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| タイトル： | 特許公報(B2)_小麦グルテン由来アミラーゼインヒビターの製造方法 |
| 出願番号： | 1995353476 |
| 年次： | 2005 |
| IPC分類： | 7,C07K14/415,C07K1/14,C07K1/30,C07K1/34,A61K38/55,A61P3/04,A61P3/10 |
特許情報キャッシュ
前田 吉宏 村山 隆二 JP 3711474 特許公報(B2) 20050826 1995353476 19951227 小麦グルテン由来アミラーゼインヒビターの製造方法 長田産業株式会社 391029336 手島 孝美 100071434 石井 久夫 100091465 前田 吉宏 村山 隆二 20051102 7 C07K14/415 C07K1/14 C07K1/30 C07K1/34 A61K38/55 A61P3/04 A61P3/10 JP C07K14/415 C07K1/14 C07K1/30 C07K1/34 A61K37/64 A61P3/04 A61P3/10 7 C07K 14/415 C07K 1/14 C07K 1/30 C07K 1/34 A61K 38/55 A61P 3/04 A61P 3/10 CA/BIOSIS/MEDLINE/WPIDS(STN) 米国特許第３９４４５３７（ＵＳ，Ａ） 特開平１−１５７３８５（ＪＰ，Ａ） 6 1997176191 19970708 12 20021105 坂崎 恵美子 【０００１】【発明の属する技術分野】この発明は小麦グルテン由来アミラーゼインヒビターの製造方法に関し、特に高力価のアミラーゼインヒビターを多大な設備を必要とせずに安価に製造できるようにした方法に関する。【０００２】【従来の技術】最近の食生活の向上に伴い、肥満、糖尿病等の代謝性疾患が増加する傾向にある。かかる肥満や代謝性疾患の予防及び治療には澱粉を糖に分解するアミラーゼの活性を阻害し、必要な栄養を摂取しても血糖値の上昇を抑制する作用を有するアミラーゼインヒビター（以下、ＡＩという）が有効であることが報告され、小麦中にもＡＩが含まれていることが報告されて以来、小麦由来ＡＩの製造方法が種々提案されている。【０００３】例えば、▲１▼小麦又は小麦グルテンからＡＩをアルコールで抽出する方法（特開昭４６−１８３３号公報、特開平４ー６６５９９号公報、等参照）、▲２▼小麦、小麦粉又は小麦グルテンの水、酸又はアルカリによる抽出液、あるいは小麦粉等から澱粉を製造した後の小麦澱粉廃液（以下、抽出液等という）をＵＦ膜で濃縮した後、乾燥させる方法（特開平２ー１５７２９６号公報、等参照）、▲３▼上記抽出液等から吸着剤（多糖類）でＡＩを吸着し、吸着剤を分離除去した後、ＵＦ膜で濃縮する方法（特開平５−２１３５５０号公報、等参照）等が知られている。【０００４】【発明が解決しようとする課題】しかし、アルコール抽出法▲１▼は抽出に多量のアルコールを必要とし、抽出後の残物の処理に多大な費用を要し、大量生産には不向きであった。【０００５】また、抽出液等の濃縮方法▲２▼はＵＦ膜を単独で用いているので、阻害活性の低いＡＩしか得られず、又多量の液の処理のためにＵＦ膜装置のコストは多大なものになるという問題があった。【０００６】さらに、抽出液より吸着剤を利用して分離、溶出、さら濃縮、精製する方法▲３▼は高力価のＡＩが得られものの、吸着剤コスト及びＵＦ膜装置等の設備コストが多大であり、しかも処理に長い時間を要して製造中の腐敗等も問題となり、これを防ぐ設備がさらにコスト高を招来していた。【０００７】本発明は、かかる状況において、高力価のＡＩを多大な設備を必要とせずに安価に製造できるようにした小麦グルテン由来ＡＩの製造方法を提供することを課題とする。【０００８】【課題を解決するための手段】本件発明者は上述の課題を解決すべく種々研究を重ねたところ、小麦グルテンが中性で水に溶けないことから、アルコール、酸、アルカリによる抽出を採用していたが、小麦グルテンにアルカリ水を加えて可溶化し、塩類を加えるとグルテンを不溶化してＡＩ含有液から分離でき、かかるＡＩ含有液のｐＨを中性又は酸性に調整すると、ＡＩ混合物を沈澱物として回収できること知見し、本発明を完成するに至った。【０００９】即ち、本発明の特徴は、小麦グルテンに加水するとともにアルカリ剤を加えてｐＨを８〜１１に調整することにより小麦グルテンを可溶化した後、塩類を加えることによりグルテンを不溶化してＡＩ含有液から分離する第１の工程；第１の工程で得られたＡＩ含有液のｐＨを中性又は酸性に調整することよりＡＩ混合物を沈澱物として回収する第２の工程；を含むＡＩの回収方法にある。【００１０】第１の工程は小麦グルテンを可溶化させた後、ＡＩとグルテンとを分離する処理である。小麦グルテンの可溶化は小麦グルテンに水とアルカリ剤とを加え、分散機を用いて行うのがよい。小麦グルテンへの加水は生グルテン（水分を６７％含む）において０．５〜１０容量倍、粉末グルテン（バイグル）では２．５〜３０容量倍が適当である。【００１１】ＡＩとグルテンの分離は小麦グルテン溶液に塩類を加え、グルテンを不溶化し、遠心分離又はフィルタープレス等の濾過にて除去する。アルカリ剤はＮａＯＨ、ＮＨ4ＯＨ等を用い、ｐＨを８〜１１に調整する。その時の液の温度は２５〜５０℃が好ましい。塩類はＮａＣｌ、( ＮＨ4)2ＳＯ4 等を用いることができ、０．１〜１０重量％、好ましくは１〜６重量％を加える。【００１２】第２の工程はグルテンの分離されたＡＩ含有液からＡＩ混合物を回収する処理である。これはＡＩ含有液を中性又は酸性、具体的にはｐＨ２〜８、好ましくは３．５〜５．５に調整することにより沈澱させてＡＩ混合物を回収できる。その際、必要に応じてさらに塩類を０．１〜１０重量％加えてもよい。【００１３】グルテンの分離されたＡＩ含有液はそのまま第２の工程で処理してもよいが、例えば（実施例１での）遠心分離後のＡＩ含有液には約１．５％の蛋白質がまだ含まれている。そこで、ＡＩ含有液を中性又は酸性、具体的にはｐＨ４．５〜７．５に調整した後、４５〜９０℃に加熱すると、不要な蛋白質がゲル化し、これを遠心分離や濾過で除去すると、ＡＩ含有液中の蛋白質が約０．６％になり、かなりの不純物を除去できる。【００１４】グルテンを分離した後の液、即ちＡＩ含有液はそのｐＨを２〜８、好ましくは３．５〜５．５に調整し、５〜１５℃に冷却して放置すると、ＡＩ混合物の沈澱物を得ることができる。【００１５】これに代え、グルテンの分離されたＡＩ含有液をｐＨ４．５〜７．５に調整した後、４５〜９０℃に加熱し、加熱変成物を除去した後、５〜１５℃に冷却して放置してもＡＩ混合物の沈澱物を得ることができる。【００１６】さらに、４５〜９０℃に加熱し、加熱変成物を除去した後のＡＩ含有液をｐＨ５．０に調整した後、３０〜５０℃に保温した状態にてＵＦ膜で濃縮を行い、ｐＨを調整した後、濾過して不溶物を回収し、又は５〜１５℃に冷却して放置し、ＡＩ混合物の沈澱物を回収してもよい。【００１７】また、グルテンの分離されたＡＩ含有液、又は加熱し、加熱変成物を除去した後のＡＩ含有液のｐＨを２〜８、好ましくは３．５〜５．５に調整した後、珪藻土等の濾過材を添加して液温を５〜２５℃に冷却した後、ＡＩ混合物の沈澱を待たずに遠心分離又は濾過にてＡＩ混合物を不溶物として回収することができる。【００１８】即ち、本発明によれば、小麦グルテンに加水するとともにアルカリ剤を加えてｐＨを８〜１１に調整することにより小麦グルテンを可溶化した後、塩類を加えることによりグルテンを不溶化してＡＩ含有液から分離する第１の工程；グルテン分離後のＡＩ含有液のｐＨを中性又は酸性に調整し、或いは中性、弱酸性にして加熱処理して加熱変成物を除去した液のｐＨを中性又は酸性に調整し、珪藻土等の濾過材を添加して遠心分離又は濾過にてＡＩ混合物を不溶物として回収する第２’の工程；を含むＡＩの回収方法を提供できる。【００１９】得られたＡＩ混合物の沈澱物又は不溶物は不純物を含むので、精製するのがよい。即ち、本発明によれば、沈澱物又は不溶物として回収されたＡＩ混合物に蛋白分解酵素（プロテアーゼ）を作用させ、ＡＩ混合物を可溶化させて不溶物を除去する第３の工程；を含むＡＩの精製方法を提供できる。【００２０】また、本発明によれば、沈澱物又は不溶物として回収されたＡＩ混合物に含水アルコールを加えてアルコール濃度を５〜８０％に調整し、ＡＩ混合物を可溶化させて不溶物を除去する第３’の工程；を含むＡＩの精製方法を提供できる。不溶物は遠心分離又は濾過にて除去でき、水溶性のＡＩが得られる。【００２１】精製されたＡＩ混合物は乾燥工程で乾燥する。乾燥作業には凍結乾燥、真空乾燥、スプレー乾燥等が採用できる。【００２２】【作用及び発明の効果】小麦グルテンをアルカリ分散（必ずしも水に溶けているとは言えない）させた後、塩類を添加することにより、小麦グルテンとＡＩとが分離可能となり、グルテンは浮上又は沈澱して回収でき、そのまま又は中和し、水洗後、公知のグルテン加工工程へ供される。【００２３】グルテンの分離されたＡＩ含有液はｐＨが中性又は酸性領域でその活性値の３０〜９０％が容易に沈澱物（固形物４０〜５０％）として、又は簡単な遠心分離や濾過で回収でき、しかも高阻害活性である。この工程には、吸着に高価な薬品を要せず、分離濃縮に複雑な処理工程、従って高価な設備を必要としない点で従来の方法よりも優れ、しかも抽出に用いた小麦グルテンも利用可能である。【００２４】従って、本発明によれば、高力価のＡＩを多大な設備を必要とせずに安価に製造できることとなる。【００２５】【発明の実施の形態】〔実施例１〕小麦粉（日清製粉社製：銀杏）１０ｋｇに水６リットルを加え、ドウを形成した後、６０リットルの水で水洗し、澱粉乳液５５リットル、グルテン５ｋｇに分離した。ミキサー（特殊機化工業社製：Ｔ．Ｋ．ユニミクサー）付きの３０リットル容器へ１５リットル水を入れ、ミートチョッパーでグルテンを小さく刻んで出しながら、適宜ＮａＯＨを添加し、最終ｐＨを１０．０に調整した。１時間の攪拌の後、１５％食塩水を１リットル添加し、１０分間攪拌した後、停止した。３時間経過した後、グルテンは浮上して固まりとして容易に回収でき、５ｋｇのグルテンと、１６リットルの溶液を得た。【００２６】１６リットルの液中の澱粉を遠心分離（ラボ用２リットル／日 １０００Ｇ）で除去した後、ｐＨを５．５に調整し、２０リットルのアルミ鍋で８０℃で１０分間加熱処理し、生じた不溶物を上記遠心分離機で除去した。かかる後に、１５．５リットルのグルテンＡＩ抽出液を得た。【００２７】この抽出液のヒトすい液（Ｈ．Ｐ）及びヒト唾液（Ｈ．Ｓ）のα−アミラーゼに対する阻害活性は３２０Ｕ／ｍｌ、４５０Ｕ／ｍｌであった。【００２８】この溶液にＮａＣｌを１５０ｇ入れて溶解した後、ＨＣｌにてｐＨ４．０に調整し、２０リットルバケツにて３〜５℃で一昼夜放置した。バケツ上澄液を除去し、底部に付着する粘着物３２ｇを得た。上澄液の残存ＡＩ活性はＨ．Ｐが３２Ｕ／ｍｌ、Ｈ．Ｓが６０Ｕ／ｍｌであった。【００２９】回収固形物の固形分は４２％、ＡＩ活性はＨ．Ｐが１３９Ｕ／ｍｇ、Ｈ．Ｓが１２３Ｕ／ｍｇであった。この固形物を研究用凍結乾燥機で乾燥し、約１４ｇの乾燥ＡＩを得た。最終品はＨ．Ｐが３２０Ｕ／ｍｇ、Ｈ．Ｓが２９０Ｕ／ｍｇの高力値の阻害活性を有していた。【００３０】〔実施例２〕オーストリア産バイタルグルテン（乾燥グルテン）１０ｋｇを、２００リットル容器中のアンモニア水を混合した液１００リットルに、少しづつ分散溶解して、ｐＨを９．０に調整し、３時間の間攪拌した後、２０％ＮａＣｌ溶液５リットルを加えてグルテンを沈澱させた。３０ｋｇのグルテンと８５リットルの液を得た。【００３１】この液に珪藻土１ｋｇを添加して小型フィルタープレスで澱粉を除去し、続いてｐＨを６．０に調整した後、蒸気を入れて８０℃まで加熱した。加熱変性物は冷却後に珪藻土１ｋｇを添加して小型フィルタープレスで除去し、清澄な８０リットルの液を得た。この液のＡＩ活性はＨ．Ｐが３００Ｕ／ｍｌ、Ｈ．Ｓが３９０Ｕ／ｍｌであった。この液を２万分画ＵＦ膜（日本電工社製）を用いて５倍濃縮を行い、１６リットルの濃縮液を得た。濃縮液のＡＩ活性はＨ．Ｐが１４００Ｕ／ｍｌ、Ｈ．Ｓが１９００Ｕ／ｍｌであった。【００３２】この濃縮液にＮａＣｌを１６０ｇ溶解し、ｐＨを３．５に調整して２０リットルポリバケツにて５℃で一昼夜放置した後、バケツ底部に粘着物１９０ｇを得た。そのＡＩ活性はＨ．Ｐが１０６Ｕ／ｍｇ、Ｈ．Ｓが９２Ｕ／ｍｇで、水分は５５％であった。真空乾燥で乾燥し、９０ｇの乾燥物を得た。そのＡＩ活性はＨ．Ｐが２２０Ｕ／ｍｇ、Ｈ．Ｓが２００Ｕ／ｍｇであった。【００３３】〔実施例３〕実施例１と同様にして回収粘着物３２ｇを得た。これに対して３容量倍の含水エチルアルコールを入れて混合物中アルコール濃度を５０％とし、１時間攪拌した後、遠心分離機（１０００Ｇ、３０分）で不溶物を分離し、上澄液１１０ｍｌを回収した。【００３４】この上澄液を凍結乾燥機で乾燥して１２ｇの乾燥物を得た。この乾燥物のＡＩ活性はＨ．Ｓが３６０Ｕ／ｍｇ、Ｈ．Ｐが３２０Ｕ／ｍｇであり、中性の水に可溶なものとなった。【００３５】〔実施例４〕実施例２と同様の操作を用いて１９０ｇの粘着物を得た。この粘着物を０．１ＮのＮａＯＨを用いてｐＨ６．５に中和した後、プロテアーゼ（阪急共栄物産社製：９０Ｎ）を４０ｍｇ添加混合し、３７℃で１時間放置した。その後、プロテアーゼの失活を行うため、０．１ＮのＨＣｌでｐＨ３．０に調整した後、５０℃で３０分の処理を行った。その後、水を添加して総量を４００ｇとし、０．１ＮのＮａＯＨでｐＨを６．５に調整した。【００３６】この液を遠心分離機（１０００Ｇ、３０分間）で分離した後、真空乾燥機で乾燥を行い、７６ｇの乾燥物を得た。そのＡＩ活性はＨ．Ｓ２６４Ｕ／ｍｇ、Ｈ．Ｐが２９０Ｕ／ｍｇであった。この乾燥物は中性の液に可溶であった。【００３７】〔実施例５〕実施例２と同様にして得られた加熱処理液８０リットルに１．６ｋｇのＮａＣｌを溶解した後、２５℃に冷却し、０．１ＮのＨＣｌでｐＨ４．０に調整し、珪藻土７００ｇを混合して小型フィルタープレスにて濁り（放置にて沈澱する物）を回収した。濾過液のＡＩ活性はＨ．Ｓが１１０Ｕ／ｍｌ、Ｈ．Ｐが６０Ｕ／ｍｌで、回収ゲル量１４００ｇ、水分３２％、ゲル当りのＡＩ活性はＨ．Ｓが１６８００Ｕ／ｇ、Ｈ．Ｐが１４４００Ｕ／ｇであった。【００３８】このゲルに水２６００ｍｌを混合し、０．１ＮのＮａＯＨでｐＨ８．０に調整しながら３時間撹拌した後、ブフナーで吸収濾過し、珪藻土を除去した。その液はＨ．Ｓ８９００Ｕ／ｍｌ、Ｈ．Ｐ７８００Ｕ／ｍｌ、容量２７００ｍｌであった。この液１リットルを凍結乾燥後、約４２ｇの乾燥物を得た。この物の活性はＨ．Ｓが２１０Ｕ／ｍｇ、Ｈ．Ｐが１８０Ｕ／ｍｇであった。【００３９】ここで、ＡＩ活性の測定は下記のブルースターチ法(Blue Starch method)を採用した。４ｍｌの水にα・アミラーゼ５０μｌを添加し、３７℃に５分間加熱した後、これにＡＩサンプルを５０μｌを加え、全液中のα・アミラーゼ濃度を０．０１Ｕ／ｍｌとした。その後、３０分間インキュベートを行い、ネオアミラーゼテスト（第一製薬社製）を一錠加えて攪拌し、さらに３０分間インキュベートを行い、０．５ＮのＮａＯＨを１ｍｌ添加して反応停止後、Ｎｏ．６の濾紙で濾過し、６２０ｍｍの吸光度を測定した。【００４０】Ａ．Ｉ．サンプルなしの吸光度が０．６７０、Ａ．Ｉ．サンプルを入れた吸光度が０．３３５となるＡ．Ｉサンプルの希釈倍率を求め、以下計算を行った。ＡＩ活性値＝０．０１（Ｕ／ｍｌ）×１／２（半値）×４１００μｌ／５０μｌ（全体／サンプル）×希釈倍率＝０．４１Ｕ×希釈倍率【００４１】（実験例１）本発明の特徴の１つは小麦グルテンをアルカリ剤にてｐＨを８〜１１に調整して可溶化した後、塩類にてグルテンを不溶化してＡＩ含有液から分離する点にある。そこで、小麦グルテンの溶出時におけるｐＨのＡＩ活性に対する影響を調べた。実験は、５０ｇのバイグル（粉末グルテン）に５００ｍｌの水を加え、ＮａＯＨを添加してｐＨ７〜１１に調整し、バイグルを可溶化した時のＡＩ活性（Ｕ／ｍｌ）を測定した。その結果を図１に示す。また、バイグルを可溶化した後、１％ＮａＣｌを加えてグルテンを不溶化した時のＡＩ活性（Ｕ／ｍｌ）を測定し、その結果を図２に示す。また、それらのＡＩ活性値は表１に示す。【００４２】【表１】【００４３】図１及び図２によれば、ｐＨ１０前後で最も高いＡＩ活性が得られていることが分かる。また、７〜１１の各ｐＨにおいて、バイグル可溶化後、及びグルテン不溶化時のＡＩ活性は多少のバラツキは見られるが、測定作業上の誤差と考えられ、１％ＮａＣｌ添加による影響はないものと考えられる。【００４４】（実験例２）また、本発明の第２の特徴はグルテンの分離されたＡＩ含有液のｐＨを中性又は酸性にしてＡＩ混合物を沈澱物として回収する点にある。そこで、実験例１で得られたｐＨ１０のＡＩ含有液を中性に調整し、４５〜９０℃に加熱処理して不要な蛋白質を不溶化して除去したＡＩ含有液（ＡＳ）、及びそれに１％、３％のＮａＣｌを添加し、これらを５℃に冷却保存した３種類のＡＩ含有液を用い、ｐＨを２．５〜７に調整して各ｐＨにおける上澄液の残存ＡＩ活性を測定し、ｐＨのＡＩ混合物の沈澱量に対する影響を求めた。その結果を図３、図４、図５に、又求めたＡＩ活性値は表２に示す。なお、ＡＩ含有液の阻害活性はＨ．Ｓ６２２Ｕ／ｍｌ、Ｈ．Ｐ４７３Ｕ／ｍｌであり、基準値として示してある。【００４５】【表２】【００４６】図３、図４、図５によれば、ｐＨが６．０又は５．５から沈澱量が急増し、４．５以下のｐＨで多い沈澱量が得られることが分かる。また、ＮａＣｌの影響については加熱処理したＡＩ含有液（ＡＳ）、１％ＮａＣｌ添加ＡＩ含有液、３％ＮａＣｌ添加ＡＩ含有液に顕著な差異は認められなかった。【００４７】次に、本発明方法及び各種製法で得られたＡＩのアミラーゼ阻害効果について調べた。本発明方法は実施例２によって得られたＡＩを使用した。比較ＡＩは下記の比較製法１〜３によって得られたＡＩを使用した。試験は０．９％ＮａＣｌ溶液にＡＩを所定量加えた溶液を十二指腸液、唾液２００μｌに加え、３７℃で３０分間イキュベートし、希釈後、ブルースターチ法で残存アミラーゼ活性を測定した。但し、Ｈ．Ｐ測定用の酵素にはコスモ社のものを、Ｈ．Ｓ測定用の酵素にはシグマ社のものを用いた。その結果を図６及び図７に、それらの活性値を表３（Ｈ．Ｐ）及び表４（Ｈ／Ｓ）に示す。コントロールアミラーゼ活性（ＡＩ添加前の活性）はＨ．Ｐが５４．６Ｕ／ｍｌ、Ｈ．Ｓが１２０Ｕ／ｍｌである。【００４８】（比較製法１）小麦グルテン１部から、エチルアルコール（濃度６５％）１０部を使用して室温でＡＩを抽出した後、０．９％ＮａＣｌ溶液で透析して不溶物を除去し、ＵＦ膜で５倍に濃縮し、凍結乾燥した（特開平４ー６６５９９号参照）。【００４９】（比較製法２）小麦粉１３０Ｋｇに水７０リットルを加えて混練した生地を、１２００リットルの水を用いて洗浄して６５Ｋｇのグルテンと８０Ｋｇの小麦澱粉を回収し、１０００リットルの水洗廃液を得た。この水洗廃液に塩酸を加えてｐＨ３に調整して３０分放置した後、アンモニアでｐＨを６．５に調整すると、不溶物が沈澱したので、沈澱物を除去して上澄液８５０リットルを回収した。この回収した上澄み液にアルギン酸ナトリウム３００ｐｐｍを加えた後、ｐＨを４．２に調整して３０分間撹拌した。その結果、水不溶物を生成したので、この水不溶物をドラバル型遠心分離機を使用して回収した。この回収物をその１０倍量の水に分散させた後、塩化カルシウム０．７６ｋｇを加えてよく撹拌し、アンモニアでｐＨを８．５に調整して１時間静置した。次いで、ドラバル型遠心分離機を使用して固形物を分離除去して上澄み液１００リットルを回収した。【００５０】上記回収した上澄み液を塩酸で中和し、中和液を８０℃に３０分間加熱した後、生成した不溶性物質をドラバル型遠心分離機で分離して上澄み液を回収し、この上澄み液を限外濾過膜〔日東電工株式会社製；ＮＴＵー３２５０ＣＩＲ（ＭＷ：２万）〕を用いて濃縮し、２３リットルの濃縮液を得た。この濃縮液における蛋白質濃度は２５ｍｇ／ｍｌであった。得られた液に対して同時に余剰のカルシウム塩の脱塩を行った。上記で得られた濃縮液２３リットルをアンモニアでｐＨ７．５に調整し、陽イオン交換樹脂（ダイヤイオンＨＰＫー５５：三菱化成株式会社製）２８リットルを充填したカラム（長さ９００ｍｍ、内径２００ｍｍ）に１リットル／分の流速で通液し、陽イオン交換樹脂に吸着せずに溶出した画分を採取した。上記溶出画分をセラミックフィルターを使用して除菌濾過した後、凍結乾燥してＡＩ物質を含有する乾燥粉末２３０ｇを得た（特開平５ー２１３５５０号公報参照）。【００５１】（比較製法３）小麦粉からグルテン及び澱粉を除いた廃液を原料として用いた。この廃液のヒト唾液ＡＩ活性（Ｕ／ｍｇ蛋白）は３．４１、ヒトすい液ＡＩ活性（Ｕ／ｍｇ蛋白）は３．５５であった。この廃液８００リットル内に水蒸気を１５分間導入して９０℃まで加熱し、得られた液９００リットルを連続遠心分離し（３０００Ｇ）、加熱変成物を除去した。得られた透明な上澄液を直に径３μｍ及び１μｍのフィルタで濾過し、透明な液８５０リットルを得、次いで０．２μｍの精密濾過筒を通過せしめて除菌した。その後、限外濾過膜ロミコンＰＭ・１００（膜面積２．５ｍ2 ，２本）を用いて上記溶液を１０倍に濃縮した。濃縮時の温度は７０℃、濃縮膜入口圧は約２Ｋｇ／ｍ2 であり、約３時間循環させた。次いで、濃縮液を噴霧乾燥し、４．１Ｋｇの粉末を得た。生成物のヒト唾液ＡＩ活性（Ｕ／ｍｇ蛋白）は１１．８、ヒトすい液ＡＩ活性（Ｕ／ｍｇ蛋白）は５．０２であった（特開平２ー１５７２３７号公報参照）。【００５２】【表３】【００５３】【表４】【００５４】図６及び図７によれば、本発明法によって得られたＡＩは同一添加量であっても比較製法１〜３によって得られたＡＩに比し、残存アミラーゼ活性が低く、高阻害活性を呈していることが分かる。また、ＡＩ活性（Ｕ／ｍｇ）を求めると、本発明法はＨ．Ｐが２５５、Ｈ．Ｓが２３０であり、比較法１はＨ．Ｐが７２、Ｈ．Ｓが１００、比較法２はＨ．Ｐが２６、Ｈ．Ｓが１０８、比較法３はＨ．Ｐが３．６、Ｈ．Ｓが１０であった。【図面の簡単な説明】【図１】 小麦グルテンの溶出時におけるｐＨとＡＩ活性との関係を示す図である。【図２】 １％ＮａＣｌ添加によるグルテン不溶化時におけるｐＨとＡＩ活性との関係を示す図である。【図３】 図２のｐＨ１０の抽出条件でのＡＩ含有液を用いて、液温５℃、各ｐＨにおける液中残存ＡＩ活性（即ち、ＡＩ混合物の沈澱効果）を示す図である。【図４】 図３のＡＩ含有液にさらに１％ＮａＣｌを添加し、図３と同様の効果を示す図である。【図５】 図３のＡＩ含有液にさらに３％ＮａＣｌを添加し、図３と同様の効果を示す図である。【図６】 本発明法及び比較法１〜３によって得られたＡＩのＨ．Ｐに対する効果を示す図である。【図７】 本発明法及び比較法１〜３によって得られたＡＩのＨ．Ｓに対する効果を示す図である。 小麦グルテンに加水するとともにアルカリ剤を加えてｐＨを８〜１１に調整することにより小麦グルテンを可溶化した後、塩類を加えることによりグルテンを不溶化してアミラーゼインヒビター含有液から分離する第１の工程；第１の工程で得られたアミラーゼインヒビター含有液のｐＨを中性又は酸性に調整することによりアミラーゼインヒビター混合物を沈澱物として回収する第２の工程；を含むアミラーゼインヒビターの回収方法。 小麦グルテンに加水するとともにアルカリ剤を加えてｐＨを８〜１１に調整することにより小麦グルテンを可溶化した後、塩類を加えることよりグルテンを不溶化してアミラーゼインヒビター含有液から分離する第１の工程；第１の工程で得られたアミラーゼインヒビター含有液のｐＨを中性又は酸性に調整し、アミラーゼインヒビター混合物を遠心分離又は濾過にて不溶物として回収する第２’の工程；を含むアミラーゼインヒビターの回収方法。 第１の工程で得られたアミラーゼインヒビター含有液のｐＨを中性又は酸性に調整して加熱することにより不要な蛋白質をゲル化させ、遠心分離又は濾過にて除去した後、第２又は第２’の工程を行ってアミラーゼインヒビター混合物を沈澱物又は不溶物として回収するようにした請求項１又は２記載のアミラーゼインヒビターの回収方法。 請求項１ないし３のいずれかに記載の方法によって沈澱物又は不溶物として回収されたアミラーゼインヒビター混合物に蛋白分解酵素を作用させることよりアミラーゼインヒビター混合物を可溶化させ、不溶物を除去する第３の工程；を含むアミラーゼインヒビターの精製方法。 請求項１ないし３のいずれかに記載の方法によって沈澱物又は不溶物として回収されたアミラーゼインヒビター混合物に含水アルコールを加えてアルコール濃度を５〜８０％に調整することよりアミラーゼインヒビター混合物を可溶化させ、不溶物を除去する第３’の工程；を含むアミラーゼインヒビターの精製方法。 請求項１ないし５のいずれかに記載の方法で得られたものを、凍結乾燥、真空乾燥又はスプレー乾燥にて乾燥する第４の工程を；含むアミラーゼインヒビターの製造方法。