２１側に配置してもよい。 以上の実施例では図示していないが、洗浄後に洗浄液を乾燥させる乾燥工程を追加することも可能であり、乾燥状態を検出することが可能であることはいうまでもない。 また、本形態においては、プローブＤＮＡを固定したＤＮＡチップを用いたが、これに限らず、ＲＮＡ、ｃＤＮＡ（コンプリメンタリーＤＮＡ）、ＰＮＡ、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチド、その他のハイブリダイゼーションを供する核酸を用いたチップに好適に使用することができる。第１実施例のハイブリダイゼーション装置の説明図である。第１実施例のハイブリダイゼーション装置の別の構成例の説明図である。第１実施例のハイブリダイゼーション装置の別の構成例の説明図である。第１実施例の試料溶液拡散の説明図である。第１実施例の試料溶液注入のフローチャートである。第２実施例のハイブリダイゼーション装置の説明図である。第２実施例の試料溶液拡散の説明図である。従来のハイブリダイゼーションの説明図である。符号の説明 １，１１，２１ ＤＮＡチップ ２，１２，２２ チャンバー ３ 検出部 ４ 光源 ５ 制御部 ６ 試料溶液注入手段 ７ 洗浄液タンク ８ 電磁弁 ９ 廃液タンク １０ ヒーター ２３ 制御手段 ２４ 注入部 ２５ 洗浄液タンク ２６ 電磁弁 ２７ 廃液タンク ２８ ヒーター ３１ 筐体 ３２ チャンバー部 担体表面にプローブ核酸が固定された核酸チップを用いて、試料核酸と前記プローブ核酸とをハイブリダイゼーション反応させるためのハイブリダイゼーション装置であって、 前記担体表面に液体を供給する供給手段と、前記担体表面の状態を観察する観察手段を備えることを特徴とするハイブリダイゼーション装置。 前記ハイブリダイゼーション反応は、前記担体表面に液体を供給するための空隙を形成するチャンバー部材を用いて行なわれるものであり、前記供給手段は該チャンバー部材に設けられた注入口を介して空隙に液体を注入するための注入手段である請求項１に記載のハイブリダイゼーション装置。 前記観察手段が前記供給された液体の存在する状態を２次元画像として検出する液検出手段である請求項２に記載のハイブリダイゼーション装置。 前記ハイブリダイゼーション反応を検出するためのハイブリダイゼーション検出手段を備える請求項３に記載のハイブリダイゼーション装置。 前記液検出手段は前記ハイブリダイゼーション検出手段を兼ねることを特徴とする請求項４のハイブリダイゼーション装置。 前記液検出手段あるいは前記ハイブリダイゼーション検出手段による検出は、前記プローブ担体のプローブ核酸固定面の反対面側から行われることを特徴とする請求項３〜５のいずれかに記載のハイブリダイゼーション装置。 前記液検出手段による検出結果に基づいて前記試料溶液の拡散状態を判断する判断手段を有することを特徴とする請求項３〜６に記載のハイブリダイゼーション装置。 前記試料溶液の拡散状態判断結果と前記ハイブリダイゼーション検出手段によるハイブリダイゼーション検出結果とを処理するための制御手段を有することを特徴とする請求項４〜７のいずれかに記載のハイブリダイゼーション装置。 前記液体が、試料核酸を含む試料溶液である請求項１〜８のいずれかに記載のハイブリダイゼーション装置。 前記液体が、ハイブリダイゼーション反応後に前記空間を洗浄する洗浄液である請求項１〜８のいずれかに記載のハイブリダイゼーション装置。 前記検出手段による検出結果から前記核酸チップ表面の洗浄状態を判断することを特徴とする請求項１０に記載のハイブリダイゼーション装置。 前記担体表面に供給された液体を加熱するための加熱手段を有する請求項１〜１１のいずれかに記載のハイブリダイゼーション装置。 前記担体表面に供給された液体を攪拌するための攪拌手段を有する請求項１〜１２のいずれかに記載のハイブリダイゼーション装置。 担体表面にプローブ核酸が固定された核酸チップを用いて、試料核酸と前記プローブ核酸とをハイブリダイゼーション反応させるための方法であって、 前記担体表面に液体を供給し、前記供給された液体の存在する状態を検出することを特徴とする方法。 前記液体の存在する状態の検出が、前記担体表面における液体の拡散状態を２次元像として取得するものである請求項１４に記載の方法。 前記取得した２次元像に応じて、均一な拡散状態になるように溶液の供給が行なわれる請求項１５に記載の方法。 前記２次元像の取得が、ハイブリダイゼーション溶液を供給する際に行なわれる請求項１５〜１６のいずれかに記載の方法。 前記２次元像の取得が、洗浄液を供給する際に行なわれる請求項１５〜１７のいずれかに記載の方法。 前記２次元像の取得が、ハイブリダイゼーション反応条件下にある溶液に対して行なわれる請求項１５〜１８のいずれかに記載の方法。 前記取得した２次元像に応じて、前記溶液を攪拌させる請求項１７〜１９のいずれかに記載の方法。 担体表面にプローブ核酸が固定された核酸チップを用いた試料核酸の検出方法であって、 請求項１４〜２０のいずれかに記載のハイブリダイゼーション反応を行うステップと、 前記担体上のプローブ核酸と結合した試料核酸を検出する工程を有する。 【課題】 ＤＮＡチップ上のプローブ領域に対し試料溶液を確実に拡散させ、洗浄時には確実に洗浄させる。【解決手段】 注入部６よりＤＮＡチップ１上に試料溶液が注入されると検出部３はＤＮＡチップ１上での試料溶液の状態を検出し、その検出結果を制御手段５に送る。制御手段５は試料溶液の状態を判断し拡散完了と判断すると、ヒーター４により加熱を行いハイブリダイゼーション反応を開始する。所定時間の加熱によりハイブリダイゼーション反応が終了すると、制御手段５は弁８を開きＤＮＡチップ１上に洗浄液を流し、この時検出部３はＤＮＡチップ１上の洗浄液の状態を検出し、その検出結果を制御手段５に送る。制御手段５は洗浄液の状態を判断し、洗浄終了する。【選択図】 図１