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| タイトル： | 公開特許公報(A)_ＡＣＳＬ１に対するアンチセンスオリゴヌクレオチド |
| 出願番号： | 2012026989 |
| 年次： | 2015 |
| IPC分類： | C12N 15/113,A61K 31/7088,A61P 43/00,A61P 3/04,A61P 3/10 |
特許情報キャッシュ
小比賀 聡 堀 真一郎 藤原 孝博 粕谷 武史 JP 2015082971 公開特許公報(A) 20150430 2012026989 20120210 ＡＣＳＬ１に対するアンチセンスオリゴヌクレオチド 国立大学法人大阪大学 504176911 塩野義製薬株式会社 000001926 高山 裕貢 100103230 杉田 健一 100113789 小比賀 聡 堀 真一郎 藤原 孝博 粕谷 武史 C12N 15/113 20100101AFI20150403BHJP A61K 31/7088 20060101ALI20150403BHJP A61P 43/00 20060101ALI20150403BHJP A61P 3/04 20060101ALI20150403BHJP A61P 3/10 20060101ALI20150403BHJP JPC12N15/00 GA61K31/7088A61P43/00A61P3/04A61P3/10 8 ＯＬ 31 4B024 4C086 4B024AA01 4B024CA01 4B024CA11 4B024CA20 4B024HA17 4C086AA01 4C086AA02 4C086EA16 4C086MA04 4C086NA14 4C086ZA70 4C086ZC35 4C086ZC41 本発明は、ＡＣＳＬ１に対するアンチセンスオリゴヌクレオチドに関する。より詳細には、肥満症（肥満症における体重管理も含む）または糖尿病（特に、ＩＩ型糖尿病）の予防または治療薬として有用なＡＣＳＬ１に対するアンチセンスオリゴヌクレオチドに関する。 肥満は脂肪組織が全身的に増加した状態をいい、長期間にわたり摂取するエネルギー量が消費するエネルギー量よりも多いときに起きる。肥満は、内臓脂肪型肥満と皮下脂肪型肥満とに分類できる。内臓脂肪型肥満は、大網、腸間膜周囲に存在する腹腔内脂肪の蓄積量が増加する肥満で、糖尿病（特に、インスリン抵抗性を伴うＩＩ型糖尿病）、動脈硬化症、肝臓病、心臓病等を引き起こす元凶の一つとされ、現代社会において大きな問題となっている。 糖尿病は、持続的高血糖状態を伴う疾患であり、多くの環境因子と遺伝的因子とが作用した結果に生じるとされている。体内における血糖の主要な調整因子はインスリンであり、高血糖は、インスリン欠乏、または、その作用を阻害する諸因子（例えば、遺伝的素因、運動不足、肥満、ストレス等）が過剰となって生じる。糖尿病には主として２つの種類があり、自己免疫疾患等による膵インスリン分泌機能の低下によって生じるＩ型糖尿病と、持続的な高インスリン分泌に伴う膵疲弊による膵インスリン分泌機能の低下が原因であるＩＩ型糖尿病とに分類される。日本人の糖尿病患者の９５％以上はＩＩ型糖尿病と言われており、今日、生活様式の変化に伴う患者数の増加が問題となっている。 アシル−ＣｏＡ合成酵素ファミリーに属する酵素（以下、ＡＣＳと略記する）は、長鎖脂肪酸からアシルＣｏＡへ変換する酵素である。アシルＣｏＡは、細胞内脂質合成および脂肪酸分解または伸長反応における基質となることから、ＡＣＳは、細胞内の脂質代謝さらには脂質による細胞内シグナル伝達において中心的な役割を担う。またＡＣＳは、脂肪外脂肪酸の取込みにも関与する（非特許文献１参照）。 ＡＣＳは、現在までに基質選択性や細胞内局在の異なる５つのアイソザイム（ＡＣＳ１、３、４、５、６）が同定されている（非特許文献２参照）。このファミリーに属する酵素の一つであるＡＣＳＬ１（ＧｅｎＢａｎｋ：ＮＭ_００１９９５）は、主に肝臓や脂肪組織で発現しており、トリグリセリド（ＴＧ）の合成を触媒する。なお、ＡＣＳＬ４およびＡＣＳＬ５は主に肝臓で発現し、ＡＣＳＬ３やＡＣＳＬ６は主に脳で発現していることが知られている。 ＡＣＳの阻害剤としてＴｒｉａｃｓｉｎＣが知られており、この化合物は５つのアイソザイムのうち１、３、４を阻害することが報告されている（非特許文献３参照）。この化合物については、この他にヒト肝癌細胞株であるＨｕＨ７細胞においてＴＧ蓄積を阻害すること（非特許文献４参照）やヒト正常皮膚繊維芽細胞であるＣＣＤ細胞でジアシルグリセロール、コレステロールエステル、リン脂質合成を阻害することが報告されている（非特許文献５参照）。 ＡＣＳＬ１は、各種癌との関係が報告されており（例えば、特許文献１〜３参照）他に肝硬変や肝繊維性障害（特許文献４参照）、気管支喘息（特許文献５参照）のバイオマーカーになることも報告されている。 また、特許文献６には、肝臓のＡＣＳＬ１の発現をｓｉＲＮＡにより抑制することによって体重の増加の抑制および血糖値を降下させることが開示されており、ＡＣＳＬ１発現抑制剤は肥満症またはＩＩ型糖尿病の治療または予防に利用することができることが示唆されている。 特許文献７には、ＡＣＳＬ１をターゲットとしたアンチセンス化合物について開示されている。明細書中には、３６１５のアンチセンスオリゴヌクレオチドが記載されているが、標的領域との親和性に関する予測値が記載されているだけであり、ＡＣＳＬ１発現抑制に関するデータは記載されていない。国際公開第０７／０１０６２８号国際公開第０７／１１７０３８号国際公開第０３／３００４９８９号特開２００７−２５２３６６号特開２００４−１２１２１８号国際公開第２０１０／０７９８１９号国際公開第０４／０１６７４９号Ｂｉｏｃｈｅｉｃａｌ．Ｊ、第３２３巻、１−１２ページ、１９９７年Ｊ．Ｎｕｔｒ、第１３２巻、２１２３−２１２６ページ、２００４年Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、第４４巻、１６３５−１６４２ページ、２００５年Ｊ．Ｌｉｐｉｄ．Ｒｅｓ第４８巻、１２８０−１２９２ページ、２００７年Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ、第３２４巻、５２９−５３４ページ、１９９７年 本発明の目的は、優れたＡＣＳＬ１発現抑制活性を有する新規アンチセンスオリゴヌクレオチドを提供することにある。 本発明者らは、鋭意研究の結果、優れたＡＣＳＬ１発現抑制活性（ノックダウン活性）を有する新規アンチセンスオリゴヌクレオチドの合成に成功した。さらに、本発明者らは、ＡＣＳＬ１のｍＲＮＡの中で特に、アンチセンスオリゴヌクレオチドのノックダウン活性に関連する標的領域を見出した。特許文献７には、３６１５のＡＣＳＬ１に対するアンチセンスオリゴヌクレオチドが記載されているが、標的領域との親和性に関する予測値が記載されているだけであり、ＡＣＳＬ１発現抑制に関するデータは記載されていない。高親和性を持つアンチセンスが、必ずしも高い標的遺伝子発現抑制作用を持つわけではないことは技術常識である（Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｄｒｕｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ， Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ， ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ， ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ； ２ｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ， ２００７， ｐａｇｅ １２０−１２２， Ｆｉｇｕｒｅ ５．３ａ）。よって、特許文献７の記載からは、ＡＣＳＬ１のｍＲＮＡのどの領域がアンチセンスオリゴヌクレオチドの標的領域として有用であるかは予測できない。本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、本発明者らが見出した特定の標的領域と結合し、優れたＡＣＳＬ１発現抑制活性を示す。 また、本発明者らは、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドが、他のアイソザイム（ＡＣＳＬ３およびＡＣＳＬ５）に対して発現抑制作用を持たず、ＡＣＳＬ１特異的発現抑制作用を持つことを見出した。このように標的配列に対して特異性の高いアンチセンスオリゴヌクレオチドは、医薬として有用である。 また、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは代謝安定性および水溶性がよく、毒性が低く、医薬として使用するために十分安全である。 すなわち、本発明は、以下に関する。（１）ストリンジェントな条件で、配列番号１の９５位〜１０９位、１７６位〜１９２位、４６７位〜４８４位、９４０位〜９５４位、１０１７位〜１０３２位、１１０２位〜１１１６位、１１７６位〜１１９７位、１２２２位〜１２３６位、１７２７位〜１７４３位、１８５８位〜１８７３位、１９４６位〜１９６０位、２２９４位〜２３０８位、２３６０位〜２３７７位、２４４９位〜２４６９位、２６０５位〜２６２４位、２６８９位〜２７０３位、２９５０位〜２９６４位、３４２４位〜３４３８位または３５９１位〜３６０５位からなる配列にハイブリダイズ可能な配列を含む、アンチセンスオリゴヌクレオチド。（２）ＡＣＳＬ１の発現を抑制する、（１）記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。（３）長さが１３〜１９塩基である、（１）または（２）記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。（４）配列番号６〜１１、１３〜１８、２０〜２２、２４〜３０、３２、３５〜３７、４６、４８、４９、５２〜５４、５７〜５９、６４〜６８もしくは７０の配列、または、配列番号６〜１１、１３〜１８、２０〜２２、２４〜３０、３２、３５〜３７、４６、４８、４９、５２〜５４、５７〜５９、６４〜６８もしくは７０の配列において、１もしくは数個の塩基が欠失もしくは置換された配列を含む、（１）〜（３）いずれかに記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。（５）配列番号６〜１１、１３〜１８、２０〜２２、２４〜３０、３２、３５〜３７、４６、４８、４９、５２〜５４、５７〜５９、６４〜６８もしくは７０の配列、または、配列番号６〜１１、１３〜１８、２０〜２２、２４〜３０、３２、３５〜３７、４６、４８、４９、５２〜５４、５７〜５９、６４〜６８もしくは７０の配列において、１もしくは数個の塩基が欠失、置換もしくは付加された配列からなる、（４）記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。（６）（１）〜（５）のいずれかに記載のアンチセンスオリゴヌクレオチドを含有する医薬組成物。（７）ＡＣＳＬ１が関連する疾患の予防または治療のために用いる、（６）記載の医薬組成物。（８）該疾患が、肥満症またはＩＩ型糖尿病である、（７）記載の医薬組成物。（９）（１）〜（５）のいずれかに記載のアンチセンスオリゴヌクレオチドを投与するＡＣＳＬ１が関連する疾患の予防または治療方法。（１０）該疾患が、肥満症またはＩＩ型糖尿病である、（９）記載の予防または治療方法。（１１）ＡＣＳＬ１が関連する疾患の予防または治療剤を製造するための、（１）〜（５）のいずれかに記載のアンチセンスオリゴヌクレオチドの使用。（１２）該疾患が、肥満症またはＩＩ型糖尿病である、（１１）記載のアンチセンスオリゴヌクレオチドの使用。（１３）ＡＣＳＬ１が関連する疾患の予防または治療するための、（１）〜（５）のいずれかに記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。（１４）該疾患が、肥満症またはＩＩ型糖尿病である、（１３）記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。 本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは優れたＡＣＳＬ１発現抑制活性を示し、医薬品、特にＡＣＳＬ１の関与する疾患、例えば、肥満症（肥満症における体重管理も含む）、肥満関連疾患、糖尿病（特に、ＩＩ型糖尿病）、シンドロームＸ、心臓血管障害または癌（乳癌、結腸癌、大腸癌、卵巣癌、肺癌等）の予防または治療のための医薬として非常に有用である。本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドのＨｅｐＧ２細胞における５ｎＭおよび２０ｎＭでのノックダウン効率本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドのＡＣＳＬ１タンパク質に対するノックダウン効果本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドのＡＣＳＬ３およびＡＣＳＬ５に対する交差性の評価結果 本明細書において使用される用語は、特に言及する場合を除いて、当該分野で通常用いられる意味で用いられる。 本発明においては、当該分野で公知の遺伝子操作方法の使用が可能である。例えば、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ， Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， Ｔｈｉｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ （２００１）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ （２００３）に記載された方法等が挙げられる。 以下に本発明について詳細に説明する。 「アンチセンスオリゴヌクレオチド」（ＡＯＮ）とは、標的遺伝子のｍＲＮＡ、ｍＲＮＡ前駆体またはｎｃＲＮＡに対して相補的なオリゴヌクレオチドであり、当該アンチセンスオリゴヌクレオチドが標的とするｍＲＮＡ、ｍＲＮＡ前駆体またはｎｃＲＮＡと二本鎖を形成することによりｍＲＮＡ、ｍＲＮＡ前駆体またはｎｃＲＮＡの働きを抑制する。「アンチセンスオリゴヌクレオチド」には、標的となるｍＲＮＡ、ｍＲＮＡ前駆体またはｎｃＲＮＡと完全に相補的であるもののみならず、ｍＲＮＡ、ｍＲＮＡ前駆体またはｎｃＲＮＡとストリンジェントな条件でハイブリダイズできる限り、１もしくは数個のミスマッチが存在するものも含まれる。 ｎｃＲＮＡ（ノンコーディングＲＮＡ）とは、タンパク質へ翻訳されずに機能するＲＮＡの総称である。例えば、リボソームＲＮＡ、転移ＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ等が挙げられる。 １もしくは数個のミスマッチとは、１〜５個、好ましくは１〜３個、さらに好ましくは１または２個のミスマッチを意味している。 本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドの標的遺伝子としては、ＡＣＳＬ１が挙げられる。例えば、ヒトＡＣＳＬ１、マウスＡＣＳＬ１等が挙げられるが、これらに限定されない。 「ＡＣＳＬ１」は公知のタンパク質である。ヒトＡＣＳＬ１（ＧｅｎＢａｎｋ：ＮＭ_００１９９５）のＤＮＡ配列を配列表の配列番号１に、アミノ酸配列を配列番号２に記載する。マウスＡＣＳＬ１（ＧｅｎＢａｎｋ：ＮＭ_００７９８１）のＤＮＡ配列を配列表の配列番号３に、アミノ酸配列を配列番号４に記載する。本発明における「ＡＣＳＬ１」は、これらの配列に限定されるものではなく、配列番号２または４のタンパク質の機能が保持される限り、アミノ酸やＤＮＡの変異数や変異部位に制限はないものとする。 本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドの長さは、６〜５０塩基、例えば、６〜３０塩基、６〜１９塩基、８〜１９塩基、１０〜１９塩基、１３〜１９塩基、１３塩基、１４塩基、１５塩基、１６塩基、１７塩基、１８塩基、１９塩基である。 本発明の「アンチセンスオリゴヌクレオチド」としては、（ａ）ストリンジェントな条件で、配列番号１の配列の９５位〜１０９位、１７６位〜１９２位、４６７位〜４８４位、９４０位〜９５４位、１０１７位〜１０３２位、１１０２位〜１１１６位、１１７６位〜１１９７位、１２２２位〜１２３６位、１７２７位〜１７４３位、１８５８位〜１８７３位、１９４６位〜１９６０位、２２９４位〜２３０８位、２３６０位〜２３７７位、２４４９位〜２４６９位、２６０５位〜２６２４位、２６８９位〜２７０３位、２９５０位〜２９６４位、３４２４位〜３４３８位もしくは３５９１位〜３６０５位の配列にハイブリダイズ可能な配列を含む、アンチセンスオリゴヌクレオチド、または（ｂ）ストリンジェントな条件で、配列番号３の配列の１８３位〜１９７位、２１９位〜２３５位、４４２位〜４５６位、５１３位〜５３０位、５９３位〜６０７位、６４１位〜６５５位、９１９位〜９３３位、９４１位〜９５５位、９５９位〜９７３位、９７８位〜９９３位、９９８位〜１０１３位、１２２２位〜１２４３位、１２６８位〜１２８２位、１６２５位〜１６３９位、１９９３位〜２００７位、２０６６位〜２０８１位、２４０９位〜２４２３位、２４９７位〜２５２５位、２６５１位〜２６７０位、２６８５位〜２７００位、２７３８位〜２７５６位、２７６４位〜２７８８位、３３３１位〜３３４７位、３５０３位〜３５１７位もしくは３６６３位〜３６８４位の配列にハイブリダイズ可能な配列を含む、アンチセンスオリゴヌクレオチドが挙げられる。（ａ）の標的領域は、それぞれ、ヒトＡＣＳＬ１のｍＲＮＡの中で特に、アンチセンスオリゴヌクレオチドのノックダウン活性に関連する領域である。（ｂ）の標的領域は、それぞれ、マウスＡＣＳＬ１のｍＲＮＡの中で特に、アンチセンスオリゴヌクレオチドのノックダウン活性に関連する領域である。ストリンジェントな条件で、該標的領域にハイブリダイズ可能な配列であれば、長さやヌクレオチドの修飾の有無に関わらず、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドに含まれる。 ＡＣＳＬ１発現抑制活性（ノックダウン活性）は、公知の方法により測定することが可能である。例えば、後述する実施例５（１）または（３）記載の方法により測定することができる。 本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドとして、より好ましくは、（ｃ）ストリンジェントな条件で、配列番号１の配列の１７６位〜１９２位、４６７位〜４８４位、１１７６位〜１１９７位、２４４９位〜２４６９位もしくは２６０５位〜２６２４位の配列にハイブリダイズ可能な配列を含む、アンチセンスオリゴヌクレオチド、または（ｄ）ストリンジェントな条件で、配列番号３の配列の２１９位〜２３５位、５１３位〜５３０位、１２２２位〜１２４３位、２４９７位〜２５２５位、２６５１位〜２６７０位、２６８５位〜２７００位、２７３８位〜２７５６位、２７６４位〜２７８８位もしくは３６６３位〜３６８４位の配列にハイブリダイズ可能な配列を含む、アンチセンスオリゴヌクレオチドが挙げられる。 本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドとして、具体的には、（ａ）配列番号１の配列の９５位〜１０９位、１７６位〜１９２位、４６７位〜４８４位、９４０位〜９５４位、１０１７位〜１０３２位、１１０２位〜１１１６位、１１７６位〜１１９７位、１２２２位〜１２３６位、１７２７位〜１７４３位、１８５８位〜１８７３位、１９４６位〜１９６０位、２２９４位〜２３０８位、２３６０位〜２３７７位、２４４９位〜２４６９位、２６０５位〜２６２４位、２６８９位〜２７０３位、２９５０位〜２９６４位、３４２４位〜３４３８位もしくは３５９１位〜３６０５位の配列、または（ｂ）配列番号３の配列の１８３位〜１９７位、２１９位〜２３５位、４４２位〜４５６位、５１３位〜５３０位、５９３位〜６０７位、６４１位〜６５５位、９１９位〜９３３位、９４１位〜９５５位、９５９位〜９７３位、９７８位〜９９３位、９９８位〜１０１３位、１２２２位〜１２４３位、１２６８位〜１２８２位、１６２５位〜１６３９位、１９９３位〜２００７位、２０６６位〜２０８１位、２４０９位〜２４２３位、２４９７位〜２５２５位、２６５１位〜２６７０位、２６８５位〜２７００位、２７３８位〜２７５６位、２７６４位〜２７８８位、３３３１位〜３３４７位、３５０３位〜３５１７位もしくは３６６３位〜３６８４位の配列と少なくとも７０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、もっとも好ましくは９５％以上の相同性を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドが挙げられる。ここで、相同性は、例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌら（Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，２１５，４０３−４１０（１９９０）．）の開発したアルゴリズムを使用した検索プログラムＢＬＡＳＴを用いることにより、スコアで類似度が示される。 「ストリンジェントな条件」とは、アンチセンスオリゴヌクレオチドのみが、（ａ）配列番号１の配列の９５位〜１０９位、１７６位〜１９２位、４６７位〜４８４位、９４０位〜９５４位、１０１７位〜１０３２位、１１０２位〜１１１６位、１１７６位〜１１９７位、１２２２位〜１２３６位、１７２７位〜１７４３位、１８５８位〜１８７３位、１９４６位〜１９６０位、２２９４位〜２３０８位、２３６０位〜２３７７位、２４４９位〜２４６９位、２６０５位〜２６２４位、２６８９位〜２７０３位、２９５０位〜２９６４位、３４２４位〜３４３８位もしくは３５９１位〜３６０５位の配列、または（ｂ）配列番号３の配列の１８３位〜１９７位、２１９位〜２３５位、４４２位〜４５６位、５１３位〜５３０位、５９３位〜６０７位、６４１位〜６５５位、９１９位〜９３３位、９４１位〜９５５位、９５９位〜９７３位、９７８位〜９９３位、９９８位〜１０１３位、１２２２位〜１２４３位、１２６８位〜１２８２位、１６２５位〜１６３９位、１９９３位〜２００７位、２０６６位〜２０８１位、２４０９位〜２４２３位、２４９７位〜２５２５位、２６５１位〜２６７０位、２６８５位〜２７００位、２７３８位〜２７５６位、２７６４位〜２７８８位、３３３１位〜３３４７位、３５０３位〜３５１７位もしくは３６６３位〜３６８４位の配列とハイブリット（いわゆる特異的ハイブリット）を形成し、同等の機能を有しない塩基配列は該特定配列とハイブリット（いわゆる非特異的ハイブリット）を形成しない条件を意味する。当業者は、ハイブリダイゼーション反応および洗浄時の温度や、ハイブリダイゼーション反応液および洗浄液の塩濃度等を変化させることによって、このような条件を容易に選択することができる。具体的には、６×ＳＳＣ（０．９Ｍ ＮａＣｌ，０．０９Ｍ クエン酸三ナトリウム）または６×ＳＳＰＥ（３Ｍ ＮａＣｌ，０，２Ｍ ＮａＨ２ＰＯ４，２０ｍＭ ＥＤＴＡ・２Ｎａ，ｐＨ７．４）中４２℃でハイブリダイズさせ、さらに４２℃で０．５×ＳＳＣにより洗浄する条件が、本発明のストリンジェントな条件の１例として挙げられるが、これに限定されるものではない。ハイブリダイゼーション方法としては、当該分野において周知慣用な手法、例えば、サザンブロットハイブリダイゼーション法等を用いることができる。具体的には、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ（１９８９）（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（１９９４）（Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ）、ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ １：Ｃｏｒｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ（１９９５）（Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ）等に記載されている方法に準じて行うことができる。 本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドとしては、例えば、配列番号６〜１１、１３〜１８、２０〜２２、２４〜３０、３２、３５〜３７、４６、４８、４９、５２〜５４、５７〜５９、６４〜６８もしくは７０の配列、または、配列番号６〜１１、１３〜１８、２０〜２２、２４〜３０、３２、３５〜３７、４６、４８、４９、５２〜５４、５７〜５９、６４〜６８もしくは７０の配列において、１もしくは数個の塩基が欠失もしくは置換された配列を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドが挙げられる。これらはそれぞれ、ヒトＡＣＳＬ１発現抑制活性を有する。該配列を含む限り、長さやヌクレオチドの修飾の有無に関わらず、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドに含まれる。 さらに、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドとしては、例えば、配列番号６〜１３、３０、７２〜７５、７７〜８０、８２〜９３、９５、１００〜１０４、１０９、１１０、１１３、１１４、１１６〜１２７、１２９、１３１〜１４１、１４３〜１４７、１５１、１５３〜１５５もしくは１５６の配列、または配列番号６〜１３、３０、７２〜７５、７７〜８０、８２〜９３、９５、１００〜１０４、１０９、１１０、１１３、１１４、１１６〜１２７、１２９、１３１〜１４１、１４３〜１４７、１５１、１５３〜１５５もしくは１５６の配列において、１もしくは数個の塩基が欠失もしくは置換された配列を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドが挙げられる。これらはそれぞれ、マウスＡＣＳＬ１発現抑制活性を有する。該配列を含む限り、長さやヌクレオチドの修飾の有無に関わらず、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドに含まれる。 本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドとしては、具体的には、配列番号６〜１１、１３〜１８、２０〜２２、２４〜３０、３２、３５〜３７、４６、４８、４９、５２〜５４、５７〜５９、６４〜６８もしくは７０の配列、または、配列番号６〜１１、１３〜１８、２０〜２２、２４〜３０、３２、３５〜３７、４６、４８、４９、５２〜５４、５７〜５９、６４〜６８もしくは７０の配列において、１もしくは数個の塩基が欠失、置換もしくは付加された配列からなるアンチセンスオリゴヌクレオチドが挙げられる。さらに好ましくは、配列番号６〜１１もしくは２４〜２８、または、配列番号６〜１１もしくは２４〜２８の配列において、１もしくは数個の塩基が欠失、置換もしくは付加された配列からなるアンチセンスオリゴヌクレオチドが挙げられる。これらはそれぞれ、ヒトＡＣＳＬ１発現抑制活性を有する。該配列からなる限り、ヌクレオチドの修飾の有無に関わらず、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドに含まれる。 さらに、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドとしては、具体的には、配列番号６〜１３、３０、７２〜７５、７７〜８０、８２〜９３、９５、１００〜１０４、１０９、１１０、１１３、１１４、１１６〜１２７、１２９、１３１〜１４１、１４３〜１４７、１５１、１５３〜１５５もしくは１５６の配列、または、配列番号６〜１１、１３〜１８、２０〜２２、２４〜３０、３２、３５〜３７、４６、４８、４９、５２〜５４、５７〜５９、６４〜６８もしくは７０の配列において、１もしくは数個の塩基が欠失、置換もしくは付加された配列からなるアンチセンスオリゴヌクレオチドが挙げられる。これらはそれぞれ、マウスＡＣＳＬ１発現抑制活性を有する。該配列からなる限り、ヌクレオチドの修飾の有無に関わらず、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドに含まれる。 なお、「１もしくは数個の塩基」とは、１〜５個、好ましくは１〜３個、さらに好ましくは１または２個の塩基を意味している。欠失、置換または付加によっても、標的遺伝子（例えば、ＡＣＳＬ１）の発現抑制作用を有する限り、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドに包含される。 本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＡＣＳＬ１発現抑制活性のみならず、医薬としての有用性を備えており、下記いずれか、あるいは全ての優れた特徴を有している。ａ）ＣＹＰ酵素（例えば、ＣＹＰ１Ａ２、ＣＹＰ２Ｃ９、ＣＹＰ２Ｃ１９、ＣＹＰ２Ｄ６、ＣＹＰ３Ａ４等）に対する阻害作用が弱い。ｂ）高いバイオアベイラビリティー、適度なクリアランス等良好な薬物動態を示す。ｃ）代謝安定性が高い。ｄ）変異原性を有さない。ｅ）心血管系のリスクが低い。ｆ）高い溶解性を示す。ｇ）ＡＣＳＬ１特異性を示す。 本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドにおいて、ヌクレオチドは修飾されていてもよい。適切な修飾を施したアンチセンスオリゴヌクレオチドは、無修飾のアンチセンスオリゴヌクレオチドと比較し、下記いずれか、あるいは全ての特徴を有している。ａ） 標的遺伝子との親和性が高い。ｂ） ヌクレアーゼに対する抵抗性が高い。ｃ） 薬物動態が改善する。ｄ） 組織移行性が高くなる。 よって、修飾されたアンチセンスオリゴヌクレオチドは、無修飾のアンチセンスオリゴヌクレオチドと比較して、生体内で分解されにくくなり、より安定して標的遺伝子の発現を阻害できる。 当該分野で公知のヌクレオチドの修飾であれば、いずれも本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドに利用可能である。例えば、Ｓ−オリゴ（ホスホロチオエート）、Ｃ−５チアゾール、Ｄ−オリゴ（ホスホジエステル）、Ｍ−オリゴ（メチルフォスフォネイト）、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、リン酸ジエステル結合、Ｃ−５プロピニルピリミジン、２−Ｏ−プロピルリボース、２´−メトキシエトキシリボース（２´ＭＯＥ）、ＬＮＡ（Ｌｏｃｋｅｄ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ）、アミドＢＮＡ（Ｂｒｉｄｇｅｄ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ）等の修飾型のアンチセンスオリゴヌクレオチド等が挙げられる。 当該分野で公知のヌクレオチドの修飾および修飾方法については、例えば、以下の特許文献にも開示されている。国際公開第９８／３９３５２号、国際公開第９９／０１４２２６号、国際公開２０００／０５６７４８、国際公開第２００５／０２１５７０号、国際公開第２００３／０６８７９５号、国際公開第２０１１／０５２４３６号、国際公開第２００４／０１６７４９号、国際公開第２００５／０８３１２４号、国際公開２００７／１４３３１５号、国際公開第２００９／０７１６８０号等。 以下に、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドに利用可能な修飾を具体的に例示するが、該修飾はこれらにより限定されるものではない。（１）Ｓ−オリゴ（ホスホロチオエート） ヌクレオシド間のホスホジエステル結合のリン酸基部の酸素原子を硫黄原子で置換する。該修飾は公知の方法に従って、オリゴヌクレオチドに取り込まれる。該修飾をオリゴヌクレオチド中に１もしくは複数もつアンチセンスオリゴヌクレオチドをＳ−オリゴ型（ホスホロチオエート型）という。（２）ＬＮＡ（Ｌｏｃｋｅｄ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ） ヌクレオチドの糖環の４´炭素原子から適切な架橋を介して２´−ヒドロキシル基が結合して二環式糖部分が形成される。好ましい結合は、２´酸素原子と４´炭素原子とを架橋するメチレン（−ＣＨ２−）基である。ＬＮＡの具体例およびその調製方法は、国際公開第９８／３９３５２号、国際公開第２００３／０６８７９５号、国際公開第２００５／０２１５７０号等に記載されている。（３）アミドＢＮＡ（Ｂｒｉｄｇｅｄ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ） ヌクレオチドの糖環の２´のアミノ基と４´から伸長したカルボニル基との間にアミド結合が形成されることにより、二環式糖部分が形成される。アミドＢＮＡの具体例およびその調製方法は、国際公開第２０１１／０５２４３６号に記載されている。（４）ヌクレオチドの糖の２´位置の修飾 ヌクレオチドの糖の２´位置のＯＨを−Ｏ−アルキル（例えば、−Ｏ−メチル、−Ｏ−エチル、−Ｏ−メトキシエチル等）、または−Ｆで置換する。該修飾は公知の方法に従って、オリゴヌクレオチドに取り込まれる。 本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド（またはその修飾体）は常法によって合成することができ、例えば、市販の核酸自動合成装置（例えば、ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製、（株）大日本精機製等）によって容易に合成することができる。合成法はホスホロアミダイトを用いた固相合成法、ハイドロジェンホスホネートを用いた固相合成法等がある。例えば、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ ２２， １８５９−１８６２ （１９８１）、国際公開第２０１１／０５２４３６号等に開示されている。 本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ヒトを含む動物に投与する際、生物学的に活性な代謝産物またはその残渣物を（直接的に、あるいは、間接的に）提供し得る、任意の製薬上許容される塩、エステル、もしくはかかるエステルの塩、または任意の他の同等物を包含する。つまり、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドのプロドラッグおよび製薬上許容される塩、該プロドラッグの製薬上許容される塩、ならびに他の生物学的同等物を包含する。 「プロドラッグ」とは、内在性酵素または他の化学物質の作用および／または状態によってその生体内または細胞内で活性形態（即ち、薬物）に変換される、不活性形態またはより低い活性形態の誘導体である。本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドのプロドラッグは、国際公開第９３／２４５１０号、国際公開第９４／２６７６４号等に記載される方法に従って調製することができる。 「製薬上許容される塩」とは、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドの生理学的におよび製薬上許容される塩、即ち、該アンチセンスオリゴヌクレオチドの所望される生物学的な活性を保持し、そこで望まれない毒物学的効果を与えない塩のことをいう。 製薬上許容される塩としては、例えば、アルカリ金属（例えば、リチウム、ナトリウム、カリウム等）、アルカリ土類金属（例えば、カルシウム、バリウム等）、マグネシウム、遷移金属（例えば、亜鉛、鉄等）、アンモニア、有機塩基（例えば、トリメチルアミン、トリエチルアミン、ジシクロヘキシルアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、メグルミン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、ピリジン、ピコリン、キノリン等）およびアミノ酸との塩、または無機酸（例えば、塩酸、硫酸、硝酸、炭酸、臭化水素酸、リン酸、ヨウ化水素酸等）、および有機酸（例えば、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、トリフルオロ酢酸、クエン酸、乳酸、酒石酸、シュウ酸、マレイン酸、フマル酸、マンデル酸、グルタル酸、リンゴ酸、安息香酸、フタル酸、アスコルビン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸等）との塩が挙げられる。特に塩酸、硫酸、リン酸、酒石酸、メタンスルホン酸との塩等が挙げられる。これらの塩は、通常行われる方法によって形成させることができる。 本発明は、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドを含有する医薬組成物も包含する。本発明の医薬組成物の投与方法および製剤は、当該分野で公知の投与方法および製剤であれば、いずれも利用可能である。アンチセンスオリゴヌクレオチドの投与方法および製剤は、例えば、以下の文献にも開示されている。国際公開第２００４／０１６７４９号、国際公開第２００５／０８３１２４号、国際公開２００７／１４３３１５号、国際公開第２００９／０７１６８０号等。 本発明の医薬組成物は、局所的あるいは全身的な治療のいずれが望まれるのか、または治療すべき領域に応じて、様々な方法により投与することができる。投与方法としては、例えば、局所的（点眼、膣内、直腸内、鼻腔内、経皮を含む）、経口的、または、非経口的であってもよい。非経口的投与としては、静脈内注射もしくは点滴、皮下、腹腔内もしくは筋肉内注入、吸引もしくは吸入による肺投与、硬膜下腔内投与、脳室内投与等が挙げられる。 本発明の医薬組成物を局所投与する場合、経皮パッチ、軟膏、ローション、クリーム、ゲル、滴下剤、坐剤、噴霧剤、液剤、散剤等の製剤を用いることができる。 経口投与用組成物としては、散剤、顆粒剤、水もしくは非水性媒体に溶解させた懸濁液または溶液、カプセル、粉末剤、錠剤等が挙げられる。 非経口、硬膜下腔、または、脳室内投与用組成物としては、バッファー、希釈剤およびその他の適当な添加剤を含む無菌水溶液等が挙げられる。 本発明の医薬組成物は、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドの有効量にその剤型に適した賦形剤、結合剤、湿潤剤、崩壊剤、滑沢剤、希釈剤等の各種医薬用添加剤を必要に応じて混合して得ることができる。注射剤の場合には適当な担体と共に滅菌処理を行なって製剤とすればよい。 賦形剤としては乳糖、白糖、ブドウ糖、デンプン、炭酸カルシウムまたは結晶セルロース等が挙げられる。結合剤としてはメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ゼラチンまたはポリビニルピロリドン等が挙げられる。崩壊剤としてはカルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン末またはラウリル硫酸ナトリウム等が挙げられる。滑沢剤としてはタルク、ステアリン酸マグネシウムまたはマクロゴール等が挙げられる。坐剤の基剤としてはカカオ脂、マクロゴールまたはメチルセルロース等を用いることができる。また、液剤または乳濁性、懸濁性の注射剤として調製する場合には通常使用されている溶解補助剤、懸濁化剤、乳化剤、安定化剤、保存剤、等張剤等を適宜添加しても良い。経口投与の場合には嬌味剤、芳香剤等を加えても良い。 投与は、治療される病態の重度と反応度に依存し、治療コースは、数日から数ヶ月、あるいは、治癒が実現されるまで、または、病状の減退が達成されるまで持続する。最適投与スケジュールは、生体における薬剤蓄積の測定から計算が可能である。当該分野の当業者であれば、最適用量、投与法、および、繰り返し頻度を定めることができる。最適用量は、個々のアンチセンスオリゴヌクレオチドの相対的効力に応じて変動するが、一般に、インビトロおよびインビボの動物実験におけるＩＣ５０またはＥＣ５０に基づいて計算することが可能である。例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドの分子量（アンチセンスオリゴヌクレオチド配列および化学構造から導かれる）と、例えば、ＩＣ５０のような効果的用量（実験的に導かれる）が与えられたならば、ｍｇ／ｋｇで表される用量が通例に従って計算される。 本発明の医薬組成物は、ＡＣＳＬ１発現抑制活性を有するため、ＡＣＳＬ１が関連する疾患の予防または治療のために用いることができる。 ＡＣＳＬ１が関連する疾患としては、肥満症（肥満症における体重管理も含む）、肥満関連疾患、糖尿病（特に、ＩＩ型糖尿病）、シンドロームＸ、心臓血管障害または癌（乳癌、結腸癌、大腸癌、卵巣癌、肺癌等）が挙げられる。 「肥満関連疾患」とは、肥満に伴うか、肥満により引き起こされるか、肥満の結果起きる疾患である。肥満関連疾患の例としては、過食症、高血圧、耐糖能異常、糖尿病、代謝症候群、脂質代謝異常、動脈硬化症、高尿酸血症、痛風、脂肪肝、蛋白尿、肥満腎症、子宮内膜癌、乳癌、前立腺癌、大腸癌、変形性関節症、腰痛症、腰椎症、閉塞性睡眠時無呼吸症候群、冠動脈疾患（心筋梗塞、狭心症等の冠動脈性心疾患）、脳梗塞、脳血栓症、一過的脳虚血発作、月経異常、プラダーウィリー症候群、フレーリッヒ症候群、ピックウィック症候群等が挙げられる。本発明の医薬組成物は左心室肥大のリスクの低減等、肥満の２次的な結果のリスクの低減にも有用である。 本発明の医薬組成物は、特に、肥満症またはＩＩ型糖尿病の予防または治療のために用いることができる。 本発明の医薬組成物を肥満症の予防または治療のために用いる場合、他の１もしくは複数の公知の抗肥満薬（抗肥満作用を有する化合物を含有する医薬組成物、肥満症や肥満症における体重管理等に用いることのできる薬剤）と組み合わせて用いることもできる。また、本発明の医薬組成物の投与療法は、既知の食事療法、薬物療法、運動等と組み合わせて用いることもできる。 例えば、以下の方法も本発明の範囲内である。 本発明の医薬組成物と併用して、公知の抗肥満薬を投与することを特徴とする、肥満もしくは肥満関連疾患の予防もしくは治療または肥満における体重管理の方法。 本発明の医薬組成物の投与による予防または治療を受けている患者に、公知の抗肥満薬を投与することを特徴とする、肥満もしくは肥満関連疾患の予防もしくは治療または肥満における体重管理の方法。 公知の抗肥満薬としては、食欲抑制作用を有する化合物（選択的セロトニン再取り込み阻害剤等）、栄養素の消化吸収抑制作用を有する化合物（α‐グルコシダーゼ阻害剤；ＳＧＬＴ−２阻害剤等）、脂肪吸収抑制作用を有する化合物（リパーゼ阻害剤；胆汁酸吸着レジン等）、５ＨＴトランスポーター阻害剤、ＮＥトランスポーター阻害剤、ＣＢ−１アンタゴニスト／インバースアゴニスト、グレリンアンタゴニスト、Ｈ３アンタゴニスト／インバースアゴニスト、ＭＣＨ Ｒ１アンタゴニスト、ＭＣＨ Ｒ２アゴニスト／アンタゴニスト、ＮＰＹ Ｙ１受容体 アンタゴニスト、ＮＰＹ Ｙ２受容体アゴニスト、ＮＰＹ Ｙ４受容体アゴニスト、ＮＰＹ Ｙ５受容体アンタゴニスト、ｍＧｌｕＲ５アンタゴニスト、レプチン、レプチンアゴニスト、レプチン誘導体、オピオイドアンタゴニスト、オレキシンアンタゴニスト、ＢＲＳ３アゴニスト、ＣＣＫ−Ａアゴニスト、ＣＮＴＦ、ＣＮＴＦアゴニスト、ＣＮＴＦ誘導体、ＧＨＳアゴニスト、５ＨＴ２Ｃアゴニスト、Ｍｃ４ｒアゴニスト、モノアミン再取り込み阻害剤、ＧＬＰ−１アゴニスト、ＵＣＰ−１、２および３活性剤、β３アゴニスト、甲状腺ホルモンβアゴニスト、ＰＤＥ阻害剤、ＦＡＳ阻害剤、ＤＧＡＴ１阻害剤、ＤＧＡＴ２阻害剤、ＡＣＣ２阻害剤、グルココルチコイドアンタゴニスト、アシル−エストロゲン、脂肪酸トランスポーター阻害剤、ジカルボン酸トランスポーター阻害剤等を含有する医薬組成物が挙げられる。 本発明の医薬組成物をＩＩ型糖尿病の予防または治療のために用いる場合、他の１もしくは複数の公知のＩＩ型糖尿病治療薬と組み合わせて用いることもできる。 公知のＩＩ型糖尿病治療薬としては、インスリン分泌促進薬（例えば、スルホニル尿素（SU）薬）、速効型インスリン分泌促進薬（例えば、フェニルアラニン誘導体薬）、ブドウ糖吸収阻害薬（例えば、αグルコシダーゼ阻害薬（αＧＩ薬））、インスリン抵抗性改善薬（例えば、ビグアナイド系薬剤（ＢＧ薬）、チアゾリジン系誘導体（ＴＺＤ薬））、インスリン製剤、ペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰ−ＩＶ）阻害薬、ＧＬＰ−１受容体アゴニスト、１型ナトリウム依存性グルコース輸送体（ＳＧＬＴ１）阻害薬、２型ナトリウム依存性グルコース輸送体（ＳＧＬＴ２）阻害薬等を含有する医薬組成物が挙げられる。 本発明の医薬組成物と他の薬剤とを組み合わせて用いる場合、投与時期は限定されず、投与対象に対し、同時に投与してもよいし、時間差をおいて投与してもよい。さらに、本発明の医薬組成物と該他の薬剤とは、それぞれの活性成分を含む複数の製剤として投与されてもよいし、両方の活性成分を含む単一の製剤として投与されてもよい。 以下に本発明の実施例および参考例、ならびに試験例を挙げて本発明をさらに詳しく説明するが、本発明はこれらにより限定されるものではない。実施例１：オリゴヌクレオチド合成 本発明に関連するオリゴヌクレオチドは、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ ２２， １８５９-１８６２ （１９８１）、国際公開第２０１１／０５２４３６号等に記載される方法によって合成した。 ＬＮＡ、アミドＢＮＡを含有する１０ｍｅｒ〜２０ｍｅｒのオリゴヌクレオチドは、核酸自動合成機（ｎＳ−８型、（株）大日本精機製）を用いて、０．２μｍｏｌスケールで合成した。鎖長の伸長は標準的なホスホロアミダイトプロトコール（固相担体：ＣＰＧレジン、硫化はＤＤＴ（３Ｈ−１，２−Ｂｅｎｚｏｄｉｔｈｉｏｌｅ−３−ｏｎｅ， １，１−ｄｉｏｘｉｄｅ）等を使用）にて実施し、末端の５´位の水酸基がＤＭＴｒ（ジメトキシトリチル）基で保護され、かつ３´位が固相に担持されたオリゴヌクレオチドを得た。続いて、酸処理により、ＤＭＴｒ基を除去した後、塩基処理することにより、目的物を固相担体から切り出した。希酸にて中和後、溶媒を留去し、得られた粗生成物をゲルろ過カラムクロマト、逆相ＨＰＬＣにて精製することにより目的物を得た。 また、本発明のＮｅｇａｔｉｖｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ（ＮＣ）として、ＡＣＳＬ１と５塩基以上のミスマッチを持つ配列として、表１のように設計した。表１の配列中、大文字はＬＮＡを表す。小文字はＤＮＡを表す。ヌクレオシド間の結合は、オリゴヌクレオチド全体を通してホスホロチオエート（Ｐ＝Ｓ）である。実施例２：ヒトアンチセンスオリゴヌクレオチド配列 アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＯＮ）を、ヒトＡＣＳＬ１（ＧｅｎＢａｎｋ：ＮＭ_００１９９５、配列番号１）を標的とするよう設計した。オリゴヌクレオチド配列を表２〜５に示す。 表２〜５の配列中、大文字はＬＮＡを表す。小文字はＤＮＡを表す。ヌクレオシド間の結合は、オリゴヌクレオチド全体を通してホスホロチオエート（Ｐ＝Ｓ）である。実施例３：マウスアンチセンスオリゴヌクレオチド配列 アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＯＮ）を、マウスＡｃｓｌ１（ＧｅｎＢａｎｋ：ＮＭ_００７９８１、配列番号：３）を標的とするよう設計した。オリゴヌクレオチド配列を表６〜１０に示す。 表６〜１０の配列中、大文字はＬＮＡを表す。小文字はＤＮＡを表す。ヌクレオシド間の結合は、オリゴヌクレオチド全体を通してホスホロチオエート（Ｐ＝Ｓ）である。実施例４：インビトロモデル 細胞培養 細胞を、以下に記載される適当な培地で培養し、３７℃、９５〜９８％湿度および５％ＣＯ２で維持した。 ＨｅｐＧ２：ヒト肝ガン由来細胞株ＨｅｐＧ２は、ＤＭＥＭ Ｈｉｇｈ ｇｌｕｃｏｓｅ（Ｓｉｇｍａ）＋１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）＋Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ Ａｎｔｉｍｙｃｏｔｉｃ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（１０ｍＬ／Ｌ）で培養した。 Ｈｅｐａ１ｃ１ｃ７：マウス肝ガン由来細胞株Ｈｅｐａ１ｃ１ｃ７は、α−ＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ）＋１０％ ＦＢＳ＋Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ Ａｎｔｉｍｙｃｏｔｉｃ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（１０ｍＬ／Ｌ）で培養した。実施例５：ＡＣＳＬ１に対するアンチセンスオリゴヌクレオチドの評価（１）ｍＲＮＡ発現量変化による評価 本実施例では、ヒトまたはマウスのＡＣＳＬ１の塩基配列をもとに設計したアンチセンスオリゴヌクレオチドの有効性を実証した。 実施例２および３記載の通り、アンチセンスオリゴヌクレオチドを設計し、製造し、ヒトＨｅｐＧ２細胞およびマウスＨｅｐａ１ｃ１ｃ７細胞でノックダウン実験を行った。 作製したＬＮＡ型ＧａｐｍｅｒアンチセンスオリゴヌクレオチドおよびＮｅｇａｔｉｖｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ（ＮＣ、配列番号５）を用いて、ヒトＨｅｐＧ２細胞およびマウスＨｅｐａ１ｃ１ｃ７細胞でのノックダウン実験を行った。ヒトＨｅｐＧ２細胞において、ＬＮＡ型ＧａｐｍｅｒアンチセンスオリゴヌクレオチドはＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ＬＴＸ試薬(ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ)を用いて細胞導入し、細胞培養液にアンチセンスオリゴヌクレオチドの最終濃度５ｎＭまたは２０ｎＭとなるように添加した。マウスＨｅｐａ１ｃ１ｃ７細胞においては、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ＲＮＡｉＭＡＸ試薬(ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ)を用いて細胞導入し、細胞培養液にアンチセンスオリゴヌクレオチドの最終濃度が２０ｎＭとなるように添加した。導入２４時間後にＦａｓｔｌａｎｅ(ＱＩＡＧＥＮ)にて細胞を回収し定量的ＰＣＲを行った。内在性コントロールとしてＧＡＰＤＨを使用した。 ヒトＡＣＳＬ１の発現量を測定するために使用したプライマー配列は、Ｆｗプライマー：ＧＣＡＧＣＧＧＣＡＴＣＡＴＣＡＧＡＡＡＣ（配列番号１５７）；Ｒｖプライマー：ＴＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＣＧＧＡＣＴＣ（配列番号１５８）を用い、ヒトＧＡＰＤＨの発現量を測定するために使用したプライマー配列は、Ｆｗプライマー：ＧＣＡＣＣＧＴＣＡＡＧＧＣＴＧＡＧＡＡＣ（配列番号１５９）；Ｒｖプライマー：ＴＧＧＴＧＡＡＧＡＣＧＣＣＡＧＴＧＧＡ（配列番号１６０）を用いた。 マウスＡｃｓｌ１の発現量を測定するために使用したプライマー配列は、Ｆｗプライマー：ＡＧＧＴＧＣＴＴＣＡＧＣＣＣＡＣＣＡＴＣ（配列番号１６１）；Ｒｖプライマー：ＡＡＡＧＴＣＣＡＡＣＡＧＣＣＡＴＣＧＣＴＴＣ（配列番号１６２）を用い、マウスＧａｐｄｈの発現量を測定するために使用したプライマー配列は、Ｆｗプライマー：ＴＧＴＧＴＣＣＧＴＣＧＴＧＧＡＴＣＴＧＡ（配列番号１６３）；Ｒｖプライマー：ＴＴＧＣＴＧＴＴＧＡＡＧＴＣＧＣＡＧＧＡＧ（配列番号１６４）を用いた。 結果を表１１、１２および図１に示す。表１１には、ＧＡＰＤＨで正規化したマウスＨｅｐａ１ｃ１ｃ７細胞におけるＡＣＳＬ１のｍＲＮＡ減少量を、未処理細胞に対する割合をノックダウン効率として示した。表１１中のＮＣはＮｅｇａｔｉｖｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ、Ｎ．Ｄ．は、ＡＣＳＬ１のｍＲＮＡ減少量が検出限界以下である、あるいはｍＲＮＡ量を増加させており、ＡＣＳＬ１を抑制していないことを意味する。表１２には、ＧＡＰＤＨで正規化したヒトＨｅｐＧ２細胞におけるＡＣＳＬ１のｍＲＮＡ減少量を、未処理細胞に対する割合をノックダウン効率として示した。表１２中のＮＣはＮｅｇａｔｉｖｅ Ｃｏｎｔｒｏｌを意味する。図１には、ヒトＨｅｐＧ２細胞における５ｎＭおよび２０ｎＭでのノックダウン効率を示した。 この結果、本発明アンチセンスオリゴヌクレオチドは、他のアンチセンスオリゴヌクレオチドと比較して、ＨｅｐＧ２細胞および／またはＨｅｐａ１ｃ１ｃ７細胞に対して、優れたノックダウン活性を示した。 ＨｅｐＧ２細胞とＨｅｐａ１ｃ１ｃ７細胞の両細胞において、共に未処理細胞に対して７５％以上のノックダウン効率を示した配列をヒトとマウスの異種間で交差性を有する配列とすると、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＯＮ）番号１、４、５、６、１５、１７、１８、４２、４３、５０、５１、５５、５６、５７、５８、６２、６３、６４、６５、７４、７５、７６、７７、１１４、１１５、１１６、１１７は種間交差性を有することを見出した。なおアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＯＮ）番号４２と５０、４３と５１、５５と６２、５６と６３、５７と６４、５８と６５、７４と１１４、７５と１１５、７６と１１６、７７と１１７はそれぞれヒトとマウスのＡＣＳＬ１遺伝子の同部分に対する配列として設計している。ヒトとマウスにおいて同一の配列であっても、共にノックダウン活性を示すとは限らないことから、共にノックダウン活性を示した上記配列は、創薬上非常に有用である。（２）他のＡＣＳＬファミリーとの交差性評価 本実施例では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドのノックダウン効果において、ＡＣＳＬ１以外のＡＣＳＬファミリーであるＡＣＳＬ３およびＡＣＳＬ５との交差性を評価した。 （１）記載の方法により回収したサンプルに対して定量的ＰＣＲを行った。内在性コントロールとしてＧＡＰＤＨを使用した。 ヒトＡＣＳＬ３の発現量を測定するために使用したプライマー配列は、Ｆｗプライマー：ＡＴＡＣＧＧＧＣＴＣＡＣＴＧＡＡＴＣＴＧＣＴＧ（配列番号１６５）；Ｒｖプライマー：ＡＧＣＡＡＡＣＴＡＡＴＧＧＴＧＣＴＣＣＣＡＣＴＣ（配列番号１６６）を用い、ヒトＡＣＳＬ５の発現量を測定するために使用したプライマー配列は、Ｆｗプライマー：ＧＧＡＡＣＴＣＴＧＡＡＧＡＴＣＡＴＣＧＡＣＣＧＴＡ（配列番号１６７）；Ｒｖプライマー：ＣＴＧＴＧＴＣＡＧＧＡＡＣＣＡＣＣＡＣＴＣＣＴＡ（配列番号１６８）を用いた。 マウスＡｃｓｌ３の発現量を測定するために使用したプライマー配列は、Ｆｗプライマー：ＧＣＡＡＣＡＡＣＧＣＡＧＣＧＡＴＴＣＡ（配列番号１６９）；Ｒｖプライマー：ＡＧＣＡＡＡＣＴＡＡＴＧＧＴＧＣＴＣＣＣＡＣＴＣ（配列番号１７０）を用い、マウスＡｃｓｌ５の発現量を測定するために使用したプライマー配列は、Ｆｗプライマー：ＣＡＴＴＣＧＧＣＧＧＧＡＣＡＧＴＴＴＧ（配列番号１７１）；Ｒｖプライマー：ＡＴＣＣＣＡＴＴＧＣＡＧＣＣＣＴＧＡＡＧ（配列番号１７２）を用いた。 結果を表１３および１４に示す。表１３には、ＧＡＰＤＨで正規化したマウスＨｅｐａ１ｃ１ｃ７細胞におけるＡＣＳＬ３またはＡＣＳＬ５のｍＲＮＡ減少量を、未処理細胞に対する割合をノックダウン効率として示した。表１４には、ＧＡＰＤＨで正規化したヒトＨｅｐＧ２細胞におけるＡＣＳＬ３またはＡＣＳＬ５のｍＲＮＡ減少量を、未処理細胞に対する割合をノックダウン効率として示した。表１３または１４中のＮ．Ｄ．は、ＡＣＳＬ３またはＡＣＳＬ５のｍＲＮＡ減少量が検出限界以下である、あるいはｍＲＮＡ量を増加させており、ＡＣＳＬ３またはＡＣＳＬ５を抑制していないことを意味する。 この結果、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＡＣＳＬ１を抑制するが、ＡＣＳＬ３およびＡＣＳＬ５を抑制しないことが確認された。（３）タンパク質発現量変化による評価 本実施例では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドおよびｎｅｇａｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ（配列番号５）に対して、ＨｅｐＧ２細胞におけるＡＣＳＬ１タンパク質の発現量変化によるノックダウン活性評価を行った。また、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドおよびＮｅｇａｔｉｖｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ（配列番号５）に対して、ＨｅｐＧ２細胞におけるＡＣＳＬファミリー特異性の評価を行った。 （１）記載の方法により細胞にアンチセンスオリゴヌクレオチドをトランスフェクションし、４８時間後にＲＩＰＡ ｂｕｆｆｅｒ（Ｓｉｇｍａ）にて細胞を回収し、ウェスタンブロッティング法にてタンパク質の検出を行った。コントロールとしてβ−ａｃｔｉｎの検出を行った。 ＡＣＳＬ１の１次抗体はｒａｂｂｉｔ ａｎｔｉ ＡＣＳＬ１ ａｎｔｉｂｏｄｙ（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）、２次抗体はＥＣＬTM Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ−ｌａｂｅｌｅｄ ａｎｔｉ−ｒａｂｂｉｔ ａｎｔｉｂｏｄｙ （ＧＥ）を用いた。 ＡＣＳＬ３の１次抗体はｒａｂｂｉｔ ａｎｔｉ ＡＣＳＬ３ ａｎｔｉｂｏｄｙ （Ｐｒｏｔｅｉｎｔｅｃｈ）、２次抗体はＥＣＬTM Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ−ｌａｂｅｌｅｄ ａｎｔｉ−ｒａｂｂｉｔ ａｎｔｉｂｏｄｙを用いた。 ＡＣＳＬ５の１次抗体はｒａｂｂｉｔ ａｎｔｉ ＡＣＳＬ５ ａｎｔｉｂｏｄｙ （Ｐｒｏｔｅｉｎｔｅｃｈ）、２次抗体はＥＣＬTM Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ−ｌａｂｅｌｅｄ ａｎｔｉ−ｒａｂｂｉｔ ａｎｔｉｂｏｄｙを用いた。 β−ａｃｔｉｎの１次抗体はｍｏｕｓｅ ａｎｔｉ β−ａｃｔｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ（Ｓｉｇｍａ）、２次抗体はＥＣＬTM Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ−ｌａｂｅｌｅｄ ａｎｔｉ−ｍｏｕｓｅ ａｎｔｉｂｏｄｙ （ＧＥ）を用いた。 結果を図２、図３に示す。図２には、ＡＣＳＬ１に対するノックダウン効果を示した。この結果、ＡＯＮ番号１、４、５、６、４３、５５、５６、５７は最終濃度５ｎＭで、タンパク質レベルでもノックダウン効果を示すことを見出した。図３には、ＡＣＳＬ３、ＡＣＳＬ５に対する交差性の評価結果を示した。この結果、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、タンパク質レベルでも、ＡＣＳＬ１を抑制するが、ＡＣＳＬ３およびＡＣＳＬ５は抑制しないことを見出した。 以上の実施例から明らかなように、本発明アンチセンスオリゴヌクレオチドはＡＣＳＬ１発現抑制活性を示す。従って、本発明化合物は肥満症（肥満症における体重管理も含む）、肥満関連疾患、糖尿病（特に、ＩＩ型糖尿病）、シンドロームＸ、心臓血管障害または癌（乳癌、結腸癌、大腸癌、卵巣癌、肺癌等）の等の予防または治療のための医薬として非常に有用である。ストリンジェントな条件で、配列番号１の９５位〜１０９位、１７６位〜１９２位、４６７位〜４８４位、９４０位〜９５４位、１０１７位〜１０３２位、１１０２位〜１１１６位、１１７６位〜１１９７位、１２２２位〜１２３６位、１７２７位〜１７４３位、１８５８位〜１８７３位、１９４６位〜１９６０位、２２９４位〜２３０８位、２３６０位〜２３７７位、２４４９位〜２４６９位、２６０５位〜２６２４位、２６８９位〜２７０３位、２９５０位〜２９６４位、３４２４位〜３４３８位または３５９１位〜３６０５位からなる配列にハイブリダイズ可能な配列を含む、アンチセンスオリゴヌクレオチド。ＡＣＳＬ１の発現を抑制する、請求項１記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。長さが１３〜１９塩基である、請求項１または２記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。配列番号６〜１１、１３〜１８、２０〜２２、２４〜３０、３２、３５〜３７、４６、４８、４９、５２〜５４、５７〜５９、６４〜６８もしくは７０の配列、または、配列番号６〜１１、１３〜１８、２０〜２２、２４〜３０、３２、３５〜３７、４６、４８、４９、５２〜５４、５７〜５９、６４〜６８もしくは７０の配列において、１もしくは数個の塩基が欠失もしくは置換された配列を含む、請求項１〜３いずれかに記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。配列番号６〜１１、１３〜１８、２０〜２２、２４〜３０、３２、３５〜３７、４６、４８、４９、５２〜５４、５７〜５９、６４〜６８もしくは７０の配列、または、配列番号６〜１１、１３〜１８、２０〜２２、２４〜３０、３２、３５〜３７、４６、４８、４９、５２〜５４、５７〜５９、６４〜６８もしくは７０の配列において、１もしくは数個の塩基が欠失、置換もしくは付加された配列からなる、請求項４記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。請求項１〜５のいずれかに記載のアンチセンスオリゴヌクレオチドを含有する医薬組成物。ＡＣＳＬ１が関連する疾患の予防または治療のために用いる、請求項６記載の医薬組成物。該疾患が、肥満症またはＩＩ型糖尿病である、請求項７記載の医薬組成物。 【課題】ＡＣＳＬ１発現抑制活性を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。【解決手段】ヒトＡＣＳＬ１の９５位〜１０９位、１７６位〜１９２位、４６７位〜４８４位、９４０位〜９５４位、１０１７位〜１０３２位、１１０２位〜１１１６位、１１７６位〜１１９７位、１２２２位〜１２３６位、１７２７位〜１７４３位、１８５８位〜１８７３位、１９４６位〜１９６０位、２２９４位〜２３０８位、２３６０位〜２３７７位、２４４９位〜２４６９位、２６０５位〜２６２４位、２６８９位〜２７０３位、２９５０位〜２９６４位、３４２４位〜３４３８位または３５９１位〜３６０５位の配列に相補的な配列を含む、アンチセンスオリゴヌクレオチドが優れたＡＣＳＬ１発現抑制活性を有することを見出した。該ＡＣＳＬ１に対するアンチセンスオリゴヌクレオチドを有効成分として含む医薬組成物は、肥満症またはＩＩ型糖尿病の予防または治療に有用である。【選択図】なし配列表